BLODUDSTRYGNING: KARAKTERISTIKA, TYPER, TEKNIKKER OG HISTOLOGI - BIOLOGI - 2025

Den blodudstrygning er en perifert blod smear, der bruges til at analysere de tilstedeværende bestanddele i blodcirkulationen. Observationen af ​​en blodudstrygning tilvejebringer hæmatologiske data, der er meget nyttige til diagnose og opfølgning af mange patologier.

Blodudstrygningen gør det muligt at kvantificere antallet af forskellige typer hvide blodlegemer (leukocytformel) samt analysere morfologien og formen af ​​erythrocytter, leukocytter og blodplader.

Forberedelse af blodudstrygningen. Kilde: Blod i et laboratorieglas. Public DomainPictures.net

I det kan abnormiteter i antallet af celler påvises, såsom: leukocytose eller leukopenier, lymfocytose eller lymfopeni, neutrofili eller neutropeni, thrombocytose eller thrombocytopenias og eosinophilia. Cellestørrelse og form abnormiteter kan også ses.

Derudover er det muligt at detektere forskellige typer anæmi, leukæmi og bakterie- eller blodparasitinfektioner.

Til dette er der forskellige typer udstrygninger, der udføres afhængigt af formålet med undersøgelsen. Der er tynd udstrygning og tyk udstrygning. Disse udstrygninger er forskellige i udførelsesteknikken og formålet med undersøgelsen.

De med fine dråber bruges som et supplement til komplet hæmatologi. Dette giver data om leukocytformlen ud over analysen af ​​formen og morfologien af ​​de tre celleserier, der udgør blodet: rød serie, hvide serier og blodplader. Selvom de også tjener som et supplement til studiet af tykt blodfilm.

Den tykke film bruges til diagnose af sygdomme forårsaget af hæmoparasitter, såsom malaria eller malaria, toxoplasmosis, leishmaniasis, Chagas sygdom, babesiose og mikrofilariase.

Karakteristika ved en blodudstrygning

En god blodudstrygning skal opfylde visse egenskaber. Blandt dem kan vi nævne:

-Prøven skal opfylde minimumskvalitetskravene for at være repræsentativ.

-Prøverne skal udføres godt.

-Timely udførelse af udstrygningen.

-Hvis det udføres med venøst ​​blod, skal du bruge et antikoagulant, som ikke deformerer cellerne og bland røret, inden du udstryger.

-Hvis det gøres med kapillærblod, kasseres den første dråbe.

-Spredningen skal være homogen. Dette sikrer, at cellerne er jævnt fordelt, og at blodcellerne kan analyseres med hensyn til form og antal.

-Siderne af udstrygningen skal være glatte fra begyndelse til slutning.

-Smejsen skal respektere en margen på 1 til 2 mm til siderne af objektglasset.

-Smearlaget skal gradvist falde i tykkelse fra begyndelsen til slutningen (smøre med et fint fald ved hjælp af glidemetoden).

-Det skal være korrekt mærket for at undgå forveksling af prøver.

-Fix og pletter ordentligt for klar observation af blodelementer.

-Lad udstrygningen tørre meget godt, inden præparatet monteres under mikroskopet. At placere nedsænkningsolie på en våd udtværning vil medføre dannelse af miceller, der forhindrer cellerne i at blive set.

Typer af blodudstrygning

Perifert blodudstryk kan klassificeres som tyndt udstryg og tykt udstryg. De med et tyndt lag anvendes til undersøgelse af leukocytformlen og morfologisk observation af blodlegemer. Ekstracellulære bakterier, såsom borrelia og intracellulære hæmoparasitter, såsom plasmodium, kan også ses.

I den fine klat kan parasittenes arter identificeres, det er derfor en mere specifik teknik end den tykke klat, men den tykke klat er mere følsom, da det er en koncentrationsteknik, der bruges til udtømmende søgning efter ekstracellulære hæmoparasitter.

Der er to typer fine-drop-udstrygninger: dem, der udføres på dias, og dem, der udføres på dækglas. De tykke udstrygninger udføres på slides.

Teknikker til udtagning af blodprøver

Blodudstrygning kan fremstilles ud fra en kapillær punktering eller en venøs prøve taget med antikoagulant. Hvis det udføres fra blod med antikoagulant, kan udstrygningen tilberedes op til 2 timer efter at prøven er taget.

Der skal udvises forsigtighed ved brug af antikoagulantia, som ikke deformerer blodlegemer. Den bedste mulighed er EDTA. Tværtimod bør anvendelse af antikoagulantia, såsom trinatriumcitrat, undgås.

