MALONAT BOUILLON: FUNDAMENT, KLARGØRING OG ANVENDELSE - BIOLOGI - 2025

Den malonat bouillon er det flydende dyrkningsmedium anvendes til den diagnostiske test (malonat), anvendes til at differentiere nogle slægter af familien Enterobacteriaceae. Det blev oprettet af Leifson i 1933 og senere modificeret af Ewing, der tilføjede en lille mængde dextrose og gærekstrakt til den originale formel.

Mediet er i øjeblikket sammensat af gærekstrakt, ammoniumsulfat, dipotassiumphosphat, monopotassiumphosphat, natriumchlorid, natriummalonat, dextrose og bromothymolblå. Denne test er generelt inkluderet i det biokemiske identifikationsbatteri for Enterobacteriaceae, hvilket hjælper med at differentiere visse slægter og arter.

Grafisk repræsentation af malonatetesten. A. Negativ test, B. (Forsuring) Negativ test, C. (Medium alkalisering) Positiv test. Kilde: Color tubes publicdomainpictures.net

Malonat-testen er hovedsageligt baseret på evnen hos nogle mikroorganismer til at bruge natriummalonat som deres eneste kulstofkilde og ammoniumsulfat som deres nitrogenkilde.

Malonat-testen er normalt positiv i nogle arter af Enterobacter-, Klebsiella- og Citrobacter-slægterne. Hvorimod de fleste arter af slægterne Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus og Providencia giver en negativ reaktion.

Basis

Malonatforsøget består af at vise de bakterier, der er i stand til at bruge natriummalonat som den eneste kulstofkilde og ammoniumsulfat som nitrogenkilden.

De fleste Enterobacteriaceae, der ikke bruger malonat, er i stand til at vokse i dette medium ved at tage dextrose og gærekstrakt som næringsstoffer.

I dette tilfælde modvirkes ethvert forsøg på at alkalisere ved anvendelse af peptoner ved fremstilling af syrer dannet ved fermentering af dextrose. Ligeledes fungerer dipotassium og monopotassiumphosphater som en buffer, idet pH holdes på 6,7.

Derfor er bouillon den samme originale farve (grøn), når testen er negativ. I sjældne tilfælde kan mediet blive surt på grund af fermentering af dextrose; uden anvendelse af peptonerne og pH-indikatoren ville det vende farven på mediet mod gult. For at dette skal ske, skal pH-værdien falde til 6.

Når denne test imidlertid er positiv, siges det, at mikroorganismen anvendte henholdsvis malonat og ammoniumsulfat som kulstof- og nitrogenkilder uden at bruge de andre komponenter.

I dette tilfælde bliver mediet alkalisk på grund af frigivelsen af ​​natrium og den deraf følgende dannelse af NaOH. I denne forstand vender pH-indikatoren (bromothymolblå) farven på mediet fra grønt til blåt, når pH er lig med eller større end 7,6. Blå kan være lys eller intens (preussisk blå).

Endelig opretholder natriumchlorid mediets osmolaritet, og vand er fortyndingsmidlet for alle komponenter.

Tolkning

Samme farve bouillon (grøn) - negativ test

Gul bouillon: negativ test

Lys eller dybblå bouillon: test positiv

Der er en variant, der kaldes phenylalaninmalonatbuljong, også kaldet Shaw og Clarke's medium. I dette tilfælde kan to test analyseres, brugen af ​​malonat som en kulstofkilde og produktionen af ​​pyruvinsyre fra phenylalanin.

Forberedelse

Malonat bouillon

Antallet af gram, der er angivet ved indsatsen til det valgte kommercielle selskab vejes (det kan variere fra det ene til det andet). De vejede gram suspenderes i en liter destilleret vand. Varm lidt op, indtil den er helt opløst. Fordel 3 ml af mediet i 13/100 reagensglas med bomuldshætter.

Steriliser i autoklave ved 121 ° C i 15 til 20 minutter.

