CONGO RØD: EGENSKABER, FORBEREDELSE OG APPLIKATIONER - BIOLOGI - 2025

Den Congorød er et azofarvestof for proteiner dannet ved kobling af et diazoniumsalt og en aktiv aromatisk ring. Dette stof er i stand til at absorbere elektromagnetisk stråling i det synlige spektrum, hvorfor det har en intens farve.

Det er negativt ladet. Derfor har det en affinitet for positivt ladede cellulære komponenter, såsom visse proteinstoffer. Dens farve varierer afhængigt af pH. I denne forstand, hvis mediet er surt (<end pH3), er farven intens blå. Mellem pH3 - pH 5,2 er det fuchsia (drejningszone), og med> pH 5,2 er farven dyb rød.

Dehydreret Congo Red og Congo Red colloidal opløsning. Kilde: Pixinio.com og Wikipedia.com

Det er et meget alsidigt stof, da det har flere anvendelser. Det er blevet brugt som farvestof i tekstilindustrien og også til celler og tekstiler.

Også til at fremstille kulturmedier, der måler enzymatisk virkning, som en pH-indikator, som et kontrolstof i vurderingen af ​​spektrofotometres funktion, i studiet af biofilmdannelse eller i diagnosen af ​​amyloider.

Ligeledes har det gjort det muligt at skelne bakterie- og svampeserotyper ved at identificere specifikke strukturer i deres væg (lipopolysaccharider).

Egenskaber ved Kongo rød

Dette stof blev opdaget af Böttiger i 1884. Det er et diazoniumderivat dannet af bis-diazoesyren af ​​benzidin med naphthionsyre. Kongos røde molekyle måler 21 Armstrong, og molekylvægten er ca. 8000 g / mol.

Congo rød er kendetegnet ved at være opløselig i vand, og i endnu højere grad i organiske opløsningsmidler såsom ethanol, hvilket danner en kolloid opløsning.

Det har en affinitet for cellulose, for amyloidvæv og for positivt ladede cellulære komponenter.

Forberedelse

Congo Red tilberedes i forskellige koncentrationer afhængigt af den teknik, der skal anvendes. De fleste bruger Congo-rød på blandt andre 1%, 2%, 0,1%.

For eksempel til fremstilling af 2% Congo rød, skal 2 g dehydreret madfarve vejes ud og 100 ml destilleret vand tilsættes. Derefter opbevares det i en rav flaske.

Applikationer

Som farvestof i tekstilindustrien

I et stykke tid blev det meget brugt i tekstilindustrien på grund af dets fiksering i bomuld, men i øjeblikket er det i brug, fordi det er kræftfremkaldende, og også fordi farven ikke er stabil, misfarvning ved gnidning.

Bestemmelse af biofilmdannelseskapacitet

Den biofilmdannende kapacitet af mikroorganismer har vist sig at være en virulensfaktor.

I denne forstand bruges Kongo-røde farvestof som en metode til bestemmelse af dannelse af biofilm. Kongo-rød binder til eksopolysaccharider, der findes i biofilmen. Sammenlignet med andre metoder er det dog det mindst anbefalede på grund af de høje falske negativer, der opstår.

Metoden bruger Kongo-rød agar, denne er sammensat af blodagar som base, glucose (10 g / l) og Congo-rødfarve (0,4 g / l). Stammerne, der skal evalueres, podes i mediet og inkuberes i 24 timer ved 37 ° C og inkuberes derefter i 48 timer ved stuetemperatur.

En positiv test påvises, hvis der observeres krystallinske kolonier med sort farve og tørt udseende.

Kvalitetskontrol af spektrofotometre

For at evaluere, om et absorbans- eller transaktionsmåleudstyr overholder de fotometriske parametre, der er fastlagt i internationale forskrifter, kan en simpel teknik anvendes til at bestemme, om udstyret afgiver resultater inden for acceptabilitetsområdet.

En af evalueringsteknikkerne bruger Kongo-rød, baseret på det isosbestiske punkt.

Det isosbestiske punkt er den bølgelængde, ved hvilken Kongo rød udsender den samme absorbans uafhængigt af pH, koncentration og temperatur. Absorptionsværdien er fast og kan bruges som reference.

Det er kendt, at det teoretiske isosbestiske punkt ved Kongo rød er 541 nm. Hvis den opnåede værdi er forskellige, vides det, at udstyret har problemer med bølgelængden, og det skal kontrolleres af en specialiseret tekniker.

Forberedelse af kulturmedier

Ortiz et al. Beskriv et kulturmedium fremstillet med Kongo-rødt farvestof og carboxymethylcellulose kaldet CMC-agar for at detektere cellulitmikrobielle stammer; dvs. cellulaseproducenter (endogluconeses, exoglucanases og ß-glucosidase).

Dette medium har en intens farve. Farven spredes ved virkningen af ​​endoglucanase-enzymet, der bryder strukturen af ​​carboxymethylcellulose. Dette antyder en positiv reaktion.

