TRYPTICASEIN SOJABRUG: FUNDAMENTERING, KLARGØRING OG ANVENDELSE - BIOLOGI - 2025

Den sojavæske trypton er et flydende dyrkningsmedium, meget nærende, ikke-selektiv. På grund af sin store alsidighed er det et af de mest anvendte flydende kulturmedier i mikrobiologilaboratoriet.

Det er også kendt under navnet tryptisk sojabuljong eller fordøjet kasein-soja, hvis forkortelse er TSB for dets akronym på engelsk Tryptic Soy Bouillon eller CST for dets akronym på spansk. Dets anvendelser er meget forskellige på grund af dens sammensætning. Det er sammensat af triptein, sojapepton, natriumchlorid, dipotassiumphosphat og glucose.

Trypticasein sojakylling podet med en stamme af Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, hvor pigmentproduktion observeres. Kilde: Foto taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil.

Det er i stand til at reproducere klinisk vigtige patogene bakterier, herunder de, der er ernæringsmæssigt krævende og anaerobe bakterier. Nogle opportunistiske og forurenende svampe kan også udvikle sig i dette miljø.

På grund af sin høje ernæringskraft har den høje følsomhed for at detektere mikrobiel kontaminering, og derfor blev den valgt af USDA Animal and Plant Health Inspection Service til mikrobiologisk analyse af vacciner.

Ligeledes opfylder trypticasein sojakylling kravene fra de forskellige farmakopéer (europæisk EP, japansk JP og nordamerikansk USP) til mikrobiologisk undersøgelse af produkter på industrielt niveau, såsom kosmetik og mad.

På den anden side er det værd at nævne, at dette medium til trods for dets store anvendelighed er relativt billigt, hvilket gør det overkommeligt for de fleste mikrobiologiske laboratorier. Det er også meget let at tilberede.

Basis

Triptein, pepton og glukose giver den essentielle ernæringsegenskaber for at gøre det til et ideelt medium til hurtig mikrobiel vækst.

I cirka 6 til 8 timers inkubation kan der allerede ses vækst i de fleste mikroorganismer. Der er dog langsomtvoksende stammer, der kan tage dage at vokse.

Natriumchlorid og dipotassiumphosphat fungerer som henholdsvis osmotisk balance og pH-regulator. Tilstedeværelsen af ​​vækst bevises af udseendet af uklarhed i mediet; hvis der ikke er nogen vækst, forbliver mediet gennemsigtigt.

På grund af sin lette farve er det muligt at observere produktionen af ​​pigmenter, såsom den der er vist på billedet i begyndelsen af ​​artiklen, hvilket svarer til det pigment, der er produceret af Pseudomonas aeruginosa.

Forberedelse

-Triptysein sojabrug

For at fremstille tryptisk sojabuljong skal 30 g af det dehydrerede kommercielle medium vejes i digital skala. Derefter opløses det i en liter destilleret vand indeholdt i en kolbe.

Blandingen får lov til at hvile i 5 minutter, og derefter føres den til en varmekilde for at hjælpe med at opløse mediet. Det omrøres ofte, mens det koges i 1 minut.

Når den er opløst, fordeles den i rør af den passende størrelse efter behov. Rør med bomuldsstik eller med Bakelite-hætter kan bruges. Efterfølgende steriliseres rørene med mediet i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

Mediets pH skal forblive på 7,3 ± 0,2

Det skal bemærkes, at farven på det dehydrerede kulturmedium er let beige og bør opbevares mellem 10 og 35 ° C på et tørt sted. Mens den tilberedte bouillon er lys rav og skal opbevares i køleskab (2 til 8 ° C).

-Varianter af tryptisk sojabuljong

Modificeret trypticasein sojabrug kan fremstilles ved at tilsætte galdesalte og novobiocin for at gøre det selektivt til isolering af E. coli. En anden mulighed til samme formål er at fremstille trypticase sojabrug suppleret med vancomycin, cefixim og tellurit (2,5 ug / ml).

På den anden side kan der tilsættes mere glukose (0,25%) til tryptisk sojabuljong, når målet er at stimulere dannelsen af ​​biofilm.

Brug

Det er nærende nok til at tillade vækst af hurtige eller hårde bakterier, såsom Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp og Brucella sp, uden behov for at supplere med blod eller serum.

