TETRATHIONAT BOUILLON: BEGRUNDELSE, KLARGØRING OG ANVENDELSE - BIOLOGI - 2025

Den tetrathionat bouillon eller bouillon TT er et selektivt flydende dyrkningsmedium til berigelse og genvinding af slægten Salmonella-stammer. Det blev oprettet af Müeller og senere modificeret af Kauffmann, hvorfor der er dem, der kalder det Müeller-Kauffmann bouillon.

Det originale medium indeholdt proteosepeptoner, calciumcarbonat og natriumthiosulfat. Kauffmann tilføjede galdesalte til det og skabte en anden modalitet med lysegrønt. Disse stoffer hæmmer væksten af ​​coliforms, hvilket efterlader mediet fri for udvikling af patogene bakterier, i dette tilfælde Salmonella.

Tilsætning af iod-iodopløsning til tetrathionat-bouillon. Kilde: Manuel Almagro Rivas

Modifikationen var meget vellykket, fordi den markant øgede mediets følsomhed. Af denne grund er det i øjeblikket nyttigt til søgning efter laksellas i enhver type prøve, men især til fast eller flydende afføring og mad.

Dets forberedelse består af to faser; Det kommercielle medium er en base til fremstilling af tetrathionat-bouillon, og efterfølgende, så tetrathionatet kan dannes, tilsættes en joderet iodopløsning for at afslutte mediet.

American Public Health Association (APHA) anbefaler brug af Tetrathionate Bouillon suppleret med lysegrønt til berigelse af prøver til Salmonella, da det er mere selektivt end Tetrathionate Bouillon og Selenite Bouillon.

Generelt er tetrathionat-bouillon ideel, når der er mistanke om tilstedeværelse af bakterier i slægten Salmonella i små mængder, eller når de misbruges af eksponering for hæmmende stoffer eller ved industrielle processer, der minimerer deres levedygtighed.

Basis

De tilstedeværende peptoner svarer til pancreasfordøjelse af kasein og peptisk fordøjelse af dyrevæv. Disse giver kilden til kulstof, nitrogen og generelle næringsstoffer til bakterievækst.

På sin side reagerer natriumthiosulfat med den joderede opløsning til dannelse af tetrathionat. Dette hæmmer væksten af ​​coliformer og favoriserer udviklingen af ​​bakterier, der indeholder enzymet tetrathionatreduktase, blandt dem er slægten Salmonella, men også Proteus.

Galgesalte fungerer også som et hæmmende stof for de fleste Gram-positive og nogle Gram-negative bakterier (coliforms).

Calciumcarbonat absorberer de giftige stoffer, der genereres ved nedbrydning af tetrathionat, der danner svovlsyre. I denne forstand neutraliserer calciumcarbonat surhedsgraden og holder pH i mediet stabilt.

I tilfælde af den lysegrønne modalitet øger dette stof den selektive kraft af tetrathionatbuljong ved at hæmme andre mikroorganismer end Salmonella-slægten.

Forberedelse

-Tetrationeret bouillon

Jod-opløsning

At veje:

• 6 gram jod.
• 5 g kaliumiodid.

Kaliumiodid opløses i ca. 5 ml sterilt destilleret vand, derefter tilsættes jod lidt efter lidt, mens blandingen opvarmes. Efter at det er helt opløst, fyldes det op til mærket med sterilt destilleret vand, indtil det nåede et slutvolumen på 20 ml.

Basismedium til tetrathionat bouillon

Vej 46 gram af det dehydrerede medium, og suspenderes i 1 liter sterilt destilleret vand. Bland og opvarm, indtil det er helt opløst, det kan kun koges i et par minutter. Autoklaver ikke. Basen af ​​mediet lodes afkøle til ca. 45 ° C, og på det tidspunkt tilsættes 20 ml af den iodinerede opløsning.

Efter tilsætning af den joderede opløsning til mediet skal den bruges øjeblikkeligt. Hvis du ikke vil bruge hele blandingen, skal du gøre som følger:

10 ml af basemediet fordeles i rør, og kun til dem, der skal inokuleres med prøver, tilsættes 0,2 ml af den joderede opløsning.

