SAFRANIN: EGENSKABER, ANVENDELSE, TEKNIKKER, TOKSICITET - KEMI - 2025

Den safranin er en meriquinoide farvestof, opkaldt efter dens kemiske struktur har to benzenoide ringe og af 2 quinoide ringe, den sidstnævnte er dem, der giver farven rød.

Det kaldes også dimethyl safranin eller basisk rød 2 i sin korte form, da dens videnskabelige navn er 3,7-diamino-2,8-dimethyl-5-phenyl-phenaziniumchlor dimethyl safranin, og den kemiske formel er C ₂₀ H ₁₉ N ₄ cl.

Kemisk struktur af safranin, der angiver benzenoid- og quinoidringe / vandig opløsning af safranin. Kilde: NEUROtiker redigeret af MSc. Marielsa Gil / LHcheM

Der er en variant kaldet trimethyl-safranin, men der er ingen signifikant forskel mellem de to stoffer.

Safranin er et monokromatisk farvestof og er, afhængigt af egenskaberne ved den kemiske formel, et positivt ladet stof. Derfor har det en tilknytning til negativt ladede strukturer. Disse strukturer vil være farvet røde.

Denne egenskab giver det anvendelse i mange histologiske teknikker til at farve forskellige cellulære strukturer, både af eukaryote og prokaryote organismer.

Safranin bruges som kontrastfarvestof i vigtige og velkendte teknikker til rutinemæssig anvendelse i bakteriologi. Disse teknikker er: Gram-Hucker-plet, Schaeffer Fulton-plet til sporer eller farvning af bakteriekapsler, blandt andre.

egenskaber

Farven på safran (et krydderi, der er opnået fra stigmaer fra Crocus sativus-blomsten) var inspiration til at navngive dette farvestof. Fra betegnelsen safran kommer navnet safranin. Dette skyldes den store lighed mellem farven på safran og den farve, som dette farvestof giver.

Safranin fås som krystaller eller pulver, begge præsentationer er opløselige i vand. Safraninfarvestoffet er lugtfrit. Pletter strukturer rød. Strukturer, der tiltrækker safraninfarvestof kaldes safranofile.

Strukturelt er safranin kompleks, det har to benzenoidringe i enderne og i midten er de to quinoidringe placeret, hvor N ⁺ -kationen findes. I midten af ​​strukturen er det system, der er ansvarlig for at give farven. På grund af denne egenskab er denne farvestof klassificeret i kategori II.

Brug

Safranin bruges til at plette forskellige strukturer. Især fremhæver de Kulchitsky-celler, der findes i mave-tarmkanalen, også kaldet enterochromaffin-celler.

Det er i stand til at farve mikroorganismer, der tilhører Rickettsiaceae-familien. Ligeledes bruges det i forskellige teknikker, såsom Koster-metoden, en modificeret, der bruges til at plette bakterier af slægten Brucella.

På den anden side bruges safranin i Schaeffer Fulton sporefarvningsteknik og i Gram-Hucker-farvning. I begge teknikker fungerer safranin som et kontrastfarvestof.

I det første tager sporerne farven på malachitgrønt, og resten af ​​strukturer er røde af safranin. I det andet mister de Gram-negative bakterier farven på den violette krystal i misfarvningstrinnet, derfor er safranin den, der farver de Gram-negative bakterier røde.

Derudover bruges safranin i bakteriologi til fremstilling af Brucella-agarmedier med en fortynding af safranin 1: 5000. Dette medium tjener til at differentiere Brucella suis-arten fra resten af ​​arten. Brucella melitensis og Brucella abortus vokser på dette medium, men B. suis hæmmes.

I det agroindustrielle felt er safranin blevet anvendt ved 2,25% og fortyndet 1:10 til at plette stamprøver fra sukkerrørsplanten.

Denne plante er ofte påvirket af bakterien Leifsonia xyli subsp. xyli, der skader plantens xylem. De farvede stængler evalueres for at bestemme xylemkarens funktion.

Teknikker inden for bakteriologi

Castañeda-plet til farvning

En blod- eller vævsudstrygning anbringes i en bufferopløsning (phosphatbuffer pH 7,6). Lad tørre spontant, og dæk derefter med methylenblåt i 3 minutter og forsænk med safranin. Rickettsiae er farvet blå, kontrasterende med den røde baggrund.

Koster-plet modificeret for

En udstrygning laves og flammes i lighteren til fiksering. Efterfølgende dækkes det med en blanding af 2 dele mættet vandig safranin med 3 dele 1 mol / L KOH-opløsning i 1 minut. En vask udføres med destilleret vand og tælles med 1% carbolisk methylenblåt.

Hvis prøven indeholder bakterier af slægten Brucella, vises de orange på en blå baggrund.

Bakteriel kapselfarvning

En blanding af bakteriesuspension fremstilles med indisk blæk, og safranin tilsættes. Under mikroskopet vises en rødlig glorie omkring hver bakteriekapsel med sort baggrund.