Hvis prøven udtages ved kapillær punktering, skal udstrygningen straks forlænges, før blodet koagulerer.

Den første dråbe skal kasseres, så den næste dråbe kan flygte spontant for at undgå fortynding af prøven med vævsvæske. Det er den mest anbefalede teknik til observation af cellemorfologi, da blod ikke har nogen tilsætningsstoffer.

Med henblik på observation af hæmoparasitter konkluderede Solari et al. I deres forskningsarbejde, at begge teknikker (venipunktur og kapillær) er lige så effektive.

Typer af blodprøvetagning: A. Kapillær punktering. B. Venøs punktering. Kilde: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Teknikker til forberedelse af blodudstrygningen

Blodudstrygningen kan udføres manuelt på mikroskopglas, eller på et dækglas eller objektglas. Det er også muligt gennem automatiseret udstyr.

-Slides glider

Det er den teknik, som de fleste laboratorier foretrækker på grund af dens lette håndtering.

Brug en Pasteur-pipette til at placere en ikke særlig tyk eller meget fin dråbe blod i midten af ​​den ene ende af et rent mikroskopglas.

Udstrygningen laves ved hjælp af et andet objektglas med en jordende. Det nederste glasglas placeres vinkelret på den modsatte ende af, hvor dråben er placeret.

Det vippes i en vinkel mellem 30 - 45 ° og glider mod dråben; Når den berøres, ekspanderer den lineært over kanten af ​​jordskredet og med en konstant og defineret bevægelse vender arket tilbage; inden objektivet når slutningen, løftes objektglasset.

På denne måde spredes et homogent lag over overfladen af ​​det modtagende objektglas.

Udstrygningen får lov til at tørre. Derefter fikseres og farves den med den foretrukne farve. Lad tørre godt, før du ser det under mikroskopet. En dråbe olie anbringes på ansigtet, der viser udstrygningen og observeres under et lysmikroskop.

Blodudstrygning på dias. Øverste billede: ustænket udtværning. Nederste billede: farvet udstrygning. Kilde: Coinmac

Dele af udstrygningen lavet på dias

I denne type udtværing kan der skelnes mellem tre definerede områder: hovedet, kroppen og halen. Hovedet svarer til det område, hvor udstrygningen starter, det er det tykeste område, og det er ikke godt at observere.

Legemet er den centrale eller mellemliggende del af udstrygningen, det er det bedste område at observere under mikroskopet, da cellerne er jævnt fordelt og deres morfologi bevares.

Halen svarer til den sidste del af udstrygningen; her er distributionen ikke længere ensartet, og erytrocytmorfologi har tendens til at gå tabt.

Kvalitetskontrol i diaseteknik

I denne teknik spiller det en grundlæggende rolle:

-Rengøring og affedtning af objektglasset: det garanterer, at prøven glider godt.

-Størrelsen på dråben: med meget store dråber opnås en tykkere og længere udtværing, med en meget lille dråbe vil spredningen være kortere og ekstremt fin.

-Hastigheden, der anvendes i forlængelsen: jo lavere hastigheden smøret vil være tyndere, jo højere er hastigheden den er tykkere.

-Virkningen af ​​udførelsen: jo mindre vinkel, jo finere udstrygning, jo større vinkel er tykkere.

-Spænd på dækglas

Det bruges ikke i vid udstrækning, fordi håndteringen af ​​skrøbelige dækglas er besværlige, men det giver store fordele, da der opnås en bedre distribution af celler gennem udstrygningen.

En ikke særlig tyk, ikke særlig fin dråbe placeres i midten af ​​et dækglas. Umiddelbart anbringes et andet dækglas oven på dette på en sådan måde, at spidserne på begge dækglas glider ud og danner en stjerne.

Dråben spredes spontant over overfladen på begge dækglas. I slutningen af ​​udvidelsen glider hvert lysbillede hurtigt til den modsatte side af hinanden (den ene til højre og den anden til venstre) hurtigt.

Teknikken giver to udstødninger i stedet for en.

De anbringes til tørring med den spredte side opad. Når den er tør, fastgøres den og farves med den valgte teknik. Lad det tørre. En dråbe nedsænkningsolie anbringes på et objektglas, udstrygningen placeres med udstrygningssiden ned og ses under et mikroskop.

Kvalitetskontrol i dækglasteknikken

For at få en god udtværing til denne teknik er det vigtigt at:

-Rengør dækglassene (hjælper prøven med at glide glat).

-Størrelsen på dråben (påvirker udstrygningens tykkelse).

-Hastigheden, hvormed dækglasene adskilles (påvirker spredningens homogenitet).

