NEGATIV FARVNING: BEGRUNDELSE, TEKNIK, FORDELE OG ULEMPER - BIOLOGI - 2024

Den negative farvning er en metode til særlig farvning for at fremhæve tilstedeværelsen af ​​kapslen i nogle mikroorganismer, hovedsageligt Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae og Cryptococcus neoformans-, fra kliniske prøver eller rene kulturer.

Den direkte prøve, der ofte bruges til at påføre negativ farvning, er cerebrospinalvæske. Denne teknik repræsenterer et hurtigt alternativ til den formodede diagnose af meningitis, især Cryptococcus neoformans.

A. Tandstensten farvet med indisk blæk, B. Cryptococcus neoformans var gatti svagt indkapslet, da det forekommer i naturen ved hjælp af nigrosin. C. Cryptococcus neoformans var gatti med en tyk kapsel som findes i dens parasitiske form ved anvendelse af nigrosin. D. Cryptococcus neoformans med let fortyndet indisk blæk. Gisell Quinde, fra Wikimedia Commons / CDC, via Wikimedia Commons / Fotokredit: Indholdsudbydere (r): CDC / Dr. Leanor Haley, via Wikimedia Commons

Ligeledes kan denne plet påføres sputum og sterile væsker generelt såvel som på stammer opnået fra unge, rene kulturer. Denne teknik bruger nigrosin eller Indien-blæk til udførelsen; derfor er det en meget enkel og billig metode at anvende, der giver information af stor diagnostisk værdi på kort tid.

I denne forstand er ethvert laboratorium i stand til at udføre denne farvning. Naturligvis skal laboratoriet have kompetent personale, der er i stand til at genkende isolerede eller spirende Cryptococcus neoformans-gærer og adskille dem fra leukocytter og artefakter, som prøven kan præsentere.

Basis

Nigrosine og Indien blæk fungerer på en lignende måde; derfor kan en af ​​de to stoffer bruges om hverandre.

Denne teknik kaldes negativ farvning, fordi den fungerer på en modsat måde til resten af ​​farvningsteknikkerne. I dette er det, der forbliver ubegrundet, strukturen, der søges, eller som man ønsker at se; det vil sige mikroorganismer.

Derfor er farvning baseret på at farve bunden af ​​udstrygningen en mørk farve. I dette scenarie vil de kapslede strukturer skille sig ud i lys eller farveløs farve.

Generelt er gærerne kølig, omgivet af en klar glorie, der svarer til kapslen. Dette forekommer, fordi indisk blæk og nigrosin er stoffer, der ikke er i stand til at trænge igennem det polysaccharid, der udgør kapslen af ​​levende mikroorganismer.

Det er værd at bemærke, at andre strukturer, der kan være til stede i den direkte prøve, såsom leukocytter eller røde blodlegemer, ikke trænger igennem.

Hvis mikroorganismerne imidlertid er døde, kan farvestoffet trænge ind i dem, så denne farvning også er nyttig til at vurdere mikroorganismernes levedygtighed.

Teknik

materialer

nigrosin

Nigrosine skylder sit navn på den sorte farve, den har. Det er et syntetisk stof, der opnås ved at opvarme blandingen af ​​organiske forbindelser - såsom nitrobenzin, anilin og anilinhydrochlorit - ved anvendelse af en katalysator (jern eller kobber) i nævnte reaktion.

Kinesisk blæk

Kinesisk blæk er et stof, der hovedsageligt bruges af asiater til at skrive, fremstille kunstværker og monokromatisk maleri. Det er meget populært i kinesisk kultur.

Det fås fra blæksprutte blæk blandet med pulveriseret kul, produktet af brændende lavharpiksholdige træer.

Det er også muligt at fremstille det fra sodet fra forbrænding af kulbrinter (vegetabilske olier) sammen med en proteingelatine, der giver den den rette konsistens for at undgå udfældning af kulstofpartikler.

Specifikationer til prøveudtagning

- Det kræver ikke faste.

