MEDIUM SIM: FUNDAMENT, FORBEREDELSE OG ANVENDELSER - BIOLOGI - 2025

Den SIM medium er en halvfast og differential agar, specielt designet til at hjælpe identificere nogle bakterier, især Enterobacteriaceae. Det er sammensat af triptein, pepton, jernsulfat, ammoniumsulfat, natriumthiosulfat og agar.

Dette medium det muligt at udføre tre vigtige prøver: produktion af hydrogensulfid (H ₂ S), dannelsen af indol og motilitet, dermed forkortelsen SIM. På grund af dens store anvendelighed kan det ikke være fraværende i et bakteriologilaboratorium.

A. Kommerciel SIM-medium B. SIM H2S (-), Indol (-) og motilitet (+) Test og SIM H2S (+), Indol (-), Motilitet (+) Test. Kilde: A. Foto taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza

I modsætning til andre medier skal det være halvfast for at nogle bakteriers bevægelseskapacitet kan påvises. I denne forstand fungerer denne test meget godt for Enterobacteriaceae, men ikke i ikke-gærende gramnegative stænger, hvor andre metoder foretrækkes, såsom hængende dråbe.

SIM-mediet giver mulighed for at skelne visse specifikke egenskaber, der karakteriserer nogle bakterier i forhold til andre. For eksempel er Escherichia coli udmærker sig ved at være H ₂ S (-), Indol (+) og motilitet (+), mens Proteus mirabilis er H ₂ S (+), indol (-), motilitet (+).

Basis

Det er et kulturmedium, der betragtes som forskelligt, fordi dets anvendelse skelner mellem mikroorganismer, der er i stand til at producere hydrogensulfid fra dem, der ikke gør det; det fremhæver også dem, der danner indol fra tryptophan fra dem, der ikke gør det, og til sidst adskiller bevægelige bakterier fra immobile bakterier.

Strømkilde

Som ethvert kulturmedium har det elementer, der giver de nødvendige næringsstoffer, så ikke-krævende mikroorganismer kan udvikle sig. Disse elementer er repræsenteret ved peptoner og triptein.

Udviklingen af ​​mikroorganismen i mediet er vigtig for at være i stand til at observere tilstedeværelsen eller fraværet af de egenskaber, som dette medium evaluerer.

Produktion af hydrogensulfid

Bogstavet S for akronymet SIM henviser til produktionen af hydrogensulfid (H ₂ S). Bakterier, der er i stand til at danne hydrogensulfid, optager svovlet fra natriumthiosulfat.

Når H ₂ S -colourless gas- dannes, reagerer det med jernsaltet stede i mediet, der danner jernholdige sulfid, klart synligt (sort bundfald). Bakterier, der ikke danner H ₂ S, forlader mediet af den oprindelige farve (beige).

Tilstedeværelsen af ​​det sorte bundfald kan hindre fortolkningen af ​​bevægelighed. Men de fleste H ₂ S- producerende Enterobacteriaceae vides at være positivt motile, såsom Salmonella, Proteus, og Citrobacter. Endvidere antyder det sorte bundfald, der dækker næsten hele mediet, positiv motilitet.

Indoldannelse

Det andet bogstav i forkortelsen SIM er "jeg", der repræsenterer dannelsen af ​​indol.

I denne forstand udøver Triptein ud over at være en kilde til næringsstof en anden grundlæggende funktion. Denne pepton er rig på en aminosyre kaldet tryptophan, derfor kan den vise bakterier, der producerer tryptophanase.

Dette enzym er ansvarlig for spaltning af aminosyren tryptophan med den deraf følgende dannelse af indol (farveløst stof), pyruvinsyre og ammonium.

Derfor er det nødvendigt at tilføje et afslørende stof (Ehrlich's reagens eller Kovac's reagens) for at vise denne reaktion. Enten reagerer med indol og danner et rødformet stofformet stof på overfladen af ​​agaren. Hvis fuchsiaringen vises, fortolkes indol-testen som positiv.

Bakterier, der ikke har dette enzym, danner ikke ringen, og det fortolkes som en negativ indol-test.

Det er vigtigt at bemærke, at indol-testen skal være den sidste, der fortolkes, da når reagenset først er tilsat, bliver mediet uklar, hvilket gør det vanskeligt at visualisere bevægelighed.

Motility

Endelig betyder bogstavet "M" i ordet SIM bevægelighed. For at evaluere bevægelighed er dette medium strategisk halvfast, da denne egenskab er vigtig for at være i stand til at observere, om der er bakteriebevægelse eller ej. Bakterier, der har flagella, er dem, der giver denne positive test.