Faldet i viskositet og absorbans gør det muligt at kvantificere enzymaktiviteten. For eksempel i stammer af Streptomyces sp.

Identifikation af mikroorganismer

Congo rød har en affinitet for polysaccharidstrukturer af bestemte stammer og opnår således identifikationen af ​​disse mikroorganismer. Blandt dem er Escherichia coli og Shigella flexneri.

Kongo-røde agarplader bruges også til at opnå karakteristiske kolonier, som det er tilfældet med Azospirillum sp, der giver blandt andet røde røde kolonier.

Celle- og vævsfarvning

En af de mest almindelige anvendelser af Congo red er dens nytte ved diagnosticering af amyloidose. Denne mærkelige sygdom består af den ekstracellulære ophobning af et unormalt protein i forskellige organer. Dette unormale protein fremstilles i knoglemarven og kaldes amyloid.

Congo rød har en høj affinitet for dette stof. Denne egenskab er blevet brugt til at vise dens tilstedeværelse i histologiske vævsafsnit. Congo Red bruges i forbindelse med Hematoxylin / Eosin til dette formål.

Forbindelsen af ​​amyloidvævet og Congo-røde sker gennem ikke-polære brintbindinger mellem carboxylgrupperne og aminogruppen. Amyloidprotein giver carboxylgrupperne (COOH) og Congo rød aminogruppen.

Amyloidvæv er farvet i forskellige nuancer, der spænder fra lyserød til dyprød, når det ses under lysmikroskopet. I mikroskoper med dobbelt polariseret lys observeres disse præparater med en patognomonisk æblegrøn birefringence.

Det vil sige, de udviser dikroisme, da amyeloidfibrene er anisotrope. Denne observation bekræfter diagnosen.

Vævfarvning med Congo rød er kompatibel med andre diagnostiske metoder, såsom immunocytokemiske metoder, og kan endda genfarves.

Som en pH-indikator

Egenskaben ved at vende sig mod ændringer i pH bruges ved teknikken kaldet kromoendoskopi.

Denne teknik bruger farvestoffer og pH-indikatorer, der tillader påvisning af visse patologier. Blandt dem er brugen af ​​Congo rød, der kan afsløre tidlige kræftfoci i maveslimhinden, der bruges som markør for surhed.

Teknikken er baseret på det faktum, at Congo rød ved sur pH er sort. Derfor, efter anbringelse af en opløsning af Congo rød på maveslimhinden, vil de områder, hvor der er blekhed, blive valgt til at tage prøven til biopsien, dvs. hvor der ikke er syreproduktion. Dette antyder tilstedeværelsen af ​​et kræftfokus eller tab af parietalceller.

Referencer

1. "Congo Red." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 8. maj 2019, 12:13 UTC. 16. maj 2019, 04:08, es.wikipedia.org.
2. Ortiz M, Uribe D. Ny metode til kvantificering af endoglucanaseaktivitet baseret på det røde cellulose-Congo-kompleks. Orinoquia. 2011 juni; 15 (1): 7-15. Tilgængelig fra: scielo.org.
3. Peña J, Uffo O. Biofilmproduktion i genotyper af Staphylococcus aureus isoleret fra bovin mastitis i Cuba. Rev Salud Anim.. 2013 dec; 35 (3): 189-196. Fås på: scielo.s
4. Fich F, Chahuán M, Farías M, Cárdenas C, Abarzúa A, Araya G et al. Kutane manifestationer af systemisk amyloidose som en diagnostisk nøgle: Klinisk tilfælde. Past. Medic. Chile. 2012 apr; 140 (4): 499-502. Fås i: scielo.
5. Duymovich C, Acheme R, Sesini S, Mazziotta D. Spektrofotometre og fotokolorimetre Praktisk opdateringsvejledning. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana 2005, 39 (september-december): Tilgængelig på: redalyc.org
6. Marín J, Díaz J og Solís J. Kromoendoskopi ved Helicobacter pylori-infektion: er det reaktionstid? Rev Esp Enferm Dig 2012; 104 (1): 1-3
7. Fieser L, Fieser M. 1985. Organisk kemi. Redaktionel Reverté. Barcelona, ​​Spanien. Fås på: books.google.co.ve
8. Murillo M. Histologiske vævfarvningsteknikker. University of Guadalajara, Mexico. Fås på: academia.edu
9. Paillié M. Bestemmelse af cellulolytisk, ligninolytisk og amylolytisk aktivitet af Actinobacteria isoleret fra rhizosfærisk jord af hvidkløver (Trifolium repens). 2012. Pontificia Universidad Javeriana Det Videnskabelige Fakultet Industriel mikrobiologi Bogotá DC Tilgængelig på: repository.javeriana.edu.co
10. Cárdenas, D, Garrido M, Bonilla R, & Baldani V. Isolering og identifikation af Azospirillum sp. på Guinea græs (Panicum maximum Jacq.) fra Cesar Valley. Græsarealer og foderbakker, 2010; 33 (3): 1-8 Fås i: scielo.