- CSF, sputum eller steril væskeprøve skal indeholde mindst 1 ml volumen og skal straks overføres til laboratoriet ved stuetemperatur.

- CSF- og sterilvæskeprøver skal udtages af en specialiseret læge.

- Det kan også være en ren kultur af en mistænksom stamme knyttet til de førnævnte patogener.

Udførelse af teknikken med direkte prøver

- Prøverne skal centrifugeres, derefter kasseres supernatanten, og sedimentet tages.

- En dråbe af det centrifugerede materiale (sediment) og en dråbe indisk blæk eller nigrosin anbringes på et rent objektglas.

- Det skal blandes godt og dækkes med et dækglas, så dråben kan sprede sig som en tynd film uden at gå over kanterne.

- Efterfølgende monteres præparatet på mikroskopet.

- Hvis præparatet er for mørkt, kan det fortyndes med vand.

Udførelse af teknikken med stammer fra kultur

- En meget lille del er taget fra en ung kultur med en såkanyle og opløst i en dråbe indisk blæk, der tidligere var placeret på en ren dias.

- Et dækglas er placeret på toppen.

- Det observeres i mikroskopet ved 10X og derefter ved 40X.

Du kan også opløse en del af kolonien i destilleret vand, og derfra tage et dråbe og blande det med indiens farve. På denne måde vil præparatet ikke være så tykt, hvilket gør det muligt at observere strukturerne isoleret; hvis der er skarer, overholdes det ikke godt.

En anden metode er følgende:

- Placer en dråbe af ophængskulturen i den ene ende af objektglasset.

- Læg en dråbe nigrosin i samme ende og bland.

- Spred prøven som ved at gøre en hæmatologisk udstrygning ved hjælp af et andet objektglas.

- Lad tørre og observer under mikroskopet.

Mikroskopobservation

Du skal først fokusere med et 10X mål for at have et bredt syn på feltet. Efterfølgende bør det søges, hvis der er klare mellemrum; hvis der er, skal du fokusere 40X for at se detaljer.

Fordel

- Det er nemt at udføre.

- Det er en billig teknik.

- Denne metode kræver ikke, at udstrygningen fastgøres til varme eller med kemikalier; derfor observeres mikroorganismer uden forvrængning.

- Det friske præparat behøver ikke at tørres, så det kan observeres øjeblikkeligt, hvilket giver resultater hurtigt.

Ulempe

Når de først er samlet skal friske præparater overholdes øjeblikkeligt; hvis de får lov til at tørre, er det ikke længere muligt at observere dem, og en ny skal installeres.

Vævfarvning med indisk blæk

En anden funktion, som Indien blæk kan udføre, er i patologilaboratorier. Dette anvendes til kirurgisk ekstraherede vævsprøver for at markere tumorens resektionsmargen.

Det markerede væv sprayes med eddikesyre. Dette fungerer som en mordant og forhindrer, at blæk lækker ud, når vævet udsættes for rutinemæssig behandling til biopsipræparatet.

Proceduren består i at bade vævet i alkohol og xylen og derefter blødgøre det i paraffinvoks. Denne markering guider patologen, når man observerer vævet, og indikerer hvor den kirurgiske resektionsmargin eller et andet interessepunkt er.

Referencer

1. «Nigrosina». Wikipedia, The Free Encyclopedia. 11 jul. 2017, 22:46 UTC. 6. januar 2019, 16:56: da.wikipedia.org
2. "Kinesisk blæk". Wikipedia, The Free Encyclopedia. 1 okt. 2018, 03:08 UTC. 6. januar 2019, 18:20: es.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J og samarbejdspartnere. (2006). Arbejdspersonale i det autonome samfund Extremadura. Specifik dagsorden Bind IV. Redaktionel MAD. Sevilla-Spanien, s. 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006). Specialistlaborator, Galician Health Service (SERGAS). Specifikt emne dagsorden bind 2. Redaktionel MAD. Sevilla-Spanien, s. 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Argentina. Redaktionel Panamericana SA