NEUBAUER KAMMER: HISTORIE, KARAKTERISTIKA, ANVENDELSER - BIOLOGI - 2025

Den Neubauer kammer, hematometer eller hæmocytometer, er et laboratorium instrument bestående af en særlig tyk glasplade. Dette kamera bruges til at tælle nogle celletyper, såsom røde blodlegemer, hvide blodlegemer og blodplader, selvom det kan bruges til at tælle sporer, sædceller, parasitter osv.

Det præsenterer nogle meget særlige karakteristika, da det består af 3 zoner, en central en til tælling og to støttezoner. Hvert kammer har to tællezoner eller krydsstole, et øverst og et i bunden.

Neubauer kammer. Kilde: SantiBadia. Redigeret billede.

Disse har flere opdelinger i en gitterform. Tælleområderne er de mellemliggende firkanter, der findes i de 4 hjørner af begge rister, plus den centrale firkant.

Samlingen af ​​kameraet skal udføres med stor omhu, da enhver detalje påvirker celletallet. Der er mange fejl, der kan laves, men hvis nogen af ​​dem opstår, skal kameraet adskilles, renses og samles igen. De vigtigste fejl inkluderer følgende:

Overløb kammeret eller underfyldning, lad kammeret tørre, forsøg på at fjerne overskydende væske med gasbind, vippe kammeret, når det transporteres, fylde et beskidt eller vådt kammer, ikke blande fortynding eller prøve godt, blandt andre. Alle disse fejl resulterer i en uvirkelig værdi.

Historie

Neubauer-kammeret er et præcisionsinstrument, og fremstillingsprocessen gennemgår streng kvalitetskontrol. Det blev skabt til den nøjagtige tælling af partikler eller dannede elementer pr. Mm ³, såsom celler i forskellige væsker. Dens delikate grafik er udskåret med en diamantblyant.

Neubauer kammeregenskaber

Hele kammeret er på størrelse med et normalt objektglas, så det kan placeres på mikroskoptrinnet.

Kammeret består af tre centrale rektangulære overflader (a, b, c). I zone “b” er R-zonen eller tællezonen, også kaldet et retikulum. En på hver side af kameraet, adskilt med zone "d".

Grafisk diagram over Neubauer Chamber. Kilde: Praktisk vejledning til hæmatologi. Skolen for bioanalyse fra University of Carabobo, Venezuela.

Hver graticule er et poleret område, der indeholder tælleområdet indgraveret. Det består af en firkant med et overfladeareal på 9 mm ² og er indvendigt opdelt i 9 firkanter med et overfladeareal på 1 mm ² hver. De fire hjørnekvadrater er opdelt i 16 mindre firkanter (0,0625 mm ² i areal).

Disse gitter er dannet af en række millimeterlinjer, der krydser hinanden og udgør perfekt grafiserede gitre afgrænset til de mål, der er specificeret. Disse linjer er indgraveret med en diamantspids.

Forbedret Neubauer-retikulum. Kilde: Praktisk guide til hæmatologi fra School of Bioanalysis ved University of Carabobo, Venezuela.

De fire sider svarer til tælleområdet. Det er på disse sider eller hjørner, at hovedparten af ​​celler (røde blodlegemer og leukocytter) tælles, mens blodplader tælles i det centrale område.

Den centrale zone har flere opdelinger, den består af en 1 mm ² kvadrat opdelt i 25 firkanter, der har et overfladeareal på 0,04 mm ² hver. Disse er igen opdelt i 16 gitre med et areal på 0,0025 mm ².

Beskrivelse af det forbedrede Neubauer-retikulum. a) Hjørne firkant, b) central firkant, c) median firkant af det centrale firkant. Kilde: Praktisk guide til hæmatologi fra School of Bioanalysis ved University of Carabobo, Venezuela.

Zone “a” og “c” tjener som understøttelse til at placere et specielt dækselobjekt kaldet et hematometrisk dias eller hematimeterafdækning.

Højden mellem folien og tælleoverfladen er 0,1 mm. Målinger af overfladearealet af tallybokse såvel som kammerets højde og prøvefortynding er data, der er nødvendige for at foretage de endelige beregninger.

Applikationer

Det bruges til celletælling. Det er især nyttigt i hæmatologiområdet, da det tillader optælling af de 3 blodlegemer. dvs. røde blodlegemer, hvide blodlegemer og blodplader.

