SELENIT BOUILLON: FUNDERING, KLARGØRING OG ANVENDELSE - BIOLOGI - 2025

Den selenit er en selektiv flydende dyrkningsmedium. Det blev designet af Leifson til berigelse af prøver, hvor der er mistanke om tilstedeværelse af enteropatogene bakterier af slægten Salmonella.

Dette medium overholder kravene fra American Public Health Association (APHA) og accepteres derfor til undersøgelse af tilstedeværelsen af ​​Salmonella i prøver af afføring, urin, flydende eller fast føde, vand, blandt andre.

Selenit bouillon. Kilde: Foto taget af forfatteren MSc. Marielsa gil

Dens kemiske sammensætning favoriserer nyttiggørelsen af ​​disse mikroorganismer og hæmmer på sin side andres vækst. Det er primært giftigt for de fleste bakterier, der tilhører Enterobacteriaceae-familien. Det tillader dog også nyttiggørelse af Shigella-stammer og hæmmer ikke væksten af ​​Pseudomonas og Proteus.

Det er sammensat af vandfrit natriumhydrogenselenit, vandfrit natriumphosphat, peptoner og lactose. Der er også en variant, hvortil cystin tilføjes, og dets navn selenit-cystin-bouillon.

I øjeblikket foretrækkes anvendelsen af ​​selenit-cystin-bouillon, da der opnås en højere procentdel af Salmonella-genvinding, svarende til den, der observeres med andre selektive medier til det samme formål, såsom natrium-tetrathionat-bouillon.

Basis

Peptonerne indeholdt i bouillon tjener som næringsstoffer til den rette udvikling af mikroorganismer. Salmonella-stammer bruger peptoner som en kilde til nitrogen, vitaminer og aminosyrer.

Laktose er det fermenterbare kulhydrat, mens natriumselenit er det hæmmende stof, der stopper væksten af ​​Gram-positive bakterier og de fleste af de bakterier, der er til stede i tarmfloraen, især dem fra Enterobacteriaceae-familien. Natriumphosphat er den puffer, der stabiliserer mediets pH.

I tilfælde af seleniet-bouillonvariant, der indeholder L-cystin, er denne yderligere forbindelse et reduktionsmiddel, der minimerer toksiciteten af ​​selenit, hvilket øger udvindingen af ​​Salmonella.

Forberedelse

-Selenit bouillon

Hvis du har komponenterne i blandingen, kan du veje:

4 g vandfri natriumhydrogenselenit.

10 g vandfrit natriumphosphat.

5 g peptoner.

4 gram laktose.

Opløs forbindelserne i 1 liter sterilt destilleret vand. Det kan opvarmes lidt for at opløses helt.

Nogle laboratorier udsætter mediet i 10 minutter i flydende damp for at sterilisere det, da en autoklav ikke bør anvendes. Hvis mediet steriliseres, kan det opbevares i køleskabet, indtil det bruges.

Det kan også tilberedes ikke-sterilt og serveres direkte 10 til 15 ml i sterile prøverør.

I dette tilfælde skal det hvile og bruges øjeblikkeligt. Da mediet ikke er sterilt, kan det ikke opbevares i køleskab til senere brug.

- Forberedelse af det kommercielle miljø

Hvis det kommercielle medium er tilgængeligt, vejes 23 g af det dehydrerede medium og opløses i en liter sterilt destilleret vand. Varme kortvarigt for at afslutte opløsningen. Autoklaver ikke. Server aseptisk 10 eller 15 ml i sterile prøverør.

Mediets endelige pH-værdi skal være 7,0 ± 0,2.

Det skal bemærkes, at farven på det dehydrerede medium er beige, og præparatet er let og gennemskinneligt rav.

Selenit-cystin bouillonvariant

Det indeholder de samme forbindelser som selenitbuljong, men der tilsættes 10 mg cystin. Resten af ​​proceduren er nøjagtigt den samme som beskrevet ovenfor.

Applikationer

Dette medium er specielt brugt til epidemiologiske undersøgelser, i tilfælde, hvor sygdommen ikke er i sin akutte fase, asymptomatiske patienter eller sunde bærere.

Isolering af slægten Salmonella er generelt vanskelig, da de normalt kun er dårligt forurenende prøver. I små mængder overlappes det let af væksten af ​​andre bakterielle slægter, der findes i større mængde.

På den anden side udsættes råmaterialet, hvormed forarbejdede fødevarer fremstilles, ofte til varme, dehydratiseringsprocesser, brug af desinfektionsmidler, stråling og konserveringsmidler.

Derfor behandles laksellerne, der er til stede i råmaterialet, ved at udsætte produktet for de førnævnte industrielle processer. Ligeledes i tilfælde af kliniske prøver såsom fæces kan stammerne være svage, hvis de kommer fra patienter, der er blevet behandlet med antibiotika.

Derfor bør enhver prøve, hvor der er mistanke om tilstedeværelse af Salmonella, forudberiges i lactosebuljong og efterfølgende beriges i selenitbuljong for at optimere dets genvinding i selektive medier, såsom SS-agar, xylose-agar, lysin-deoxycholat (XLD)), enterisk Hektoen-agar (HE) og lysegrøn agar, blandt andre.

sået

For afføringsprøver udtages 1 g prøve og suspenderes i et rør med 10 til 15 ml selenitbuljong. Hvis afføringen er flydende, skal du tage 1 ml og hænge den i bouillon. For rektal-vattestænger skal du aflede vattematerialet i bouillon.

I faste fødevareprøver tages 1 g og suspenderes i seleniet-bouillon.

I flydende fødevarer blandes i lige store dele med selenbuljong i dobbelt koncentration.

Ved urinprøver centrifugeres, kasser supernatanten, tag al sedimentet og suspender den i selenit bouillon.

Bouillet inkuberes ved 37 ° C i 24 timers inkubation. Bakteriel vækst fremgår af uklarhed. Et ekstra rør pr. Prøve kan også inkluderes til inkubation ved 42 ° C. Derefter podning af selektive faste medier fra seleniet bouillon.

QA

For at kontrollere sterilitet inkuberes en selenit-bouillon fra hver uinokuleret batch ved 37 ° C i 24 timer. Det forventes, at der ikke er nogen uklarhed eller farveændring af mediet.

Kendte stammer kan bruges til at kontrollere, om mediet fungerer korrekt, såsom:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 og Proteus mirabilis ATCC 43071.

De forventede resultater er:

• For de første tre bakteriestammer skal væksten være tilfredsstillende.
• For Escherichia coli delvis inhibering.
• For Proteus moderat vækst.

Begrænsninger

Selenit bouillon er giftigt for menneskets hud, derfor bør direkte kontakt undgås.

Referencer

1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Sammenligning mellem kulturmedier af natriumselenit og natriumtetrathionat, begge inkuberet ved 37 ° C og 42 ° C i isolering af Salmonella spp fra afføring fra bærere. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
2. Britannia Laboratories. Selenito Bouillon. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Selenit bouillon. Fås på: foodsafety.neogen.com
4. González -Pedraza J, Pereira-Sanandres N, Soto -Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Mikrobiologisk isolering af Salmonella spp. og molekylære værktøjer til detektion. Health, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Tilgængelig fra:
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.