KINYOUN-FARVNING: BEGRUNDELSE OG TEKNIKKER - BIOLOGI - 2025

Den Kinyoun farvning er en farvning teknik, der anvendes til pletten bakterier og parasitter resistent syre alkohol. Den blev født fra ændringen af ​​Ziehl-Neelsen-farve; Begge teknikker tolkes på samme måde, men adskiller sig i to elementer: i fremstillingen af ​​hovedreagenset og ved at Kinyoun-teknikken ikke bruger varme.

Af denne grund er det også kendt som koldmodificeret Ziehl-Neelsen eller Kinyoun kolde plet. Det er indiceret til farvning af Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atypiske mycobacteria, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris og Cyclosporas cayetanensis.

Cryptosporidium parvum farvet med Kinyoun-plet. Punlop Anusonpornperm, fra Wikimedia Commons

Det er værd at bemærke, at Nocardia farves svagt med denne teknik, da de delvist er syre-alkoholbestandige, så for denne slægt er der en ændring af metodikken.

Til gengæld er den kolde Kinyoun-teknik blevet kombineret med trichrome-teknikken modificeret af Didier til påvisning af coccidia (Cryptosporidium parvum og Isospora belli) og microsporidia-sporer (Enterocytozoon bieneusi og Encephalitozoon intestinalis).

Basis

Det vigtigste farvningsreagens er carbolfuchsin eller carbol fuchsin, som har egenskaben til at binde til carbolic syrer, der findes i den lipidrige voksagtige cellevæg (mycolsyrer) af mycobacteria og visse parasitter.

Denne binding modvirkes ikke af syreablegemet; derfor defineres mikroorganismer som syrehurtige.

I modsætning til Ziehl-Neelsen-teknikken - som fikserer farvestoffet gennem varme- i Kinyoun-teknikken er dette trin ikke nødvendigt, da den carboliske fuchsinopløsning, der er forberedt til denne teknik, indeholder en høj koncentration af phenol.

Phenol opløser lipidmaterialet i cellevæggen, hvilket giver carbolfuchsinfarvestoffet mulighed for at komme ind. Når farvestoffet trænger igennem, forbliver det fast på trods af den sure alkoholvask.

På denne måde tager de syrehurtige mikroorganismer den karakteristiske røde farve, mens alt, der ikke er syrehurt, bliver misfarvet og pletter blåt.

Teknik

materialer

- Ændret carbol fuchsin.

- Alkohol-syre.

- Methylenblå.

Forberedelse af Kinyoun carbol fuchsin

- Grundlæggende fuchsin: 4 gr.

- Phenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Destilleret vand: 100 ml.

Den basale fuchsin skal opløses langsomt i alkoholen og blandes konstant. Derefter smeltes den krystalliserede phenol i et vandbad ved 56 ° C. Når den er opløst, tilsættes 8 ml til den ovenfor fremstillede fuchsinopløsning.

Fremstilling af syre-alkoholen

- Koncentreret saltsyre: 3 ml.

- Ethanol (95%): 97 ml.

Det skal måles, sammenføjes og blandes.

Fremstilling af den methylenblå kontrastfarvestof

- Methylenblå: 0,3 g.

- Destilleret vand: 100 ml.

Det vejes og opløses.

Kinyoun farvningsteknik

1- Forbered en udstrygning direkte fra prøven, som kan være sputum, lungevæske, urinsediment, cerebrospinalvæske eller fæces, blandt andre; eller fra en suspension af mikroorganismer opnået fra rene kolonier udviklet i primære kulturmedier.

2- Fix udstrygningen med varme.

3 - Placer udstrygningen på farvningsbroen og dæk den med den forberedte Kinyoun carbol fuchsin-reagens. Lad det hvile i 3 til 5 minutter.

4- Vask med destilleret vand.

5 - Bleg med sur alkohol i 3 minutter og vask igen med destilleret vand.

6- Bleg igen med syrealkohol i 1 eller 2 minutter, indtil der ikke længere er farvet.