Ligeledes kan nogle svampe udvikle sig i denne bouillon, såsom Candida albicans Complex, Aspergillus sp og Histoplasma capsulatum.

Yderligere er dette medium under anaerobe betingelser ideelt til at udvinde bakterier, der tilhører slægten Clostridium, såvel som ikke-sporulerede anaerobe bakterier af klinisk betydning.

Hvis der tilsættes 6,5% natriumchlorid, kan det bruges til vækst af Enterococcus og anden gruppe D Streptococcus.

På forskningsniveau har det været meget nyttigt i forskellige protokoller, især i undersøgelsen af ​​biofilm eller biofilmdannende bakterier. Det bruges også til at fremstille den 0,5% Mac Farland-bakteriesuspension, der er nødvendig for at udføre antiogrammet ved Kirby og Bauer-metoden.

I dette tilfælde tages 3 til 5 kolonier med lignende udseende og emulgeres i 4-5 ml trypticasein sojabrug. Det inkuberes derefter i 2 til 6 timer ved 35-37 ° C og justeres derefter til den ønskede koncentration under anvendelse af sterilt saltvand. Trypticasein-sojabrugter bør ikke anvendes fra 18 til 24 timers inkubation.

sået

Prøven kan podes direkte, eller rene kolonier, der er taget fra selektive medier, kan subkultureres. Inokulatet skal være lille for ikke at overskyde mediet før inkubation.

Normalt inkuberes det ved 37 ° C i aerobiose i 24 timer, men disse betingelser kan variere afhængigt af den mikroorganisme, der søges. Det kan også inkuberes under anaerobe forhold ved 37 ° C i flere dage om nødvendigt. F.eks. Kan hurtigtvoksende eller hårde mikroorganismer inkuberes i op til 7 dage.

I den mikrobiologiske analyse af farmaceutiske stoffer - såsom vacciner - er protokollerne strengere. I disse tilfælde kasseres bouillon uden vækst, før den når 14 dages kontinuerlig inkubation.

QA

Fra hver forberedt batch skal 1 eller 2 uinokulerede rør inkuberes for at demonstrere deres sterilitet. Det skal forblive uændret.

Kendte stammer kan også plantes for at vurdere deres opførsel. Blandt de stammer, der kan bruges, er:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 eller 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, ATreCeCeCeCeCeCeCeC8eC, ATCCC5C, P830C, ATCC, P830

I alle tilfælde skal væksten være tilfredsstillende under de passende atmosfære- og temperaturbetingelser for hver mikroorganisme.

Begrænsninger

-Fermenteringen af ​​glukose medfører et fald i mediets pH på grund af produktionen af ​​syrer. Dette kan være ugunstigt for overlevelsen af ​​nogle mikroorganismer, der er følsomme over for syreindhold.

-Det anbefales ikke til vedligeholdelse af stammer, fordi bakterier ud over syreindholdet udtømmer næringsstoffer efter et par dage med den deraf følgende ophobning af giftige stoffer, der gør miljøet ugjestmildt.

-Du skal arbejde med at passe på alle sterilitetsprotokoller, da bouillonerne let er forurenet.

-Efter tilberedning af trypticasein sojabrugter, bør du ikke prøve at overføre bouillon til et andet sterilt rør, fordi denne type manøvre er meget sårbar over for forurening.

Referencer

1. Cona E. Betingelser for en god følsomhedsundersøgelse ved agardiffusionstest. Rev. chil. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Fås på: scielo.org
2. Britannia Laboratory. Triptein sojabrug. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
3. MCD-laboratorium. Trypticasein Soy Bouillon. Fås på: electronic-systems.com
4. Neogen Laboratory. Triptyk Soy Bouillon. Fås på: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Evaluering af den magnetiske immunoseparationsteknik til nyttiggørelse af Escherichia coli O157: H7 i mælkecremer. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Fås på: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilm dannelse i Staphylococcus aureus isolater i henhold til antimikrobiel følsomhed og klinisk oprindelse. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Fås på: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Isolering af Escherichia coli O157: H7 i dobbelt formål Bovine fæces Prøver fra Miranda Kommune, Zulia Stat, Venezuela. Præsten Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Fås på: scielo.org