Sporfarvning

Der spredes med bakteriesuspensionen. Derefter fastgøres det til varme. Det er dækket med 5% malachitgrøn, flammer ofte indtil udledning af dampe. Processen gentages i 6-10 minutter. Til sidst vaskes det med vand og modsættes med 0,5% safranin i 30 sekunder. Bacillerne farver røde og sporerne grønne.

Gram-Hucker-plet

En udstrygning fremstilles med bakteriesuspension og fastgøres i varmen. Dæk objektglasset med krystalviolet i 1 minut. Derefter anbringes lugol som en mordant-opløsning i 1 minut. Derefter bleges det med acetonealkohol og modsættes til sidst med safranin i 30 sekunder.

Gram-positive bakterier pletter blåagtig violet og Gram-negative bakterier rød.

Nogle laboratorier er stoppet med at bruge Gram-Hucker-teknikken til at anvende den modificerede Gram-Kopeloff-teknik. I sidstnævnte erstattes safranin med basisk fuchsin. Dette skyldes, at safranin svagt farver arter af legionella-, Campylobacter- og Brucella-slægterne.

Teknikker inden for histologi

Kulchitsky-cellefarvning (enterokromaffiner)

Vævsektioner fra mave-tarmkanalen farves med sølvchlorid. Derefter affarves det med natriumthiosulfat og endeligt modfarvet med safranin.

Kulchitsky-celler er kendetegnet ved tilstedeværelsen af ​​sortbrune granuler.

Slidgigt

Da safranin har en positiv ladning, binder den meget godt til carboxyl- og sulfatgrupperne i glycosaminoglycaner. Disse er en del af proteoglycanerne, der udgør den ledbrusk. I denne forstand er det ved farvning med safranin O muligt at identificere, om der er tab af brusk eller ej.

Tabet af bruskvæv kan måles ved hjælp af Mankin-skalaen eller også kaldet slidgigt.

Teknikken forklares nedenfor: den histologiske sektion nedsænkes i en bakke med Weigerts jernhematoxylinopløsning, derefter passeres gennem sur alkohol og vaskes med vand.

Fortsæt farvningsprocessen ved at nedsænke objektglasset i hurtigt grønt, det vaskes med eddikesyre, og nu nedsænkes det i safranin O. For at afslutte processen dehydreres det ved hjælp af alkoholer i forskellige koncentrationer i stigende rækkefølge. Det sidste trin kræver xylen eller xylen for at prøven kan afklares.

Objektglassene er konditioneret med Canada-balsam eller lignende som observeret under mikroskopet.

Med denne teknik farves kernerne sort, knoggrøn og brusk, hvor proteoglycanerne findes røde.

Plet til identifikation af makroalger

Pérez et al i 2003 foreslog en enkel og billig teknik til farvning af makroalger. Prøverne fremstilles i parafinhistologiske sektioner. Sektionerne fikseres med 1% glycerin, så de kan tørre fuldstændigt. Det anbringes derefter i xylol for at fjerne paraffinen.

Sektionen rehydratiseres ved at føre det gennem en række bakker indeholdende ethanol i forskellige koncentrationsgrader (faldende rækkefølge) i 2 minutter i hver.

Efterfølgende farves det i 5 minutter med en 3: 1-blanding af 1% safranin med 1% toluidinblå, begge fremstillet med 50% ethanol. Tre dråber picrinsyre sættes til blandingen, der fungerer som en mordant.

Derefter dehydreres ved at passere gennem alkoholbakkerne igen, men denne gang på en stigende måde. Endelig skylles det med xylol, og prøven fremstilles med Canada balsam, der skal observeres.

Toksicitet

Heldigvis er safranin et farvestof, der ikke udgør en fare for dem, der håndterer det. Det er et ufarligt farvestof, det er ikke kræftfremkaldende, og det er ikke brandfarligt.

Direkte kontakt med huden eller slimhinden kan forårsage en let rødme i området uden større komplikationer. Til dette anbefales det at vaske det berørte område med rigeligt vand.

Referencer

1. García H. Colorante safranina O. Tekniker inden for sundhed, 2012; 1 (2): 83-85. Fås på: medigraphic.com
2. Gil M. Gram-plet: fundament, materialer, teknik og anvendelser. 2019. Tilgængelig på: lifeder.com
3. Gil M. Spore-farvning: begrundelse, teknikker og anvendelser. 2019. Tilgængelig på: lifeder.com
4. Safranina. " Wikipedia, The Free Encyclopedia. 7 mar 2017, 10:39 UTC. 3. august 2019, 20:49 da.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Nyttig farvningsteknik i den anatomiske fortolkning af Gracilariopsis tenuifrons og Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Act Bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. Fås på: scielo.org.
6. Aleika Church, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Forholdet mellem funktionaliteten af ​​xylem-karene og tilstedeværelsen af ​​Leifsonia xyli subsp. XYLI. Past Veg Protection. 2007; 22 (1): 65-65. Fås på: scielo.sld