Afkøles inden brug. Hvis de ikke skal bruges med det samme, skal de opbevares i køleskabet indtil brug. Bring buljongtene til stuetemperatur, inden inokulering.

PH i mediet bør være 6,7 ± 0,2. Farven på det forberedte medium er flaskegrøn.

Phenylalanin Malonate Bouillon

Vej 11 g af det dehydrerede medium og opløs i 1 liter destilleret vand. Resten af ​​præparatet er det samme som tidligere beskrevet.

Det kan også fremstilles ved at tilsætte 2 g / l phenylalanin til malonatbuljongmediet, før det steriliseres.

Brug

Det bruges som en del af batteriet til biokemiske tests, der er samlet til identifikation af bakterier fra Enterobacteriaceae-familien.

Hjælper med at skelne mellem:

-Slægten Klebsiella og Enterobacter (+) af slægten Escherichia og Serratia (-).

-Arten af ​​Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame og Salmonella enterica ssp diarizonae (+), af arten Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Fra slægten Klebsiella generelt (+) fra slægten Actinobacillus (-).

-Andre kan det hjælpe med at differentiere slægter og arter af bakterier, der ikke hører til Enterobacteriaceae-familien, såsom blandt de ikke-gærende Gram-negative baciller Alcaligenes faecalis (+) og Acinetobacter sp (-).

Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.

Behandle

Under en lighter tages en del af en ren köln ved hjælp af et korrekt steriliseret og afkølet platinhåndtag. Den udtagne prøve (let inokulum) opløses i malonat-bouillon. Inkuber med låget løs i aerobiose ved 35 ° C ± 0,2 i 24 til 48 timer.

Malonatbuljong kan også inokuleres fra en 18-24 timers kultur i trypticase sojabrug. I dette tilfælde tages 0,01 ml med en steril pipette, og malonat bouillon inokuleres. Inkuber med låget løs i aerobiose ved 35 ° C ± 0,2 i 24 til 48 timer.

I slutningen af ​​tiden fortolkes resultaterne. Ethvert spor af blå farve efter 48 timers inkubation skal betragtes som positivt. Testen skal ikke tolkes som negativ, før 48 timers inkubationstid er gået.

I tilfælde af anvendelse af phenylalaninmalonatbuljongvariant fortolkes malonatet først, og derefter tilsættes 5 dråber 1 N HCI og 3-5 dråber 8% jernchlorid. En mørkegrøn farve fortolkes som en positiv test for phenylalanin. Hvis mediet på den anden side bliver lyseblå, er testen negativ for phenylalanin.

QA

For at udføre sterilitetskontrollen af ​​mediet skal en eller to bouilletter inkuberes ved 35 ° C ± 0,2 i 24 timers inkubation. Efter dette tidspunkt bør der ikke være nogen sky eller farveændring.

Til kvalitetskontrol kan kendte eller certificerede stammer bruges, såsom: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 og Escherichia coli ATCC 25922.

De forventede resultater er:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae og Salmonella enterica ssp arizonae giver en positiv reaktion (medium blå farve).
• For Escherichia coli bør resultatet være negativt, det vil sige, det forventes, at der ikke vil være nogen farveændring (grøn), eller at det bliver gul på grund af gæring af glukose.

Begrænsninger

Brug ikke bouillon, der viser uklarhed, bundfald, farveændring eller tegn på forringelse.

Referencer

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Mikrobiologisk isolering af Salmonella spp. og molekylære værktøjer til detektion. Uninorte Health. Barranquilla (Col.) 2014; 30 (1): 73-94. Fås på: scielo.org.co
2. BBL. Malonate Bouillon, Ewing modificeret. 2007. Tilgængelig på: bd.com
3. Senna Laboratories. Malonato bouillon. Fås på: cientificasenna.com
4. RenyLab. Malonato bouillon. 2013. Tilgængelig på: es.renylab.ind.br
5. Mbiolog Diagnostics. Malonato bouillon. Fås på: mbiolog.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
7. Conda Pronadisa Laboratories. Phenylalaninmalonatbuljong. Fås på: condalab.com