KAPSELFARVNING: BEGRUNDELSE OG TEKNIKKER - BIOLOGI - 2025

Den farvning kapsel er en differentieret farvning teknik, som har den egenskab at stress polysaccharid struktur omgivende visse bakterier og gær kaldet kapsel. Det bruges i kliniske laboratorier til at hjælpe med at diagnosticere visse patologier forårsaget af kapslede mikroorganismer.

Det bruges også i undervisningslaboratorier til demonstration af denne morfologiske struktur til studerende i sundhedsvidenskabelige karrierer, såsom: medicin, bioanalyse, sygepleje eller cytoteknologi, blandt andre.

Klebsiella pneumoniae-udstrygning farvet med kapselplet. Indisk blækmetode med safranin. Kilde: А.А.В

Der er flere enkle teknikker til at demonstrere tilstedeværelsen af ​​kapslen i de mikroorganismer, der besidder den, disse er: den negative plet, Anthony-pletten og en variant, der kombinerer de to foregående.

Negativ farvning bruges hovedsageligt i CSF-prøver, når der er mistanke om tilstedeværelsen af ​​gæren Cryptococcus neoformans. Denne gær er en almindelig årsag til meningitis.

Denne teknik bruger nigrosin eller Indien blæk og er baseret på at skabe en kontrast mellem baggrunden af ​​præparatet og den uigennemtrængelige kapsel i mikroorganismen. Baggrunden bliver mørk, og kapslen er farveløs. På denne måde afsløres denne struktur.

Med hensyn til Anthony-teknikken kan det siges, at det mest bruges i undervisningslaboratorier til at demonstrere polysaccharidstrukturen i bakterier, såsom Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae og Neisseria meningitidis.

Brugen af ​​denne teknik til diagnostiske formål er meget sjælden, da der er andre rutinemæssige tests, der tillader identificering af disse mikroorganismer.

Basis

Kapslen er en stærk struktur af polysaccharid-art. Dette beskytter mikroorganismerne mod fagocytose, og er derfor en vanskelig struktur at trænge igennem.

Derfor er kapselpletter baseret på kontrast. Farvestofferne pletter bunden af ​​præparatet, mens kapslen forbliver farveløs.

Derfor er kapslen let genkendelig med disse teknikker. Hvis mikroorganismen ikke har en kapsel, kan den ikke skelnes med denne type farvning, fordi alt bliver farvet den samme farve.

Alle teknikker, der bruges til at farve kapslen, har samme grund til trods for anvendelse af forskellige farvestoffer og procedurer.

Teknikker par

-Anthony plet

Anthony's plet bruger krystalviolet som en plet. Dette vil plette bakteriekroppen og baggrundslilla.

På den anden side anvendes 20% kobbersulfat. Dette tjener som en vaskeopløsning, det vil sige, at den fjerner overskydende violet krystal fra præparatet, hvilket gør kapslerne klare, men uden at bakteriekroppen eller baggrunden mister farve.

materialer

- Iriserende mælk.

- Slide.

- 1% violet krystal.

- 20% kobbersulfat.

- Optisk mikroskop.

- Fordypningsolie.

Behandle

Denne teknik består af:

1. Dyrk mikroorganismen i iriserende mælk i 36 timer.
2. Læg en dråbe af kulturen i slutningen af ​​et dias, og ved siden af, anbring en dråbe violet glas, bland og spred med enden af ​​et andet dias.
3. Lufttørre, og sæt den ikke i varme.
4. Vask med 20% kobbersulfatopløsning, lad lufttørre.
5. Observer under et mikroskop med et nedsænkningsmål. Søg mod spidserne.

Det er vigtigt ikke at bruge varme hverken til at fikse eller tørre, da dette skader kapslen. Vask heller ikke med vand.

Tolkning

Iriserende mælk er et fremragende kulturmedium, da det giver de nødvendige næringsstoffer til, at mikroorganismen udvikler en fremtrædende kapsel.

På den anden side vil den iriserende mælk danne en tyk og kompakt bund, der farves lilla sammen med bakteriekroppen, men kapslen, der omgiver mikroorganismen, forbliver farveløs. Derfor observeres en klar glorie omkring bakteriekroppen.

Grafisk gengivelse ved mikroskopisk observation af en Klebsiella pneumoniae-udstrygning farvet med Anthony's plet. Kilde: Oprettet af forfatteren MSc. Marielsa Gil.

Fordel

Det er en simpel teknik at udføre. Kræver ikke fastgørelse.