Imidlertid kan det bruges i andre områder, for eksempel til at tælle sædceller, sporer, bakterier eller andre genstande af betydning afhængigt af prøvetypen.

Hvordan bruges det?

Prøveforberedelse

For at udføre celletallet startes det generelt fra en tidligere fortynding. Eksempel: For at tælle hvide blodlegemer skal du forberede en fortynding på 1:20 med Turk's væske. Fortyndingen blandes godt, inden pipetten læsses og Neubauer-kammeret monteres.

Der er tidspunkter, hvor en fortynding på 1:20 ikke er nok til at tælle. For eksempel hos patienter, der lider af visse typer af kroniske leukæmier. I disse tilfælde bør der foretages højere fortyndinger, såsom 1: 100.

Hvis antallet derimod er meget lavt, som ved svære leukopenier, kan der udføres mindre fortyndinger for at koncentrere prøven. Eksempel: du kan lave en fortynding på 1:10.

De ændringer, der foretages, påvirker beregningerne.

Neubauer kammermontering

Neubauer-kammeret samles ved at placere det hæmatometriske objektglas i det centrale område. Begge skal være meget rene og tørre. For at placere lamellen tages den ved kanterne og falder forsigtigt ned på kameraet.

Dette udfyldes ved at placere spidsen af ​​en Thoma automatisk pipet eller pipette i en vinkel på 35 ° ved kanten af ​​indlæserzonen. Væsken udledes jævnt, og lasteområdet fyldes af kapillaritet. Dette gøres fra begge sider for at indlæse de to krydsstole.

Retiklerne må ikke overbelastes, og de må heller ikke nægtes væske. Belastningen skal være nøjagtig. Det er vigtigt, at fyldningen udføres ensartet, dvs. at der ikke skal være nogen bobler.

Når kammeret er samlet, lodes det hvile i 2 minutter, så cellerne udfældes til bunden, og deres visualisering og tælling er lettere.

Efter hviletiden monteres det på scenen med lysmikroskopet til observation. Først er det fokuseret med et 10X mål og om nødvendigt går det til 40X.

For at forbedre dens visualisering reduceres passagen af ​​lys fra mikroskopet. For at gøre dette sænkes kondensatoren, og membranen er let lukket.

Counting

For at tælle de hvide blodlegemer eller leukocytter skal hele overfladen af ​​de fire median hjørne firkanter og den centrale firkant af hver retikulum tælles.

Tællingen starter i firkanten i øverste venstre hjørne. Du starter fra den første firkant i den første række, det vil sige fra venstre til højre, indtil du når den modsatte ende.

Der går du ned og ser tilbage fra højre til venstre, indtil du når den anden ende, og så videre tælles cellerne i hvert gitter på en zigzag-måde. De 16 gitre på hver median firkant tælles.

For at undgå at tælle en celle to gange er der regler for cellerne, der er placeret på grænselinjerne for hvert gitter. Celler på venstre og øverste linie tælles, og celler på højre og nederste linie ignoreres.

En manuel celletæller skal være tilgængelig, så operatøren trykker på enhedstasten så mange gange, som der er observerede celler. Ved at bruge tælleren kan operatøren tælle uden at skulle slå op fra det mikroskopiske felt. I slutningen af ​​tællingen vil du se det samlede antal celler, der er talt.

Beregninger

Til beregningerne kan du fortsætte på flere måder. En enkelt graticule kan tælles, eller begge kan tælles, og begge er gennemsnit. I disse to situationer skal de tællede celler ganges med en faktor, som i dette tilfælde ville være 40. Og således ^opnås det samlede antal pr. Mm ³.

Men hvis de to gitter tælles, og gennemsnittet ikke tages, skal det ganges med en anden faktor, i dette tilfælde med 20.

-Multiplikationsfaktor

Her beregnes multiplikationsfaktoren.

Der tages forskellige data i betragtning til beregningerne, inklusive fortyndings-titeren, kammerets højde og det tællede område.

Fortynding

Den anvendte standardfortynding er 1:20 for leukocytantal.

Kammerhøjde

Højden mellem kammeret og blodlegemets ark er 0,1 mm.