-Med automatiseret udstyr

De kan gøres gennem et hvilket som helst af disse hold: Spinner og Autoslide.

Spinner består af at placere et dias med en dråbe blod på en speciel centrifugeplade. Prøven centrifugeres ved høje hastigheder; på denne måde dannes en homogen og fin udstrygning af prøven. Det har ulempen med muligheden for hæmolyse af prøven.

Autoslide er et instrument, der mekanisk udfører bevægelserne til udførelse af udstrygningen på slides. Du kan også fikse og plette udstrygningen. Det kan endda tilpasses til nogle automatiske hæmatologitællere.

Tyk udtværingsteknik

For at søge efter hæmoparasitter anbefales to udstryk: en med et fint dråbe og et med en tyk dråbe.

Udfør en kapillær punktering, rengør den første dråbe. Læg et fint dråbe på et dias og smør som tidligere forklaret. Til den tykke perle skal du placere en stor perle på et andet objektglas og sprede det i en firkant på 1,55 mm. Lad de to udstrygninger tørre.

Smørfarvning

Giemsa eller Wright-pletter kan blandt andet bruges til fine dråber. Giemsa eller May-Grunwald Giemsa-plet anbefales til tyk udstrygning.

Giemsa-plet

Udstrygningen fikseres i 3 minutter med methanol, drænes og får lov til at tørre igen. Udstrygningen dækkes derefter med Giemsa-plet i 10-15 minutter. Det vaskes med destilleret vand og får lov til at tørre. For at observere under mikroskopet placeres en dråbe nedsænkningsolie.

Wrights plet

Udstrygningen er dækket med Wrights plet i 5 minutter. Bortskaf og anbring bufferopløsningen ved pH 6,8 i 6 minutter. Blæs præparatet for at homogenisere. Vask med destilleret vand og lad det tørre. Overhold under mikroskopet.

Typer af defekte udstødninger

Det forekommer hos praktikanter i fine drop-teknikken med lysbilleder.

Udstrygning med områder med forskellig tykkelse (tynd og tyk ispedd)

Det skyldes, at den udførte bevægelse ikke var konstant under spredningen, hvilket gjorde stop og genstarter.

Meget kort udtværingsudtværing

De har to årsager: den ene skyldes, at jordskredet er løftet, før det når den anden ende af objektglasset. I dette tilfælde er den ekstremt tyk og kort.

På den anden side, hvis udstrygningen er kort, men tynd, skyldes det, at størrelsen på dråben var meget lille.

Udstryg med et raket område mod slutningen af ​​udstrygningen

Det har flere årsager: Den ene er, at jordkanten er defekt, at trykket, der udøves på den modtagende glide, øges på spredningstidspunktet, eller at jordkanten på slæden bæres.

Udtvær med vakuoldannelse eller klare afrundede eller elliptiske områder

De skyldes brugen af ​​fedtet udstrygning (dårligt vasket og affedtet).

Meget tyk eller meget tynd udstrygning

Dråber, der er for store, producerer meget tykke udstrygninger fra start til slut, og meget små dråber giver meget fine udstrygninger.

Histologi

Blodceller kan ses i en blodudstrygning. Blandt dem er:

-Erythrocytter eller røde blodlegemer

Humant blod, erytrocytter eller røde blodlegemer og to hvide blodlegemer. Taget og redigeret fra: Viascos. Din observation er yderst vigtig. På dette niveau kan anemier, thalassæmi, knoglemarvsygdom osv. Påvises.

Antallet af erytrocytter eller røde blodlegemer er ca. 5 x ¹⁰⁶ mm3 hos mænd og 4,5 x ¹⁰⁶ hos kvinder. Røde blodlegemer er formet som biconcave diske med en central fysiologisk blekhed. De kan ses separat (normal) eller danne rouleaux-stabler (unormale).

Udstryk viser også poikilocytose (røde blodlegemer i forskellige former), anisocytose (røde blodlegemer i forskellige størrelser), anisopoikilocytose (forskellige former og størrelser), anisochromia (forskellige farver), erythroblaster (umodne røde blodlegemer), mikrocytose (mindre røde blodlegemer)) og makrocytter (større erytrocytter).

Når de udviser mangel på mængden af ​​hæmoglobin og den centrale blekhed øges, siges det, at der er hypokromi. Når en normal rød serie observeres, rapporteres den som normocytisk og normokrom.

-Hvite blodlegemer eller leukocytter

hvide blodceller

Den normale mængde spænder fra 5.000 til 10.000 mm ³. De ændres i infektiøse processer, i allergier og i leukæmi. Flere typer kan skelnes i blodudstrygningen, som er forklaret nedenfor.