En positiv test vil være synlig, når uklarhed observeres, både i det indledende inokulum og omkring det. Mens ikke-motoriske bakterier kun udvikler sig i stien til det oprindelige inokulum.

Forberedelse

Medium SIM

Vej 30 g af det dehydrerede medium, og opløs det i en liter destilleret vand. Blandingen henstår i 5 minutter og opvarmes derefter til kogning, omrøres ofte, indtil den er helt opløst.

Fordel blandingen i reagensglas med bomuldshætter og autoklave ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern rørstativet fra autoklaven, og lad det stivne i en lodret position, så mediet er i form af en blok.

Til bevarelse opbevares det i køleskabet indtil det bruges. Det tilberedte medium skal have en slut pH på 7,3 ± 0,2.

På tidspunktet for inokulering af mediet skal det være ved stuetemperatur. Den midterste farve er beige.

Kovacs reagens

Mål 150 ml amyl eller isoamyl eller butylalkohol. (Brug en af ​​de tre nævnte).

Opløs 10 g p-dimethylaminobenzaldehyd. Tilsæt derefter langsomt 50 ml koncentreret saltsyre.

Den klar-til-brug reagens er farveløs eller lysegul. Det skal opbevares i en rav flaske og opbevares i køleskab. Brug ikke, hvis det bliver mørkebrunt; det indikerer, at det er beskadiget. Dette reagens foretrækkes, når det kommer til Enterobacteriaceae.

Erlichs reagens

Vej 2 g p-dimethylaminobenzaldehyd op, og opløs i 190 ml absolut ethylalkohol og bland langsomt med 40 ml koncentreret saltsyre. Opbevar på samme måde Kovacs reagens. Ehrlichs reagens bruges mest til ikke-fermentering og anaerobe bakterier.

Applikationer

SIM-medium bruges meget i bakteriologilaboratorier. Dens fordel er, at tre væsentlige egenskaber kan observeres i det samme rør ved identifikation af Enterobacteriaceae.

sået

Den rigtige måde at så dette medium på er at bruge nålen, hvormed en del af den rene koloni, der skal studeres, tages og indsættes lodret i midten af ​​mediet. En enkelt spræng skal udføres. Punkteringen bør ikke nå bunden af ​​røret, den rigtige ting er kun at dække to tredjedele af dybden.

Gentagelse af inokulum anbefales ikke, da dette kan føre til falske fortolkninger af positiv bevægelighed. Det inokulerede medium inkuberes aerobt ved 37 ° C i 24 timer.

Når tiden er afsluttet, er det observeret, om der var produktion af H ₂ S og motilitet er læst. Endelig afsløres indolen, tilsættes 3 til 4 dråber Ehrlich eller Kovacs reagens, blandes forsigtigt og fortolkes.

Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.

QA

Som en sterilitetskontrol inkuberes et eller to rør uden inokulering i en ovn ved 37 ° C i 24 timer. Det forventes, at der efter dette tidspunkt ikke er nogen vækst eller farveændring.

Som kvalitetskontrol kan kendte certificerede stammer anvendes, såsom: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

De forventede resultater er: Escherichia coli H ₂ S negativ, indol og positiv motilitet, Enterobacter aerogenes kun positiv motilitet, Salmonella typhimurium H ₂ S og positiv motilitet med negativ indol. Proteus vulgaris er alle positive, mens Klebsiella pneumoniae og Shigella alle er negative.

Begrænsninger

-Nogle stammer af Morganella morganii, blandt andre stammer, kan producere et brunligt pigment i dette medium på grund af produktionen af ​​melanin, dette bør ikke forveksles med bundfaldet af jernsulfid. Hos uerfarne fagfolk kan denne situation frembringe falske positiver i fortolkningen af ​​H ₂ S- testen.

-Strikte aerobe bakterier vokser kun på overfladen af ​​røret, hvilket gør det vanskeligt at fortolke bevægelighed.

Referencer

1. BD Laboratories. BBL SIM Medium. 2008. Tilgængelig på: bd.com
2. Neogen Laboratories. SIM Medium. Fås på: fødevaresikkerhed
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Medium. 2009. Tilgængelig på:
4. Brizuela-Lab-laboratorium. Medium SIM. Fås på:.brizuela-lab.com
5. Britannia Laboratories. Medium SIM. 2015. Tilgængelig på: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.