KOAGULASETEST: BEGRUNDELSE, PROCEDURE OG ANVENDELSER - BIOLOGI - 2025

Den koagulase test er et laboratorium teknik, der anvendes til at afsløre tilstedeværelse af enzymet coagulase. Dette enzym har egenskaben af ​​koagulering af plasma. Loeb i 1903 var den første, der beskrev dette enzym.

Denne test udføres på gram-positive, katalase-positive cocci, hvilket gør det muligt at skelne Staphylococcus aureus-stammer fra resten af ​​stafylokokkerne, da det er den eneste mikroorganisme af klinisk betydning, der producerer den.

Begge billeder afslører en positiv koagulasetest. Kilde: Venstre billede: Philippinjl. Højre billede: Foto taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil.

I denne forstand kaldes medlemmer af Staphylococaceae-familien, som tester negativt, ofte koagulase-negativ Staphylococcus.

Der er andre stammer end S. aureus, der kan frembringe koagulase, såsom Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius og S. delphini.

De første tre er imidlertid af klinisk betydning på veterinærniveau og kunne meget sjældent findes som et årsagsmiddel til infektioner hos mennesker, mens S. delphini kun findes i marine miljøer.

Desuden kan de let differentieres, fordi S. hyicus og S. intermedius ikke fermenterer mannitol, og S. schleiferi spp coagulans ikke fermenterer maltose eller trehalose, mens S. aureus fermenterer disse kulhydrater.

Tilstedeværelsen af ​​koagulaseenzymet er blevet knyttet til stammens virulens. Imidlertid er denne teori faldet fra hinanden, da andre virulente koagulase-negative arter, der er i stand til at producere betydelige infektioner, observeres.

Basis

Tolkning

Agglutination inden for 5-20 sek (stærk positiv test).

Variabel agglutination, der forekommer mellem 20 sekunder og et minut (forsinket positiv test).

En vis grad af agglutination efter et minut (tvivlsomt bevis). Det anbefales at gentage testen eller bekræfte ved hjælp af rørmetoden.

Der er ingen agglutination (negativ test).

Resultat med SSF. Det skal altid give negativt, hvis det automatisk giver positivt, er testresultatet ugyldigt.

-Tube koagulasetest

materialer

-Sterilt reagensglas

Plasma

-Bad af Mary ved 37 ° C

Teknik

Pipetter 0,5 ml plasma i et 12 x 75 reagensglas med en steril pipette. Sæt platineløkken i med 2 til 4 rene kolonier for at studere fra en fast kultur i 18 til 24 timer og opløses i plasmaet bland forsigtigt og inkuber ved 37 ° C i 4 timer.

Undersøg røret i den første time uden at ryste det, vip det forsigtigt. Hvis en koagulat stadig ikke ses, kan den fortsat observeres hvert 30. minut, indtil de 4 timer er afsluttet. Hvis det efter 4 timer stadig er negativt, kan det stå i op til 24 timer, men ved stuetemperatur. Overhold og rapporter resultatet.

Baseret på erfaring anbefaler nogle mikrobiologer at bruge 500 ul af en bakteriesuspension fra en 18-timers kultur i flydende medium til at udføre testen.

Det ser ud til at tilbyde hurtigere og mere pålidelige resultater end når der emulgeres kolonier fra faste medier, især hvis humant plasma opnået fra blodbanken er blevet anvendt.

Anvendelse af stammer fra en bouillon hjælper med at fortynde den mulige tilstedeværelse af humane anti-stafylokokker antistoffer i plasmaet, der kan hæmme virkningen af ​​koagulase.

Tolkning

Hvis der ses en koagulat, der omfatter al væske (fuldstændig koagulation) eller koagulering uden noget i den resterende væske (delvis koagulation), skal det betragtes som en positiv test.

Hvis der ikke dannes nogen koagulat, dvs. suspensionen forbliver homogen, er testen negativ.

-Coagulase-test ved anvendelse af fibrinogen

Fibrinogen bruges på samme måde som plasma og bruges til både objektglas- og rørforsøg. Fortsæt som beskrevet for plasma, og fortolk på samme måde.

Brug

Det bruges til at differentiere Staphylococcus aureus fra koagulase-negative stafylokokker.

QA

Har friske kulturer af en S. aureus-stamme til rådighed, der kan bruges som en positiv kontrol. En S. epidermidis-stamme er også tilgængelig som en negativ kontrol.

Begrænsninger

-En positiv test bør ikke efterlades i inkubation i 24 timer, da S. aureus producerer et fibrinolysin, der opløser koagulatet.

-For en pålidelig test skal der bruges frisk eller nyrekonstitueret plasma, såvel som det er vigtigt at bruge friske bakteriekulturer (18 til 24 timer). Dette undgår falske negativer.

-Testen skal udføres sammen med en negativ og en positiv kontrol.

-Nogle faste medier kan forstyrre koagulasetesten. Det anbefales ikke at bruge kolonier fra salt mannitol-agar.

-Hvis citrateret plasma bruges, anbefales det at placere 5 enheder heparin pr. Ml plasma for at undgå falske positiver. Dette skyldes, at nogle andre mikroorganismer end S. aureus kan nedbryde citrat og få plasmaet til at koagulere. I dette tilfælde anbefales det at foretage en Gram- og en katalasetest.

-Det er vigtigt i røretest at overvåge reaktionen hvert 30. minut, da der er stammer af S. aureus, der producerer høje koncentrationer af fibrinolysin og hurtigt vil fortynde den nydannede koagulat. Undgå falske negativer.

-Når overvågning af testen, undgå at ryste røret pludseligt, kan dette ødelægge påbegyndelsen af ​​koagulationsdannelse, som ikke vil blive gendannet senere, og forårsage falske negativer.

Referencer

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemiske test til identifikation af bakterier af klinisk betydning. 3. udg. Redaktionel Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Pro-Lab-laboratorier. Kanin koagulerer plasma. Fås på: pro-lab.com
5. "Koagulase." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 12 feb. 2019, 04:23 UTC. 22. april 2019, 15:50 wikipedia.org.