Segmenterede neutrofiler

De udgør 55-65% af de samlede leukocytter. De måler mellem 10-15 μm. De har en segmenteret eller lobet kerne, der vedtager forskellige morfologier, derfor kaldes den polymorphonuclear.

De har rigelige neutrofile granuler i deres cytoplasma og nogle azurofiler. De øges i bakterieinfektioner (neutrophilia), nedsætter virusinfektioner (neutropeni).

Morfologiske abnormiteter såsom pleokaryocytose (hyper-segmenterede kerner), buede (umodne celler) eller makro-poliser (ovalformet og stor) kan observeres.

Andre ændringer:

-Toksiske granuleringer

-Pseudo Pelger-neutrofiler (kernen præsenterer ikke lobuleringer, eller de er bilobede).

-Döhle-kroppe: mørkeblå cytoplasmatiske indeslutninger.

-Orget cytoplasmatisk basofili.

-Intracytoplasmatiske vakuoler.

-Cellulær picnose (tab af internukleære broer).

Segmenterede eosinofiler

De udgør 1-3% af de samlede hvide blodlegemer. De måler 9-10 μm. De er kendetegnet ved tilstedeværelsen af ​​rigelige acidofile cytoplasmatiske granuler og få azurofiler. Dens kerne har to lobuleringer. Deres antal stiger i allergier og sygdomme af parasitisk oprindelse.

Segmenterede basofiler

De er ekstremt sjældne og repræsenterer 0-1% af leukocytter. De måler 10-12μm. Kernen er normalt uregelmæssig i marginer og kan være bilobet, men den observeres ikke på grund af det store antal basofile grove granuleringer i dens cytoplasma. Meget sjældent kan basofili ses.

Lymfocytter

De er små celler med basofil cytoplasma med en kerne, veldefineret, rund, med kondenseret kromatin. Kernen omfatter næsten hele cellen. De repræsenterer 26-40% af blodleukocytter. De øges i virusinfektioner (lymfocytose). Reaktive lymfocytter kan ses.

monocytter

Celler, der er større end lymfocytter, med større cytoplasma og løsere, ovale kromatinkerner. De måler 9-12μm. Cytoplasmaet er rigeligt og forekommer normalt lysegrålig blå med standardfarvningsteknikker. Vacuolerede monocytter og monocytose kan observeres blandt ændringerne.

-Platelets

De måler mellem 1,5-3 um. Dens form er rund eller oval. Den normale værdi varierer fra 150.000 til 350.000 blodplader / mm3. De kan mindske i nogle virusinfektioner. De har ikke en kerne og er farvet lilla. Abnormaliteter kan ses i denne serie, såsom makro- eller mikroplader, trombocytose eller thrombocytopeni og blodpladefragmenter.

Patologiske elementer

Blodparasitter

Hæmoparasitter, såsom det forårsagende middel til malaria eller malaria (parasitter af slægten Plasmodium), kan ses i blodudstrygning. Af denne grund er det vigtigt, at udstødningen analyseres manuelt, da automatiseret udstyr går glip af dette fund.

Bakterie

I patologier, såsom tilbagefaldende feber eller Lyme-sygdom, kan dets forårsagende middel observeres. I dette tilfælde svarer det til Borrelia recurrenti spirochetes og Borrelia burgdorferi i blodudstrygningen.

Umodne celler

Alvorlige tilfælde observeres blandt andet i leukæmier, leukæmoidreaktioner og leukoerythroblastisk reaktion. I bakterieinfektioner kan der være små afvigelser til venstre (tilstedeværelse af skurke). Erythroblaster kan også ses i nogle anemier.

Referencer

1. Blod og hæmatopoietisk væv. Fås på: sld.cu
2. Gomez A, Casas M. 2014. Angel. Klinisk laboratorietolkning. 8. udgave. Redaktionel Médica Panamericana.
3. Solari Soto L, Soto Tarazona A, Mendoza Requena D, Llanos Konti A. Sammenligning af parasitære tætheder i tyk venøs bloddråbe versus akupressur i diagnosen Malaria vivax. Rev Med Hered 2002; 13 (4): 140-143. Fås på: scielo.org.
4. Terry Leonard Nelson, Mendoza Hernández Carlos. Betydningen af ​​undersøgelsen af ​​perifert blodudstrygning hos ældre. Medisur 2017; 15 (3): 362-382. Fås på: scielo.sld
5. Grinspan S. Undersøgelsen af ​​den perifere blodudstrygning. Fortsat medicinsk uddannelse. Fås på: bvs.hn/RMH