MEDIO MIO: FUNDAMENT, FORBEREDELSE OG ANVENDELSER - BIOLOGI - 2025

The MIO medium er en biokemisk test, der anvendes til hjælp ved identifikation af arter af bakterier tilhørende Enterobacteriaceae-familien. Det er ganske nærende og består af glukose, gærekstrakt, pepton, triptein, L-ornithinhydrochlorid, bromocresol-lilla og agar.

Betydningen af ​​dets forkortelse (MIO) beskriver hver af de parametre, der kan observeres i dette medium; bevægelighed, indol og ornitin. Motilitet er mikroorganismens evne til at bevæge sig på grund af tilstedeværelsen af ​​flagella. For at denne egenskab skal overholdes, skal mediets konsistens være halvfast, så præparatet indeholder mindre agar.

Oversigt over fortolkning af resultater i MIO-mediet. Kilde: Udarbejdet af forfatteren MSc. Marielsa gil

Produktionen af ​​indol viser tilstedeværelsen af ​​enzymet tryptophanase, der virker på aminosyretryptophan, hvilket kræver anvendelse af et afslørende reagens for at synliggøre produktionen af ​​indol.

Endelig bestemmer ornithin, om bakterien er i stand til at dekarboxylere aminosyren, det vil sige, hvis den har enzymet orinithin decarboxylase.

Basis

Pepton, gærekstrakt og triptein

Disse elementer bidrager til ernæringskraften i dette medium. De tjener som kilde til næringsstoffer og essentielle aminosyrer til bakterieudvikling.

Derudover er triptein en kilde til tryptophan for at vise tilstedeværelsen af ​​enzymet tryptophanase, som nedbryder tryptophan ved reduktiv deamination, frigiver indol, pyruvinsyre, ammoniak og energi.

Indol er farveløs, derfor afsløres dens tilstedeværelse ved at tilsætte fem dråber Ehrlichs eller Kovacs's reagens, begge med p-dimethylaminobenzaldehyd.

Aldehydgruppen af ​​denne forbindelse reagerer med indolen og frembringer et ringformet fuchsia-rødt produkt på overfladen af ​​agaren.

Ethvert spor af farve skal betragtes som en positiv test. Beviset skal læses øjeblikkeligt, da farven med tiden forringes.

Endvidere bør denne test afsløres, efter at ornithins motilitets- og dekarboxyleringsresultater er blevet noteret.

Tolkning

Positiv test: dannelse af en fuchsia rød ring, når der tilføjes dråber Kovacs-reagens.

Negativ test: ingen ringdannelse.

Motility

Bakteriens evne til at bevæge sig vil være åbenlyse, hvis der ses et uklar medium, eller hvis der er en tyk vækstlinje, der ekspanderer omkring den indledende inokulering.

En negativ motilitetstest vil blive påvist ved at observere en tynd vækstlinje, og alt omkring det vil være uden vækst.

Det er vigtigt, at bevægeligheden læses, før indolen afsløres, da tilsætningen af ​​reagenset skyer hele mediet.

Hos mobile, men langsomtvoksende bakterier er det vanskeligt at demonstrere deres bevægelighed med dette medium. I dette tilfælde anbefales det at bruge andre test eller metoder, såsom den mellemlige motilitet eller drop-pending-metoden.

Glukose

Glukose er det fermenterbare kulhydrat, som ud over at tilvejebringe energi syrner miljøet, en nødvendig betingelse for at dekarboxylering af aminosyren ornithin kan forekomme.

Fermentering af glukose skal altid ske, ud fra princippet om, at alle bakterier, der tilhører Enterobacteriaceae-familien, fermenterer glukose.

L-ornithin

I tilfælde af, at bakterierne producerer enzymet ornithindecarboxylase, kan dette virke, når mediet er forsuret ved gæring af glukose.

Enzymet ornithindecarboxylase virker på carboxylgruppen af ​​aminosyren, hvilket producerer en amin kaldet putresin, der alkaliserer mediet igen.

Denne test skal læses efter 24 timers inkubation, fordi hvis du prøver at læse før, kan du fortolke testen med en falsk negativ.

Det skal huskes, at den første reaktion, der finder sted, er gæring af glukose, så mediet bliver gult i en indledende fase (første 10 til 12 timer). Hvis der derefter sker ornithindekarboxylering, bliver mediet lilla.

