LAKTOSERET BOUILLON: FUNDERING, KLARGØRING OG ANVENDELSE - BIOLOGI - 2025

Den lactose bouillon er en hjælp af ikke - selektive flydende dyrkningsmedium hovedsagelig anvendes som et for-berigelse ved isoleringen af Salmonella stammer fra mikrobiologisk analyse til forarbejdede fødevarer, mejeriprodukter eller vand. Dette anbefales af Den Internationale Kommission for Mikrobiologiske Specifikationer for Mad (ICMPF).

Mediet indeholder enzymatisk fordøjelse af gelatine, kødekstrakt og lactose, stoffer, der er nødvendige for bakterievækst. Desuden er lactose et gæret kulhydrat, derfor er nogle coliformer i stand til at nedbryde det ved produktion af gas.

Ammede buljonger med uklarhed. Kilde: Foto taget af forfatteren MSc. Marielsa gil

Af denne grund anbefales laktosebuljong af American Public Health Association (APHA) til den formodende undersøgelse af samlede og fækale coliforme bakterier, hvilket kvalificerer det som et fremragende alternativ til at erstatte tryptose laurylsulfatbuljong i standardteknikken for det mest sandsynlige antal (MPN).), brugt til mikrobiologisk analyse af fødevarer, mælk og overfladevand, underjordiske, rekreative, husholdnings- og industriaffaldsprøver.

Basis

For den mikrobiologiske analyse af nogle prøver er præberikningstrinet essentielt for at være i stand til at genvinde en specifik mikroorganisme, der kan være i meget lav mængde eller under ugunstige betingelser, der krænker eller minimerer dens levedygtighed.

Dette er tilfældet med tørrede og forarbejdede fødevarer, muligvis forurenet med Salmonellas sp. I disse tilfælde, hvis bakterierne er til stede, har de lidt fysisk og kemisk misbrug under produktionsprocessen.

På en sådan måde, at mikroorganismer udsættes for uheldige faktorer, såsom dehydrering, eksponering for hæmmende eller toksiske produkter, og overlapningen genereret af tilstedeværelsen af ​​andre bakterier i større mængde, blandt andre.

I denne forstand har laktosebuljongen en reparerende virkning på de beskadigede strukturer i mikroorganismen, hvilket får den til at komme sig og reproducere på en sådan måde, at den kan opdages.

Ligeledes har laktosebuljan evnen til at fortynde de inhiberende stoffer, der kan påvirke dens levedygtighed, hvilket tillader dens udvikling. Derudover er ernæringssammensætningen af ​​lactosegulden strategisk for at favorisere væksten af ​​Salmonella sp i forhold til andre mikroorganismer.

For endelig identifikation skal det subkultureres til andre endelige kulturmedier.

På den anden side gør sammensætningen af ​​mediet det også muligt at detektere lactosegærende mikroorganismer, der producerer gas.

Forberedelse

For at fremstille en liter lactosebuljong skal 13 gram af det dehydrerede medium vejes og opløses i 1000 ml destilleret vand.

For at hjælpe med at opløse mediet i vandet kan opløsningen opvarmes lidt, men ikke for meget.

Når den først er homogen, fremstilles opløsningen som følger: hvis bouillon skal bruges til at søge efter coliforme, fremstilles et rack af reagensglas, hvori et Durham-fermenteringsrør indsættes på hovedet.

Durham-røret er en meget vigtig detalje, fordi det giver mulighed for påvisning af gasdannelse, en data af stor værdi i søgningen efter coliforme.

Når rørene er klar, udleveres 10 ml af laktosebuljong i dem, en mængde, der skal være tilstrækkelig til at dække hele Durham-røret.

Hvis laktosebuljong skal bruges som en præberikningsbuljong, er det ikke nødvendigt at placere et Durham-fermenteringsrør. I dette tilfælde kræves en større mængde medium (225 ml), som serveres i 500 ml flasker, bred mund og med en termobestandig skruehætte.

Derefter autoklaveres rørene eller kolberne ved 121 ° C i 15 minutter.

Mediet skal forblive ved en endelig pH på 6,9 ± 0,2 ved 25 ° C.

Bouillonerne opbevares i køleskabet indtil brug.

Inden brug skal bouillederne bringes til stuetemperatur.

På den anden side kan lactosebuljong også fremstilles i dobbeltkoncentration.

