Rose Bengal er en laboratorietest baseret på en antigen-antistofreaktion til diagnose af brucellose. Teknikken tillader påvisning af specifikke antistoffer mod Brucella abortusbakterien i humane serumprøver. Resultatet kan rapporteres kvalitativt eller semikvantitativt.
Den kvalitative form udtrykker, om patienten er positiv eller negativ til testen, det vil sige, om der er antistoffer eller ej. I mellemtiden rapporteres den semikvantitative rapport i IU / ml og angiver den omtrentlige mængde tilstedeværende antistoffer. Det skal bemærkes, at antistoffer kun produceres, hvis patienten har været i kontakt med mikroorganismen.
Rose Bengal-reaktion i en agglutineringsplade. Kilde: hentet fra videoen
På grund af sin store enkelhed, høje følsomhed og specificitet er det en af de seroagglutinationsteknikker, der er mest anvendt i medicinen som en første test til diagnose af denne sygdom.
Nogle forskere har sammenlignet effektiviteten af Rose Bengal-testen med andre teknikker, såsom seroagglutination (feberantigener) og har observeret, at selv om der er god sammenhæng, så de isolerede tilfælde, hvor den febile antigen-test var negativ og Rosa de Positiv bluss.
Den opnåede forskel skyldtes det faktum, at disse patienter havde en underklasse af IgG-antistoffer mod Brucella abortus med bedre bindingsevne ved sur pH, derfor kunne de reagere med Rose Bengal-reagenset, men ikke med de febile antigener.
I denne forstand har de foreslået, at reagenserne ifølge den feberlige antigen-teknik modificeres til en sur pH-værdi, så de kan detektere denne type tilfælde.
Basis
Rose Bengal-reagenset består af en antigen suspension. Den består af S99-stammen af Brucella abortus, fortyndet i en sur laktatbuffer (pH 3,6) plus phenol og Rose Bengal-farvestoffet.
I den prøve, der søges, er derfor anti-Brucella antistoffer, hvis disse er til stede, vil de reagere med reagensantigenet, og en makroskopisk synlig agglutineringsreaktion vil blive observeret. Testen detekterer enten IgM-antistoffer eller IgG-antistoffer.
Dette betyder, at den kan påvise sygdommen både i dets akutte stadium, hvor IgM-antistoffer er fremherskende, eller i dets kroniske trin, hvor IgG-antistoffer dominerer.
Dette repræsenterer en fordel, da det øger testens følsomhed, men samtidig er det en ulempe, da det ikke skelner mellem et trin og et andet, fordi reaktionen med IgM- og IgG-antistoffer er identiske.
Testen skal altid udføres sammen med en negativ kontrol og en positiv kontrol. Den negative kontrol indeholder animalsk serum uden antistoffer, og den positive kontrol indeholder serum af animalsk oprindelse med 50 IE / ml anti-Brucella antistoffer.
Brug
Brucellose er en alvorlig sygdom, der har tendens til at være kronisk og farlig, så det er meget vigtigt, at den diagnosticeres tidligt. Det er en zoonose, og mennesker kan blive inficeret ved direkte kontakt med forurenet materiale, hvor de mest sårbare mennesker er dyrlæger og dyreplejere.
Infektion kan også forekomme ved at spise inficeret råt kød, blandt andre former for infektion.
Denne sygdom angriber lokalt eller systemisk. Den systemiske form er den mest alvorlige, da forskellige organer kan blive påvirket, inklusive retikulumendotelsystemet (lever, milt, knoglemarv), hud (cellulitis og lymfadenopati), åndedrætssystem (lungebetændelse), muskuloskeletalsystem (arthritis, sacroiliitis og spondylitis), blandt andre.
Rose Bengal-testen er en meget nyttig teknik til at udføre en indledende screening, fordi den er meget billig, let at bruge og har stor specificitet og følsomhed.
Tilfælde af falske negativer og falske positiver er meget sjældne og kan forekomme hos personer med henholdsvis meget lave antistoftitre (<25 IE / ml) eller ekstremt høje (> 1000 IE / ml).
Behandle
materialer
-Rose Bengal Kit
-Agglutination plade hvid baggrund
-50 µl pipette
-Rotator (valgfrit)
-Vortex
Teknik (kvalitativ metode)
Kommercielle Rose Bengal-sæt leveres med brugsklare reagenser.
-Temperer reagenserne, inden du begynder at arbejde.