Det er vigtigt at fortolke ornithindekarboxyleringstesten, før indol afsløres, da tilsætningen af ​​Kovacs 'reagens ændrer farven på mediet.

Tolkning

Negativ test: medium med en gul farve eller med en gul baggrund.

Positiv test: medium helt lilla.

PH-indikator

I dette tilfælde bruges bromocresol-lilla; den, der har ansvaret for at afsløre, når der er en ændring i pH i mediet. Efter forsuring bliver indikatoren gul, og ved alkalisering bliver den lilla.

Frø og udvikling af teknik

For at så MIO-mediet bruges en lige sløjfe eller nål, og med det samles en del af kolonien, der skal studeres.

En dyb punktering laves midt i MIO i en lige linje. Det tilrådes ikke at udføre dobbelt punktering, da det kan give et forkert billede af bevægelighed, hvis punkteringer ikke udføres på samme sted.

Inkuber i 24 til 48 timer ved 37 ° C ved aerobiose. Se på resultaterne i denne rækkefølge: motilitet, dekarboxylering af ornithinen og afslør endelig indolen.

Det tilrådes at aseptisk fjerne 2 ml af mediet, overføre det til et sterilt rør og udføre indol-testen der, så hvis det er negativt, kan resten af ​​det originale rør inkuberes i yderligere 24 timer for at afsløre indolen igen.

Udviklingen af ​​indolen udføres som følger: 3 til 5 dråber Kovacs reagens tilsættes til MIO-mediet og omrøres kraftigt. Det observeres, om der vises en rød-fuchsia-ring eller ej.

Forberedelse

MIO medium

Vej 31 g MIO-medium ud, og opløs i 1 liter destilleret vand.

Opvarm, indtil blandingen koges i et minut, rystes ofte, indtil agaren er helt opløst. Fordel 4 ml af mediet i 13/100 reagensglas med bomuldshætter.

Steriliser i autoklave ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og lad stå lige i et stativ på en sådan måde, at der dannes en halvfast blok.

Opbevares i køleskab 2-8 ° C. Lad det varme op, inden bakteriestammen sås.

Farven på det dehydrerede medium er beige, og farven på det tilberedte medium er let opaliserende lilla.

Det endelige pH for det fremstillede medium er 6,5 ± 0,2

Mediet bliver gult ved sur pH og er lilla ved alkalisk pH.

Kovacs Reagent (Indole Test Developer)

Dette reagens fremstilles som følger:

150 ml amyl, isoamyl eller butylalkohol (hvilken som helst af de tre) måles. I den opløses 10 g p-dimethylaminobenzaldehyd. Derefter tilsættes langsomt 50 ml koncentreret saltsyre.

Det fremstillede reagens er farveløst eller lysegult. Det skal opbevares i rav flaske og opbevares i køleskab. En mørkebrun farve viser dens forringelse.

Kovacs-reagenset kan også erstatte Ehrlich-reagenset. Det sidstnævnte, der er mere følsomt, foretrækkes at afsløre indol i bakterier, der producerer det i små mængder, såsom i nogle ikke-fermenterende Gram-negative stænger og visse anaerober.

Brug

Dette medium er en test, der supplerer et batteri af biokemiske test til identifikation af bakterier, der tilhører Enterobacteriaceae-familien.

Ornithindekarboxyleringsdataene tjener til at differentiere Shigella sonnei, der tester positive, fra Shigella boydii, Shigella flexneri og S. dysenterieae, som tester negativt.

Det adskiller også slægten Klebsiella, der tester negativt, fra slægten Enterobacter, hvor de fleste af dens arter tester positive.

Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.

QA

Hver gang der fremstilles en batch af MIO-medium, kan der udføres en kontroltest. Til dette bruges kendte eller certificerede stammer til at observere mediets opførsel.

De stammer, der kan anvendes, er Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes og Proteus mirabilis.

De forventede resultater er E. coli og M. morganii. Dan M: +, I: + og O: +.

Klebsiella pneumoniae er alle negative (M: -, I: -, O:-). Proteus mirabilis og Enterobacter aerogenes giver M: + I: - og O: +.

Referencer

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemiske test til identifikation af bakterier af klinisk betydning. 3. udg. Redaktionel Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
4. Britannia Laboratories. MIO Medio 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
5. BD Laboratories. BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. Tilgængelig på: bd.com
6. Valtek Laboratories. Medium MIO-motilitet, indol, ornitin. 2010. Tilgængelig på: andinamedica.com