EC-BOUILLON: FUNDAMENT, KLARGØRING OG ANVENDELSE - BIOLOGI - 2025

Den EF-bouillon eller bouillon Escherichia coli er et selektivt flydende dyrkningsmedium. Dette medium anbefales ved hjælp af standardmetoderne til at tælle totale og fækale coliformer ved hjælp af den mest sandsynlige taleteknik (MPN) i vand og fødevareprøver, hvor det vigtigste middel er involveret i Escherichia coli.

EC-bouillon er sammensat af triptein, lactose, galdesalte, dipotassiumphosphat, monopotassiumphosphat, natriumchlorid og vand. Dens formel er strategisk designet til at favorisere væksten af ​​totale og fækale coliformer og forhindre udvikling af andre ledsagende mikroorganismer.

Figurativ gengivelse af forberedelsen af ​​EF-bouillon. Kilde: Pixabay.com

Escherichia coli-bakterien er den vigtigste fækale coliform, der er til stede som en forurening i vand og fødevarekilder, idet den er årsagen til vigtige mave-tarmforstyrrelser.

Det skal bemærkes, at der er mange serotyper af Escherchia coli; Blandt dem kan vi nævne enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteopathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) og enteroaggregative (EAEC).

Dette medium har evnen til at tillade udvikling af dem alle, men uden at være i stand til at differentiere dem fra hinanden. Dette kræver yderligere test.

Den mikrobiologiske undersøgelse af vand og mad med det mest sandsynlige antal (MPN) for at søge efter totale og fækale coliformer er en protokol, der består af flere faser; formodningsfase, bekræftelsesfase og afsluttende fase. EF-bouillon bruges i den bekræftende fase.

Basis

EF-bouillon

EF-mediet er baseret på at tilvejebringe de ernæringselementer, der er nødvendige for optimal udvikling af totale og fækale coliforme former, hvor Escherichia coli-bakterierne er inkluderet.

Disse ernæringselementer leveres af triptein, som er en fremragende kilde til peptider og aminosyrer. Derudover indeholder den også lactose, et gæret kulhydrat, der giver energi og giver mulighed for at vise, om bakterierne producerer gas.

På den anden side indeholder mediet galdesalte, der giver den selektive karakter, eftersom det hæmmer væksten af ​​Gram-positive mikroorganismer, der kan være til stede i prøven.

Ligeledes fungerer dipotassiumphosphat og monopotassiumphosphat som et pH-afbalanceringssystem. Dette system er nødvendigt, fordi laktosen indeholdt i bouillon har en tendens til at forsure mediet, når det fermenteres af mikroorganismer, men dette kompenseres af phosphatsalte.

Derfor er disse elementer essentielle, da ukontrolleret surhedsgrad kan påvirke den rette udvikling af de ønskede mikroorganismer.

På sin side stabiliserer natriumchlorid mediet osmotisk, mens vand er opløsningsmidlet for de tilstedeværende opløste stoffer og tilvejebringer væskekonsistensen til mediet.

Novobiocin-modificeret EC-bouillon

Okrend og Rose skabte en række EF-bouillon, kaldet novobiocinmodificeret EF-bouillon. Modifikationen bestod i at reducere koncentrationen af ​​galdesalte og tilsætte 20 mg / dl novobiocin.

Denne modifikation favoriserer gendannelse af enterohemorrhagiske Escherichia coli-stammer (O157: H7).

Denne bakterielle serotype forårsager alvorlig hæmoragisk colitis, der kan føre til hæmolytisk uremisk syndrom (HUS); hvilket igen kan generere akut nyresvigt med en høj dødelighed, der kan nå op til 50% hos ældre.

På grund af sygeligheden og dødeligheden forårsaget af denne bakterie årligt på grund af forbruget af forurenet mad, anbefaler det amerikanske landbrugsministerium (USDA) stærkt brugen af ​​dette medium.

Forberedelse

EF-bouillon

Vej 37,4 g af det dehydratiserede medium og opløst i 1 liter destilleret vand. Blandingen skal henstå i 5 minutter. Efterfølgende i en varmekilde afsluttes det ved at omrøre ofte.

Når den er opløst, distribueres den i forkonditionerede prøverør med et Durham-rør inde. Steriliser i autoklave ved 121 ° C i 15 minutter.

PH i mediet bør være 6,9 ​​± 0,2. Farven på det dehydratiserede medium er beige, og det tilberedte medium er lys gul.

Bouillonerne opbevares i køleskabet indtil brug. På brugstidspunktet skal bouillonerne være ved stuetemperatur.

På den anden side kan EF-bouillon også fremstilles ved dobbeltkoncentration.

Novobiocin-modificeret EC-bouillon

Afvej 36,7 g dehydreret medium og opløst i 1 liter vand. Resten af ​​præparatet er det samme som beskrevet ovenfor.

Brug

Total og fecal coliform analyse

EC-bouillon er ideel til den bekræftende fase af studiet af coliforme ved NMP-metoden, både i vandprøver såvel som i farmaceutiske produkter og fødevarer.

Grumset, gasproducerende lactosebuljong, der er opnået i den formodende fase, skal frøes igen i 2% lysegrønne buljongterninger og EF-bouillon.

For samlede coliforme inkuberes EF-bouillon aerobt i 24 til 48 timer ved 37 ° C, og for fækale coliformer inkuberes de aerobt i 24 til 48 timer ved 44 ° C.

I begge tilfælde fortolkes det som følger: uklare rør med gasproduktion betragtes som positive. Hvis der ikke er nogen gasproduktion på 24 timer, fortsætter inkubationen i op til 48 timer.

EF-positive buljonger går til den fulde bekræftelsesfase, der består af genoptagning på selektive medier såsom Mac Conkey-agar, EMB-agar eller Endo-agar.

Hvis den anvendte bouillon er novobiocinmodificeret EC, anbefales positive rør, at der indføres på Mac Conkey-agar med sorbitol.

QA

Hver batch af forberedt medium skal være kvalitetskontrolleret. Først skal mediets sterilitet vurderes. I denne forstand inkuberes en eller to bouillon uden inokulation i aerobiose i 24 timer ved 37 ° C. Det forventede resultat er en gennemsigtig bouillon uden uklarhed eller farveændring.

For det andet skal væksten af ​​kendte stammer evalueres, for dette kan følgende bakterier anvendes: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

I alle tilfælde forventes en tilfredsstillende mikrobiel udvikling, idet man observerer en overskyet bouillon med gasproduktion til E. coli og ingen gas til Salmonella.

Andre stammer, der kan inkluderes i kontrollen, er: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Disse stammer skal inhiberes fuldstændigt.

anbefalinger

-Placeringen af ​​Durham-rørene er vigtig for undersøgelsen af ​​coliforms.

-Distribuer mediet i prøverørene før sterilisering, aldrig efter.

-Brug ikke hvis mediet er mere end 3 måneder gammelt.

- Brug ikke, hvis der observeres nogen ændring i mediets sædvanlige egenskaber.

Referencer

1. Britannia Laboratories. EC Medium. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
2. Enterohemorrhagic E. coli. Center for fødevaresikkerhed og folkesundhed. 2010. Tilgængelig på: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. EF-medium. Fås på: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Novobiocin-modificeret EF-medium. Fås på: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Påvisning, isolering og karakterisering af Escherichia coli, der producerer Shiga-toksin fra fersk, malet kød fra slagtere i Concepción, provins fra Tucumán. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Tilgængelig på: www.scielo.org.