7- Vask med destilleret vand, og lad det løbe ud og placere objektglasset i lodret position.

8- Dæk præparatet med methylenblåt, og lad det virke i 4 minutter.

9- Vask med destilleret vand og lad det lufttørre.

10- Undersøg ved 40X og derefter ved 100X.

For at forbedre og fremskynde farvningen af ​​syrehurtige mikroorganismer, tilsættes 1 dråbe befugtningsmiddel (såsom Tergitol nr. 7) til 30 eller 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin.

Nogle laboratorier ændrer den methylenblå kontrastfarve til lysegrøn eller picrinsyre; den første giver en grøn farve på baggrunden og den anden genererer en gul farve.

Speciel Kinyoun-teknik til nocardier

For at forbedre farvningen af ​​bakterier i slægten Nocardia bruges en ændring af Kinyoun-pletten. Teknikken er som følger:

1- Dæk udstrygningen med Kinyoun carbol fuchsin i 3 minutter.

2- Vask med destilleret vand.

3 - Males kort med syrealkohol tilberedt med 3%, indtil der ikke længere farves mere.

4- Vask igen med destilleret vand.

5- Dæk præparatet med methylenblåt, og lad det virke i 30 sekunder.

6- Vask med destilleret vand og lad det lufttørre.

Kombineret carbol fuchsin og trichrome teknik modificeret af Didier

Denne teknik anbefales til analyse af afføringsprøver til coccidia- og Microsporidium-sporer på samme tid. Proceduren, der skal følges, er som følger:

1- Dæk udstrygningen med Kinyoun carbol fuchsin i 10 minutter.

2- Fjern farvestoffet og vask med destilleret vand.

3 - Bleg i 30 sekunder med saltsyrealkohol.

4- Vask igen med destilleret vand.

5- Dæk udstrygningen med trichrome opløsning i 30 minutter ved 37 ° C.

6- Vask med destilleret vand.

7- Bleg i 10 sekunder med eddikesyrealkohol.

8- Vask udstrygningen i 30 sekunder ved anvendelse af 95% ethanol.

QA

Som en positiv kontrol fremstilles udstrygninger med Mycobacterium tuberculosis-stammer og farves med reagenserne, der er forberedt til at verificere, at bakterierne får den passende farve (rød-fuchsia).

Negative kontroller kan også bruges ved at fremstille udstrygninger med en hvilken som helst anden stamme end sur alkohol hurtigt, og derved kontrolleres, at hele prøven tager den kontrasterende farve.

Kinyoun-teknik sammenlignet med Ziehl-Neelsen-teknikken

Kinyoun-teknikken er enklere, da den eliminerer opvarmningstrinnet, men dens største fordel er, at den undgår udsendelse af dampe, der er meget giftige og kræftfremkaldende på lang sigt. Derfor er Kinyoun-farven sikrere for farvningspersonale.

Det er vigtigt at tage højde for, at der skal tages omhu, at reagenserne ikke kommer i direkte kontakt med huden, da de er ætsende og blegemidlet er brandfarligt.

Hvad angår ulemperne, indikerer en negativ udtværing ikke nødvendigvis, at organismen ikke er til stede. Endvidere kan tilstedeværelsen af ​​cellulært affald føre til falske positiver, hvilket kan føre til forvirring i diagnosen.

Reference

1. Anvendt klinisk kemi. (2016). BK Kinyoun Kit. Tilgængelig på: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun-plet og to Coccidia i HIV. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Argentina. Redaktionel Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, Redaktion Panamericana SA
5. Wikipedia-bidragydere. "Kinyoun-plet." Wikipedia, The Free Encyclopedia. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 8. februar 2018. Web. 5. januar 2019.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Implementering af en farvningsteknik til samtidig diagnose af Coccidia og Microsporidia. Institut for Hygiejne ved Universitetet i Republikken. Montevideo. Uruguay. Fås på: hygiene.edu.uy