Det skal også bemærkes, at andre kulturmedier kan anvendes, men mælkemediet foretrækkes, fordi det har fordelen ved at tilvejebringe mere fremtrædende kapsler.

Ulemper

Det er en lidt mere arbejdsintensiv teknik end negativ farvning, og dens visualisering kræver, at man venter på, at præparatet tørrer fuldstændigt.

-Negativ farvning

materialer

- Slides slides.

- Kulturmedium med mikroorganismen.

- Kinesisk blæk eller nigrosin.

- Optisk mikroskop.

- Fysiologisk saltopløsning.

Behandle

Læg en dråbe fysiologisk saltvand på dækglasset og opløs en lille del af den mikrobielle kultur. Det er vigtigt, at præparatet ikke er for tykt. Læg derefter en dråbe kinesisk blæk eller nigrosin og bland.

Et dækglasplade anbringes derefter over præparatet uden at flyde over væsken. Det observeres under mikroskopet ved først at fokusere på et 10X mål og derefter flytte til 40X.

Denne teknik kan også bruges direkte på CSF-prøver. Det vil sige, i stedet for at placere en dråbe mikrobiel kultur, placeres en dråbe CSF.

Fordel

Det er en enkel metode til at udføre og på samme tid billig. Det kræver ikke fiksering eller tørring af præparatet.

Ulemper

Ulempen er, at det skal observeres under et mikroskop, inden præparatet tørrer, for hvis dette sker, vil mikroorganismerne sammentrække, hvilket vil gøre visualisering vanskelig.

På den anden side kan der forekomme falske positiver, hvis analytikeren er uerfaren, da leukocytter ofte forveksles med gær.

Observationen af ​​gærkapsler med den kinesiske blæk- eller nigrosin-teknik bør betragtes som en formodende diagnose af Cryptococcus neoformans, indtil det demonstreres med kulturen.

Dette skyldes, at der er andre gærer, der kan være årsagen til meningitis og ikke kun Cryptococcus neoformans, såsom dem af slægten Candida og Rhodotorula, såvel som andre arter af Cryptococcus.

Tolkning

Hvis der er kapslede mikroorganismer, observeres en mørk baggrund, med gennemsigtige legemer flydende i væsken, hvilket fremhæver tilstedeværelsen af ​​kapslen.

Cryptococcus neoformans kapsel farvet med kinesisk blæk. Kilde: Fotokredit: Indholdsudbydere (r): CDC / Dr. Leanor Haley

-Indisk blæk teknik

Denne teknik kan også udføres med nigrosin. Det er en kombination af de tidligere forklarede teknikker. Denne teknik bruger krystalviolet og indisk blæk eller nigrosin.

Bakteriekroppen bliver lilla fra krystalvioleten, fordi den er negativt ladet, hvorimod nigrosin farver bunden af ​​udstrygningen. Hvis bakterien har en kapsel, vises den som en gennemsigtig glorie omkring mikroorganismen.

Krystallviolet kan erstattes af en af ​​disse farver: safranin, basisk fuchsin eller methylenblå.

materialer

- Violet glas.

- Nigrosin eller indisk blæk.

- Slides slides.

- Mikroskop.

Behandle

- Dyr mikroorganismen i et kulturmedium.

- Læg en dråbe af kulturen i slutningen af ​​et dias, og ved siden af, anbring en dråbe indisk blæk eller nigrosinkrystall, bland og spred med enden af ​​et andet dias.

- Lufttørre og fastgør ikke til varme.

- Dæk med en violet krystalopløsning i 1 minut, vask med destilleret vand, men meget forsigtigt (blød stråle), lad det tørre i det fri.

- Overhold under mikroskopet med et nedsænkningsmål. Søg mod spidserne.

Tolkning

En lilla bakteriekrop og en mørk baggrund ses. Kapslen, hvis den er til stede, vil fremstå farveløs omkring bakterierne.

Referencer

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Grundlæggende teknikker i mikrobiologi. Observation af bakterier. Reduca (biologi). Mikrobiologiserie. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Grundlæggende pletter i mikrobiologilaboratoriet. Mediagraphic.org. 2014, 3 (1): 10-18. Fås på: medigraphic.com
3. Gil M. Negativ farvning: begrundelse, teknik, fordele og ulemper. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Argentina. Redaktionel Panamericana SA
5. Tankeshwar A. Capsule Stain: Princip, procedure og resultater. 2019. Vejledning til medicinsk mikrobiologi. Fås på: microbeonline.com