Dem, der ikke skal bruges, kan stadig opbevares i køleskabet, men da mediet ikke er steriliseret, er det ideelle at forberede den nøjagtige mængde, der er nødvendig.

Mediets farve, inden den joderede iodopløsning tilsættes, er mælkehvid med et hvidt bundfald, og efter tilsætning er det brunt med et tæt bundfald. Det observerede bundfald er normalt og svarer til calciumcarbonat, der ikke opløses. Mediets endelige pH er 8,4 ± 0,2.

-Tetrationeret bouillonvariant med lysegrøn

For at fremstille den lysegrønne tetrathionat-bouillon udføres alle de ovenfor beskrevne trin, men derudover tilsættes 10 ml af den lysegrønne opløsning, der er fremstillet med 0,1%, til blandingen.

Skinnende grønt

Denne opløsning fremstilles som følger:

Afvej 0,1 g lysegrønt, og suspender i 100 ml destilleret vand. Opvarm til kogning for at opnå total opløsning. Opbevares i rav flaske.

Brug

For afføringsprøver (afføringskultur) er protokollen som følger:

Inokuler 1 g fast afføring eller 1 ml flydende afføring i et rør med 10 ml klar-til-brug tetrathionat-bouillon. Ryst kraftigt og inkuber aerobt ved 43 ° C i 6-24 timer.

Efterfølgende tages en portion på 10 til 20 pl af buljongen og subkulturen i et selektivt medium til Salmonella, såsom SS-agar, XLD-agar, lysegrøn agar, Hektoen enterisk agar, blandt andre.

Parallelt skal selektive medier til Salmonella inokuleres med den direkte prøve (fæces) uden berigelse. For prøver fra rektalpinden udledes det indsamlede materiale i røret og fortsæt som beskrevet ovenfor.

Vej 10 g fast mad eller 10 ml flydende mad til fødevareprøver og inokuler en flaske med 100 ml klar-til-brug tetrathionat-bouillon. Fortsæt på samme måde som beskrevet ovenfor, men inkuber ved 37 ° C.

Som det kan ses, vil forholdet mellem prøven og bouillon altid være 1:10.

QA

Kendte kontrolstammer kan bruges til at teste kulturmediet. De mest udbredte er ATCC-certificerede stammer.

De stammer, der skal anvendes, er Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Der forventes en fremragende vækst for Salmonella-stammer, mens Escherichia coli kan have svag eller regelmæssig vækst, og Gram-positive stammer (Enterococcus og Staphylococcus) hæmmes delvist eller fuldstændigt.

anbefalinger

- Da dette medium ikke hæmmer væksten af ​​Proteus, bruger nogle laboratorier 40 mg / l novobiocin for at forhindre udviklingen af ​​denne mikrobielle stamme. Antibiotikumet skal tilsættes før jodopløsningen.

-Efter tilberedning af mediet inklusive iod-iodopløsningen, bør det ikke tage mere end 2 timer at blive inokuleret.

-Når man fordeler mediet i rørene, skal blandingen kontinuerligt homogeniseres for at resuspendere det dannede bundfald.

-I mindre kontaminerede prøver inkuberes tetrathionat-bouillon ved 35-37 ° C, og i stærkt kontaminerede prøver anbefales inkubering ved 43 ° C.

Referencer

1. Conda Pronadisa Laboratory. 2010. Tetrathionate bouillon ifølge Müeller-Kauffmann. Tilgængelig i:
2. BD Laboratories. 2003. Tetrathionate Bouillon. Tilgængelig i:
3. Britannia Laboratories. 2015. Tetranat-basisbuljong. Tilgængelig i:
4. BBL Media. 2005. Forberedt i rør til kulturen af ​​Salmonella-arten.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Sammenligning mellem kulturmedier af natriumselenit og natriumtetrathionat, begge inkuberet ved 37 ° C og 42 ° C i isolering af Salmonella spp fra afføring fra bærere. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220