HEMATOXYLIN-EOSINFARVNING: EGENSKABER, ANVENDELSER, TEKNIKKER - KEMI - 2025

Den hematoxylin - eosin er en farvningsteknik anvendelse af kombinationen af den farvestoffer hematoxylin og eosin. Dette farvestofpar gør en perfekt duo, da hæmatoxylin fungerer som et grundlæggende farvestof, og eosin er et syrefarvestof.

Betegnelsen på basiske farver eller syrefarvestoffer henviser ikke til den pH, der er opnået i opløsning, men snarere snakker om den fremherskende andel med hensyn til de anioniske eller kationiske ladninger, de besidder, eller af placeringen af ​​chromophore-gruppen.

Hematoxylin - eosin (HE) farvet cilieret søjleepitel Kilde: Todd Straus og Vladimir Osipov

I denne forstand betragtes hæmatoxylin som et basisk (kationisk) farvestof og har derfor en affinitet for syrestrukturer, såsom cellekernen. Mens eosin, der er et surt (anionisk) farvestof, har en affinitet for alkaliske eller basiske strukturer, såsom cellecytoplasma.

Af denne grund er denne kombination af farvestoffer vidt brugt til vævfarvning, da den tillader kerner og cytoplasmer at skelnes tydeligt. Kernerne pletter mørkeblå eller lilla og cytoplasmaen lyserød.

Hematoxylin-eosinfarvning er en af ​​de mest anvendte farvningsteknikker inden for histologi og cytologi på grund af dens lette håndtering og lave omkostninger. Det bruges til at visualisere celler, tykke nervefibre og tilstedeværelsen af ​​visse mikroorganismer i væv, såsom: parasitter, svampe og bakterier, blandt andre.

egenskaber

Hematoxylin

Hematoxylin er et neutralt farvestof. Imidlertid er komponenten, der tilvejebringer farven (kromofor), placeret i det kationiske eller basiske centrum af molekylet. Derfor er dens affinitet for sure strukturer. Dens kemiske formel er C ₁₆ H ₁₄ O ₆ og dens videnskabelige navn er 7,11b-dihydroindeno chromen-3, 4,6a, 9,10 (6H) -pentol.

Det pletter hovedsageligt cellernes kerner, da de er meget rige på nukleinsyrer. Det kan også plette cytoplasmatiske indeslutninger af viral oprindelse.

For at hæmatoxylin kan plette, skal det være i en oxideret tilstand og bundet til et metal. Det sidstnævnte tjener til at fiksere til vævet, det vil sige at det fungerer som en mordant.

Når hæmatoxylin oxideres kaldes det hæmatein. Oxidation opnås ved eksponering for ilt (aldring) af reagenset eller af stoffer, der hjælper med dets oxidation (kemisk oxidation).

Eosin

Eosin er et farvestof, der farver rødt eller lyserødt. Det er uopløseligt i vand, selvom der er en vandopløselig version. Generelt fremstilles eosin ved opløsning i alkohol (95 ° ethanol).

Det pletter cytoplasmer, muskelfibre, cytoplasmatiske organeller og kollagen, men pletter ikke cellekerner. Dette skyldes, at det er negativt ladet, derfor har det en tilhørighed til positivt ladede strukturer.

Der er to typer eosin "Y" og "B". Eosin "Y" er kendt som gul eosin. Dets videnskabelige navn er tetrabromo-fluorescein, og dets kemiske formel er C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅.

På den anden side kaldes eosin "B" undertiden blålig erythrosin B. Dets videnskabelige navn er dibromodynitro-fluorescein, og formlen er C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉. Begge er meget ens, og forskellen mellem at bruge den ene eller den anden er ikke rigtig mærkbar. Den mest populære er imidlertid eosin "Y".

Eosin har egenskaben til at skelne mellem en levende og en død celle, da den kun er i stand til at krydse membranen for at plette dens cytoplasma, når celler er døde, hvilket efterlader cytoplasmaet i cellen farveløs, hvis den forbliver i live.

Applikationer

Nervefiberfarvning

Tykke nervefibre kan farves og identificeres med hæmatoxylin-eosin. Det er imidlertid ikke nyttigt til farvning af tynde nervefibre, da der kræves en sølvfarvning for at visualisere sidstnævnte.

Histologiske hudafsnit pletter

Ved farvning af det liderlige hud af hud er farvestoffet, der virker, eosin, da cellerne på dette niveau ikke har en kerne.

I det granulære lag af huden farver hæmatoxylin kraftigt keratohyalinkornene inden i granulatcellerne. Tværtimod er det spinøse lag af huden farvet svagt med hæmatoxylin, mens basal- eller germinallaget er ret farvet.

Eosin pletter cytoplasmaet i alle celler, og intensiteten af ​​farven kan variere fra lag til lag.

Hematoxylin-eosinfarvning af afføringsprøver

Gómez et al., I 2005 demonstrerede, at hæmatoxylin-eosinfarvning var mere effektiv til at identificere tilfælde af amoebiasis på grund af Entamoeba histolytica og Entamoeba disparere end den friske visualiseringsmetode (saltvand og lugol) hos patienter med akut diarrésygdom.