-Agglutinationspladerne er tegnet cirkler, hver for en anden prøve. Brug 3 cirkler, den første til negativ kontrol, den anden til prøven og den tredje til den positive kontrol.
-Sæt et dråbe eller 50 µl af kontrollerne og prøven i deres tilsvarende cirkel.
-Bland Rose Bengal-reagenset ved hjælp af en hvirvel. Placer en dråbe ved siden af de tidligere placerede.
-Blanding med tandstikker fra træ (brug en til hver prøve eller kontrol). Lav cirkulære bevægelser og spred, så du dækker hele cirklen.
Kilde: billeder taget fra Video: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Redigeret billedlayout.
-Sæt pladen på en automatisk rotator ved 80 til 100 o / min eller drej manuelt i 4 minutter. Læs beviset i slutningen af dette tidspunkt.
- Bekræft, at kontrollerne gav som forventet. Sammenlign reaktionen af testprøven med kontrollerne. Rapporteres som positiv, hvis agglutination observeres, og som negativ, hvis der ikke er nogen agglutination.
En positiv test indikerer, at patienten har en mængde, der er lig med eller større end 25 IE / ml anti-Brucella antistoffer.
Fortolkning af en positiv (med agglutination) og negativ (uden agglutination) reaktion. Kilde: Citrulline. Redigeret billede.
Teknik (semi-kvantitativ)
Hvis prøven i den kvalitative reaktion er stærkt positiv, kan den semi-kvantificeres. Til dette fremstilles serielle dobbeltfortyndinger af prøven med fysiologisk saltopløsning. Den tidligere beskrevne procedure udføres med hver fortynding.
Det fortolkes også ved at observere agglutinationen makroskopisk. Resultatet vil være titeren for den højeste fortynding, hvori et positivt resultat blev observeret.
Til beregning af den omtrentlige værdi af anti-Brucella antistoffer bruges følgende formel:
25 IE / ml x reaktionstiter = IU / ml
Eksempel, hvis en patient i den semikvantitative test tester positiv ved fortynding ½, ¼ og 1/8 og begynder at være negativ fra 1/16 fortynding og fremover, betyder det, at patienten har en titer på 8.
Anvendelse af formlen:
25 IE / ml x 8 = 200 IE / ml
QA
-Sætene har en udløbsdato, og den skal respekteres. Bør ikke bruges, hvis reagenset er udløbet.
-Ved brug skal du sikre dig, at reagenset ikke indeholder faste partikler, da dette er et tegn på forringelse.
-Hold mellem 2 og 8 ° C
-Frys ikke, denne handling beskadiger reagenset irremediably.
- Udfør altid testen sammen med de negative og positive kontroller.
-Teknikken tolererer serumprøver med en vis grad af lipæmi og hæmolyse, men det anbefales ikke at bruge overdrevent lipemisk og hæmolyseret sera, begge tilstande ændrer testresultaterne.
-Sæt altid reagenser til stuetemperatur, inden analysen påbegyndes.
-Tolk ikke reaktioner, der tager længere tid end den anbefalede tid, da dette genererer rapporten om falske positiver, da reagenset efter en bestemt tid udfældes, hvilket simulerer en positiv reaktion.
-Teknikken er 100% følsom og har en specificitet på 98%.
-Efter en semikvantificering på 1000 IE / ml er der mulighed for at observere en prozoneffekt (falsk negativ på grund af overskydende antistof sammenlignet med mængden af antigener).
Referencer
- Rubio M, Barrio B og Díaz R. Værdi af Rosa de Bengala, Coombs og modimmuno-elektroforese-test for at diagnosticere tilfælde af human brucellose, hvor serumagglutination er negativ. Institut for Mikrobiologi. Clinical Microbiology Service. University Clinic. Universitetet i Navarra. 406-407. Fås på: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
- "Brucellose." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 6 dec. 2019, 14:37 UTC. 18. december 2019, 18:09 da.wikipedia.org.
- Monlab Laboratories. Monlab Bengal Rose - test. 2016. Tilgængelig på: monlab.es/
- Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Præsten Peru. Med. Eksp. Public Health 1997; 14 (1): 63-66. Fås på: scielo.org
- Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Klinisk, serologisk og polymerasekædereaktion opfølgning af en familie med brucellose. Rev. chil. Infectol. 2014, 31 (4): 425-433. Fås på: scielo.conicyt.