Talt område

Hvis der tælles 5 firkanter på 1 mm ^2- område, betyder det, at det samlede tælleareal er 5 mm ². Disse data skal ganges med kammerets højde for at opnå det totale antal, der tælles. Det vil sige 5 mm ² x 0,1 mm = 0,5 mm ³.

Formler og beregninger

Med de data, vi har, siges det:

Hvis der i 0,5 mm ³ - er der --- antal celler talt

I 1 mm ³ --- vil der være - X n ° celler

X antal celler = (antal celler talt x 1) / 0,5 mm ³

Men fortynding skal også tages i betragtning. Derfor er formlen som følger:

(antal celler talt x 1) x 20 / 0,5 mm ³

Endelig, for at opsummere, kan antallet af tællede celler ganges med 40. Således ^opnås værdien af ​​leukocytter pr. ^Mm3.

Hvis de to retikler tælles, ændres dataene for det tællede område, hvilket i dette tilfælde ville være 10 kvadrater, det vil sige 10 mm ². Og et samlet antal på 1 mm3. Formlen ville være:

(antal celler talt x 1) x 20/1 mm ³

Derfor ville multiplikationsfaktoren i dette tilfælde være 20.

fejl

-Hvis kameraet ilægges det eller overskrides med væske, varierer kameraets højde. Dette resulterer i, at antallet er højere end den rigtige. Hvis du prøver at fjerne overskydende med gasbind eller bomuld, er dette en enorm fejltagelse. Denne handling får cellerne til at koncentrere sig, hvilket øger antallet.

-Hvis det er indlæst dårligt, vil antallet være lavere end det rigtige.

-Hvis kameraet er monteret og får lov til at tørre, er det ikke længere muligt at tælle, fordi det vil give forkerte resultater.

-Hvis fortynding af prøven ikke blandes godt inden kammeret læsses, er der risiko for en fejl i aflæsningen, da cellerne ikke vil være homogent fordelt. Derfor vil der være en lavere eller højere koncentration af celler, afhængigt af om prøven udtages fra henholdsvis væskeoverfladen eller fra bunden af ​​røret.

-Tilstedeværelsen af ​​bobler reducerer mængden af ​​væske, der skal ind i retikulumet, hvilket forstyrrer den korrekte visualisering og distribution af cellerne. Alt dette påvirker resultaterne markant.

-I tælling skal du ikke kigge op fra mikroskopet, før hver stor firkant er afsluttet for at undgå at gå tabt.

-En af årsagerne til fejl er at vippe kameraet efter montering. Af denne grund skal trinnet i mikroskopet hæves omhyggeligt.

Henstilling

Hvis du af en eller anden grund opdager en unormalitet ved fyldning af kammeret, anbefales det, at du adskiller præparatet, rengør kammeret og samler igen fra bunden.

Vær forsigtig, når du rengør kameraet for at undgå at ridse krydshårene. På den anden side skal du være opmærksom på, at det hæmatometriske objektglas er delikat og skrøbeligt. Forkert håndtering kan ødelægge det.

Før du begynder at tælle, skal du sørge for, at cellerne er godt fordelt. En ujævn fordeling af celler sker fra dårlig prøveblanding eller fortynding. Hvis dette sker, skal monteringen gentages.

En måde at vide, om cellerne er godt fordelt, er ved at sammenligne antallet af hvert stort kvadrat, antallet af celler, der tælles for hvert kvadrat, bør ikke overdrives forskelligt fra det ene til det andet.

-Hvis antallet af hvide blodlegemer er over 50.000 mm ^3, tilrådes det at gentage antallet med en større fortynding.

-Hvis du ændrer fortynding, skal du beregne multiplikationsfaktoren igen, da dette påvirker formlen.

Referencer

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Sammenligning af sædkoncentration ved hjælp af Maklers kammer og Neubauer's kammer. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Fås i: scielo.
2. Neubauer kammer. (2018, 27. marts). Wikipedia, The Free Encyclopedia. Høringsdato: 04:10, 23. juni 2019 fra es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Anvendelse af en alternativ tællemetode i Neubauer-kammeret til bestemmelse af koncentrationen af ​​Trichomonas vaginalis. Pastor Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Fås på: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. Analyse af spermogrammet. Pastor Venez. Endocrinol. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. Fås i: ve.scielo
5. Hæmatologi praktisk guide til School of Bioanalysis ved University of Carabobo. Venezuela 1998