THIOGLYCOLLAT-BOUILLON: BEGRUNDELSE, KLARGØRING OG ANVENDELSER - BIOLOGI - 2025

Den thioglycollat bouillon er et medium beriget flydende konsistens. Det er kendt af forkortelsen FTM for dets akronym på engelsk Fluid Thioglycollate Medium. Det blev oprettet af Brewer og modificeret i 1944 af Vera, der tilføjede kaseinpepton til det.

Dette medium har et lavt oxidationsreduktionspotentiale, derfor anbefales det ikke til udvikling af strenge aerobe bakterier, men det er ideelt til at genvinde fakultative aerobe, strenge anaerobe og krævende mikroaerofile bakterier.

Thioglycollate bouillon uden indikator. Viser vaginal afladning. Kilde: Bobjgalindo

Den høje ydeevne, der er observeret med dette medium i isolering og nyttiggørelse af en lang række mikroorganismer, har gjort det accepteret af De Forenede Stater Pharmacopeia (USP), af den officielle sammenslutning af landbrugskemikere (AOAC) og af den europæiske farmakopé (EP).

Disse organisationer anbefaler det til sterilitetskontroltestning af farmaceutiske produkter og til berigelse af forskellige typer prøver.

Cado-thioglycolatet er sammensat af gærekstrakt, pancreasfordøjelse af casein, vandfri dextrose, L-cystin, natriumchlorid, natriumthioglycollat, resazurin og agar i lille mængde.

Der er flere versioner af dette medium, blandt dem er: thioglycollat ​​bouillon med indikator, thioglycollate bouillon uden indikator, thioglycollate bouillon med indikator beriget med hemin og vitamin K ₁ og thioglycollate bouillon med calciumcarbonat.

Det bemærkes, at thioglycollat-bouillonvarianten beriget med hemin og vitamin K tjener til at forøge væksten af ​​hurtige anaerober, og thioglycollat-bouillonvarianten indeholdende calciumcarbonat er nyttig til at modvirke de syrer, der er produceret under mikrobiel vækst.

Basis

Thioglycollat-bouillon betragtes som et ikke-selektivt berigelsesmedium, da det muliggør vækst af de fleste ikke-krævende bakterier. Ernæringskravene leveres af gærekstrakt, bugspytkirtelfordøjelse og glukose.

På den anden side indeholder dette medium, på trods af at det er en bouillon, en lille mængde agar; Dette betyder, at det har et lavt oxidationsreduktionspotentiale på grund af det faktum, at det bremser indtræden af ​​ilt på en sådan måde, at ilt falder, når det går dybere ned i røret.

Derfor er dette medium ideelt til udvikling af fakultative aerobe, mikroaerofile og strenge anaerobe bakterier, sidstnævnte 2 uden behov for at inkuberes under disse forhold. Det samme medium regulerer mængden af ​​ilt inden i mediet, idet den er fraværende i bunden af ​​røret og i tilstrækkelig mængde på overfladen.

Ligeledes fungerer thioglycollate og L-cystin som reduktionsmidler og hjælper med at forhindre ophobning af stoffer, der er skadelige for bakterieudvikling, såsom peroxid. Derudover indeholder disse forbindelser sulfhydrylgrupper (-SH-), der neutraliserer de inhiberende virkninger af kviksølvderivater, arsenikaler, blandt andre tungmetaller.

Resazurin er på sin side en indikator for oxidreduktion. Dette stof er farveløst, når det reduceres og lyserødt, når det oxideres. Der er indikator- og ikke-indikator-thioglycollat-bouillonvarianter. Dets anvendelse afhænger af typen af ​​prøven og laboratoriets præference.

I mellemtiden opretholder natriumchlorid den osmotiske balance i thioglycollat-buljongen, og anvendelsen af ​​glukose i vandfri form forhindrer overskydende fugt i det dehydrerede medium.

Forberedelse

Thioglycollate bouillon med indikator

Vej 29,75 g af det dehydrerede medium og opløst i 1 liter destilleret vand. Blandingen får lov til at henstå i ca. 5 minutter. Bragt til en varmekilde, og omrør ofte, indtil den er helt opløst.

Hæld mediet i reagensglas og autoklaver ved 121 ° C i 15 minutter. Lad afkøle inden brug. Kontroller indlægget i kommercielle hus for dets bevarelse. Nogle anbefaler at opbevares ved stuetemperatur på et mørkt sted, og andre i et køleskab beskyttet mod lys.

PH af det fremstillede medium er 7,1 ± 0,2.

Farven på det dehydratiserede medium er lys beige, og det forberedte medium er let rav med en vis opalescens.

Thioglycollat ​​bouillon med indikator beriget med hemin og K-vitamin

Der er kommercielle medier, der allerede indeholder hemin og vitamin K ₁, især til dyrkning af anaerober.