Nogle laboratorier tilføjer bromocresol-lilla til laktosebuljongen som en pH-indikator for at vise rørene, hvor laktosen er blevet gæret på grund af farveændringen. I dette tilfælde tager bouillon en lilla farve, og hvis der er gæring, bliver den gul.

Applikationer

I mikrobiologilaboratorier bruges laktosebuljong i vid udstrækning, da det er et relativt billigt medium, der giver pålidelige og hurtige resultater (24-48 timer).

Det kan bruges til analyse af totale og fækale coliformer i mad og vand eller som en præberikningsbuljong til Salmonella.

Pre-berigelse

Forberigelse er et trin forud for prøveberigelse, hvilket i høj grad forbedrer genvindingen af ​​bakterier i slægten Salmonella i forarbejdede fødevarer.

For at gøre dette podes den faste fødevareprøve (25 gram) eller væske (25 ml) i 225 ml laktosebuljong, inkuberes i 24 til 48 timer. Efterfølgende subkultureres det i et beriget medium, såsom selenitcystinbuljong eller tetrathionatbuljong. Gå derefter videre til XLD og SS-selektive medier.

Total og fecal coliform analyse

Det er et fremragende medium som indikator for fækal kontaminering.

Af denne grund er laktosebuljong ideel til den formodende fase i coliformundersøgelsen ved metoden Most Probable Number.

For prøver, hvor der er mistanke om en stor mængde coliforms, inokuleres en mindre mængde af den (1 ml), mens for prøver, hvor der er mistanke om en mindre mængde coliforms, inokuleres et større volumen prøver (10 ml).

Til analysen foretages ^10-1, 10 ^-2, ^10-3 fortyndinger, der danner et batteri på 3-5 rør for hver anvendt koncentration.

Fra hver fortynding podes det samme volumen i laktosebuljterne.

Rørene inkuberes i 24 timer. Negative bouillon inkuberes i yderligere 24 timer.

Fortolkningen af ​​resultaterne foretages ved at observere to egenskaber: den første er tilstedeværelsen eller fraværet af uklarhed, og da dette medium ikke indeholder en pH-indikator, vil der ikke være nogen farveændring.

Den anden er produktion eller ej af gas. Der kan let påvises gas i Durham-røret ved udseendet af en eller flere luftbobler inde i det.

Det betragtes som positivt, hvis begge egenskaber overholdes, dvs. turbiditet ved gasproduktion. Positive rør skal frøes igen i bekræftelsesmedier (2% Brilliant Green Bile-bouillon og EF-bouillon).

Kvalitetskontrol af mediet

- Når man forbereder mediet, er det vigtigt ikke at glemme at placere Durhams-rørene, hvis formålet med det samme er at studere coliforms.

- Må ikke overophedes mediet før sterilisering.

- Distribuer i prøverør før sterilisering, aldrig efter.

- Brug ikke, hvis mediet er mere end 3 måneder gammelt.

- Brug ikke, hvis du observerer ændringer i mediets sædvanlige egenskaber.

- Når du tilbereder en batch af laktosebuljong, skal du teste dens kvalitet ved at så kendte stammer såsom Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii og Klebsiella pneumoniae. De vokser meget godt med gasproduktion (positiv kontrol).

- Det kan også omfatte Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium eller Enterococcus faecalis, der vokser godt, men uden gasproduktion (negativ kontrol).

- Det skal bemærkes, at den originale farve på det dehydrerede medium er beige, og at det forberedte medium er meget lys og gennemsigtig gul. Hvis der ses en ændring i farve eller udseende, kan det forringes.

Referencer

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Miljøbiologi og mikrobiologi. (2013) 1. udgave. University of Cartagenas, Colombia.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B og Velázquez O. (2009). Teknikker til mikrobiologisk analyse af fødevarer. 2. udgave Fakultet for kemi, UNAM. Mexico.
3. Conda Pronadisa Laboratories. 2017. Dobbeltkoncentration af laktosebuljong (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Sammenligning af teknikker til ekstraktion af coliforme bakterier fra sedimentet i søen Xochimilco, Mexico. Pastor argent. Microbiol. 2013; 45 (3): 180-184. Fås på: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Bestemmelse af den mikrobiologiske kvalitet af artesisk brøndfarvande i distrikterne i Central-, Cordillera- og Capital Municipality-afdelingerne. Mem. Inst. Investig. Videnskab. Sundhed 2013; 11 (1): 5-14. Fås fra: scielo.iics.