Det har også vist sig at være meget følsomt til påvisning af erythrophagocytosis (amøber, der har indhyllet erythrocytter).

Farvning af histologiske sektioner til diagnose af infektion

Walwyn et al., I 2004 foreslog anvendelse af histologiske pletter til at påvise infektionsfremkaldende mikroorganismer.

Ved hjælp af hæmatoxylin-eosinfarvning var de i stand til at visualisere infektioner forårsaget af Clostridium, Actinomyces, spirillae eller Candida. De var også i stand til at observere tilstedeværelsen af ​​parasitten Sarcoptes escabiei i hudafsnit og virale indeslutninger af cytomegalovirus og herpes i sektioner af forskellige væv.

Teknikker

Til histologiske prøver

Histologisk sektionsfarvning gennemgår en række trin. Den første ting er at få det histologiske afsnit. Dette skal vokses for senere at opnå udskæringerne (ultrafint) med et mikrotom. Teknikken består af følgende trin:

1-eliminering af overskydende paraffin: til dette kan du bruge xylol eller Heme-D, nedsænkes i 3-5 minutter.

2-Rehydrering af prøven: dette opnås ved at nedsænke prøven i forskellige koncentrationer af alkoholer (ethanol) i faldende rækkefølge (100 °, 90 °, 70 °). I alle tilfælde i 7 minutter.

3-eliminering af overskydende alkohol: for dette nedsænkes det i vand i 7 minutter.

4-farvning med hæmatoxylin: prøven nedsænkes i 6-10 minutter i en bakke, der indeholder hæmatoxylin. Eksponeringstiden afhænger af størrelsen og tykkelsen af ​​prøven.

5-eliminering af overskydende hæmatoxylin: det vaskes med vand i 5 minutter, og derefter gennemføres en hurtig passage (10-20 sekunder) gennem sur alkohol. Senere vaskes det med vand igen i 5 minutter. Derefter nedsænkes det i ethanol ved 96 ° i 1 minut.

6-farvning med eosin: til dette nedsænkes prøven i 5 minutter i eosinbakken.

7-Dehydrering af prøven: for at gøre dette, går den gennem alkoholbakkerne (ethanol), men denne gang i stigende rækkefølge. (70 °, 90 °, 100 °). (I henholdsvis 5 sekunder, 5 sekunder, 1 minut).

8-Præcisering af prøven: for dette udsættes den for xylol i 5-10 minutter og tørres for permanent at forsegle med Canada balsam eller andet lignende materiale.

For afføringsprøver der er på udkig efter

En udstrygning laves på et objektglas med patientens afføring og fikseres med 80% alkohol i 5 minutter. Arket nedsænkes i hematoxylin i 5 minutter og vaskes straks med vand.

Derefter nedsænkes det hurtigt i sur alkohol og derefter i ammoniakvand. Det vaskes med vand. Det farves i 5 minutter i eosin. Prøven dehydratiseres som forklaret i den kendte teknik og skylles til sidst med xylen.

Fremstilling af reagenser

- Hematoxylin

I en liter destilleret vand opløses 50 gram kalium eller ammoniumaluminiumsulfat. Tilsæt 1 g krystalliseret hæmatoxylin, når det er helt opløst. Ved fuldstændig opløsning tilsættes 1 g citronsyre sammen med 50 g chlorhydrat og 0,2 g natriumiodat.

Blandingen koges i 5 minutter og lodes derefter afkøle og filtreres for at fjerne eventuelle faste partikler, der er tilbage. Det således fremstillede reagens kan anvendes øjeblikkeligt.

- Eosin

Det kan tilberedes med en alkoholisk base eller med en vandbase.

Alkoholisk eosin

I 100 ml ethanol ved 95 ° opløses 0,5 gram eosin "Y". Tilsæt derefter et par dråber iseddike.

2% vandig eosin

I 1250 ml destilleret vand opløses 25 gram vandopløseligt eosin "Y". Tilsæt derefter et par dråber iseddike.

Syre alkohol

Mål 0,5 ml koncentreret saltsyre og fyld op til 100 ml med absolut alkohol.

Ammoniakvand

Mål 0,5 ml koncentreret ammoniak og fyld op til 100 ml med destilleret vand.

Referencer

1. Navarrete, G. Histologi af huden. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Fås på: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. Identifikation af Entamoeba histolytica / E. Dispers ved hjælp af den friske amebeteknik vs dens farvning med hæmatoxylin-eosin i akut diarré. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Fås på: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Brug af histologiske teknikker til diagnosticering af infektion i anatomiske prøver. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Fås på: scielo.sld
5. PanReac AppliChem ITW-reagenser. Hematoxylin-eosin-plet. 2017, Spanien. Fås på: itwreagents.com
6. Eosin. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 7. nov. 2018, 08:18 UTC. 4. august 2019, 22:13 da.wikipedia.org
7. "Hematoxylin." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 3. maj 2019, 11:23 UTC. 4. august 2019, 22:48 wikipedia.org