Hvis du ikke har det berigede medium til anaerober, kan du tilberede den basale thioglycollate-bouillon. Til dette _tilsættes 10 mg heminhydrochlorid og 1 mg vitamin K1 for hver liter medium. Hvis der imidlertid sættes blod eller serum til thioglycollat-bouillonen, er tilsætning af hemin eller K-vitamin ikke nødvendig.

Thioglycollat-bouillon med calciumcarbonat

Det kommer kommercielt og er klar til at følge instruktionerne på indsatsen.

Thioglycollate bouillon uden indikator

Dette har den samme sammensætning af det basiske thioglycollat, men indeholder ikke resazurin.

Vej 30 g af det dehydrerede medium, og opløs det i en liter destilleret vand. Resten af ​​præparatet er det samme som beskrevet i thioglycollat-bouillon med indikator.

Brug

Thioglycollat-bouillon er nyttig til berigelse af kliniske prøver, især de fra sterile steder. Det er også nyttigt til ikke-kliniske prøver, såsom kosmetik, medicin osv.

Til inokulering af flydende prøver (såsom CSF, synovialvæske blandt andre) centrifugeres prøverne først, og derefter tages 2 dråber af sedimentet og anbringes i thioglycollat-buljongen. Inkuber ved 35 ° C i 24 timer. Hvis der på dette tidspunkt ikke er nogen vækst (uklarhed), inkuberes den op til højst 7 dage.

Hvis prøven udtages med en vatpinde, inokuleres dyrkningsmediet først i plader, og til sidst indføres vatpinden i buljongen, den fremspringende del deles, og røret lukkes, hvilket efterlader vatpinden inden i. Inkuber ved 35 ° C i 24 timer, maksimalt 7 dage.

For faste prøver homogeniseres i fysiologisk saltopløsning (SSF) og inokuleres derefter thioglycollat-bouillon med 2 dråber af suspensionen.

Det kan undertiden bruges som et transportmedium til prøver, hvor der er mistanke om strenge anaerober eller som en berigelsesanrikningsbuljong.

Thioglycollat-bouillonvarianten med calciumcarbonat anvendes til opretholdelse af kontrolstammer i længere tid, fordi den har evnen til at neutralisere de syrer, der er produceret ved anvendelse af glukose; Disse syrer er giftige for visse bakterier.

Vækst i thioglycollat-bouillon vil blive observeret af mediets uklarhed. Det anbefales at udføre en Gram-farvning og derefter subkultur i ikke-selektive og selektive medier, afhængigt af prøvetypen og de mistænkte mikroorganismer.

QA

Til sterilitetskontrol anbefales det at inkubere en eller to bouillon uden inokulation. Det forventede resultat er en klar bouillon uden farveændring, skønt det er normalt at se en let lyserød farve på rørets overflade.

For kvalitetskontrol skal mellem 10 - 100 CFU af certificerede kontrolstammer inokuleres, såsom Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCCes 19404 Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Inkuber ved 30-35 ° C i aerobiose i 24 timer op til maksimalt 3 dage, da disse mikroorganismer vokser hurtigt.

I alle tilfælde forventes god udvikling bortset fra Micrococcus luteus og Bacillus subtilis, hvor der kan være moderat udvikling.

Til kvalitetskontrol af thioglycollat-bouillon beriget med hemin og vitamin K ₁ kan kontrolstammerne Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 og Bacteroides fragilis ATCC 25285 anvendes. Det forventede resultat er tilfredsstillende vækst.

anbefalinger

- Tilfældigt kan det observeres, at overfladen på indikatoren thioglycollat-bouillon bliver lyserød; Dette skyldes oxidation af mediet. Hvis den lyserøde farve dækker 30% eller mere af den samlede bouillon, kan den opvarmes i vandbad i 5 minutter, afkøles igen og bruges.

Dette fjerner det absorberede ilt og returnerer mediet til dets oprindelige farve. Denne procedure kan kun udføres én gang.

-Forbedre væksten af ​​aerobe bakterier, inkuber med låget let løs. Det foretrækkes imidlertid at anvende til dette formål en hjerneinfusionsvæske eller trypticase sojabrug til den rette udvikling af strenge aerober.

-Frysningen af ​​mediet eller overophedning bør undgås, da begge forhold beskadiger mediet.

-Direkte lys beskadiger kulturmediet, det skal opbevares beskyttet mod lys.

Referencer

1. Britannia Laboratories. Thioglycollate USP med indikator. 2015. Tilgængelig på: labBritania.com.
2. Chios Sas Laboratories. 2019. Thioglycollate bouillon. Fås på: quios.com.co
3. Laboratorier BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003. Tilgængelig på: bd.com/Europe
4. BBL-medier fremstillet i rør til dyrkning af anaerobe mikroorganismer. Thioglycollate medier. 2013. Tilgængelig på: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.