- Sammensætning af immersionsolie
- Fordypningsolieegenskaber
- Grundlæggende om dybe olie
- Anvendelser eller applikationer
- Trin for at observere et præparat ved hjælp af nedsænkningsolie
- Omsorg
- Referencer
Den immersionsolie er en viskos klar væske med et brydningsindeks høj. Af denne grund er det vidt brugt i mikroskopiske observationer, da det giver egenskaben at koncentrere lys, når det passerer gennem mikroskopets 100X-mål, hvilket øger dens opløsningsevne.
Dette sker, fordi der dannes en tyktflydende film mellem objektivet og udstrygningen, hvilket forhindrer, at lysstrålene spreder sig, når de når luften, hvorved lysstrålene koncentreres mod prøven.
Dråber med olie-nedsænkning og mikroskop fokuseret med 100X objektiv ved anvendelse af olie-nedsænkning. Kilde: Pixabay.com
Fordypningsolie bruges kun med 100X-målet. Derfor kaldes 100X-målet også et immersionsmål. Resten er kendt som tørre mål. Denne linse kan ikke bruges uden nedsænkningsolie, da uden den ville visualiseringen ikke være tilfredsstillende.
Hovedfunktionen med nedsænkningsolie er at tilvejebringe klarere, skarpere og mere definerede billeder, så man kan observere detaljer, som med andre linser ikke ville være mulig.
Den første olie, der blev brugt til dette formål, var anisolie, der blev brugt sammen med den første nedsænkelseslinse oprettet af Giovanni Battista Amici. Dette forhindrede kun kromatisk afvigelse, men forøgede ikke den numeriske åbning af linsesystemet.
Derefter blev cedertræolie brugt, men det havde mange ulemper, der tvang dens anvendelse. Blandt dem var dets høje surhedsgrad, som beskadigede målene på kort sigt.
Efterfølgende blev andre stoffer såsom vand og glycerin anvendt, indtil syntetiske nedsænkningsolier blev skabt, som lidt efter lidt blev raffineret, indtil de nåede den aktuelle nedsænkningsolie, som er en kompleks forbindelse med organiske stoffer.
Sammensætning af immersionsolie
Nedsænkningsolien består af en blanding af organiske forbindelser, såsom: terphenyl, hydrogeneret terphenyl, naturlige carbonhydrider og polybutener.
Fordypningsolieegenskaber
Immersionsolie er en lysegul væske, let viskøs i udseende, med en karakteristisk lugt og en densitet mellem 0,92 til 0,99 g / cm 3.
Fordypningsolie er ikke opløselig i vand og har et kogepunkt på 340 ° C. Brydningsindekset a (n 20 ° C / D): varierer fra 1,482 - 1,516. I mellemtiden er flashindekset 110 ° C, og viskositeten varierer fra 100 til 120 mPa.s.
Dette produkt skal bortskaffes korrekt, da det er økotoksisk. Det er med andre ord skadeligt for miljøet, hovedsageligt påvirker vanddyr. På den anden side er det irriterende for huden og slimhinderne. Hvis det indtages, er det nefrotoksisk og kardiotoksisk.
Fordypningsolie er stabil ved 15 til 25 ° C, temperaturen, ved hvilken den skal opbevares.
Grundlæggende om dybe olie
Når du bruger linser med højere forstørrelse, skal lysets intensitet øges. Mange af lysstrålene går imidlertid tabt, fordi de er spredt, når de når luften (mellemrummet mellem dækglaset og linsen), og endda nogle stråler reflekteres fuldstændigt.
Fordypningsolie har et brydningsindeks svarende til glas. Når olien kommer i kontakt mellem 100X-objektivet og dækglaset, koncentreres lysstrålene derfor.
De koncentrerede stråler passerer gennem prøven og skærper billedet, dvs. øger den numeriske åbning af objektivet og korrigerer for kromatiske og sfæriske afvigelser.
Anvendelser eller applikationer
Brug af nedsænkningsolie er nødvendig, især når det er nødvendigt at observere et billede på en bredere måde ved hjælp af det højeste forstørrelsesmål (100X-mål) for at se detaljer, der er vigtige for at etablere en diagnose.
Derfor bruges det i vid udstrækning i mikroskopiske undersøgelser inden for forskellige områder, såsom: histologi, cytologi, hæmatologi og bakteriologi. For eksempel er det nyttigt til undersøgelse af egenskaberne ved celler og væv hos en patient.
Det bruges også til analyse af blodudstrygning, hvor vi ønsker at specificere egenskaberne ved hæmoparasitter inden for og uden for erytrocytterne, såvel som i Gram-præparater, til at definere de morphotintorale egenskaber ved mikroorganismerne.
Det bruges generelt i faste præparater, da det ikke anbefales til friske præparater. Dette skyldes, at overfladespændingen på olien får dækglaset til at bevæge sig, hvilket får prøven til at skifte under observation og forhindre analyse.
På den anden side er nedsænkningsolie ikke kun nyttig i konventionel lysmikroskopi: den bruges også i total intern reflektionsfluorescens (TIRFM) mikroskoper og til konfokale fluorescensapplikationer.
Trin for at observere et præparat ved hjælp af nedsænkningsolie
For at se et dias under mikroskopet skal objektglaset først fokuseres med det laveste forstørrelsesmål, normalt 10X, med lav lysintensitet.
Derefter går det til 40X-målet, og lysstien øges lidt. Nogle analyser kan udføres ved denne forstørrelse, men 100X forstørrelse er påkrævet for at se strukturelle detaljer.
Før du går til 100X-objektivet, placeres en dråbe nedsænkningsolie på dækglaset, lige hvor du vil observere, og derefter flyttes mikroskoptårnet for at lokalisere 100x-målet i forberedelsen.
Lysets intensitet reguleres (øges) (ved at bevæge kondensatoren og åbne membranen). Derefter skal et par små bevægelser af mikrometerskruen (fremad eller bagud) fokusere perfekt, hvis mikroskopet bruger parafokale mål.
Hvis du prøver at fokusere præparatet direkte med nedsænkelseslinsen, kan du have problemer med at finde fokus. Det er ikke en umulig handling, men vanskeligheden øges markant.
Omsorg
For at bruge nedsænkningsolien skal der tages hensyn til visse betingelser.
Når der er lavet et farvet præparat, såsom en udstrygning farvet med Giemsa eller en Gram, skal du vente på, at udstrygningen tørrer fuldstændigt, før du placerer olie-nedsænkning. Ellers danner olien sammen med vandet miceller, som ikke tillader, at præparatet kan ses.
På den anden side, efter at have observeret batch af præparater, det vil sige ved arbejdsdagens afslutning, skal 100X-målet rengøres omhyggeligt ved hjælp af et linsepapir med ethanol. Hvis objektivet bliver beskidt, tørrer olien på det, og det vil være meget vanskeligt at fjerne det, hvilket beskadiger synsfeltet.
Ligeledes skal det tages i betragtning, at olien er brandfarlig og skal holdes væk fra varmekilder (lightere). Det er vigtigt at undgå opvarmning over 65 ° C.
Endelig er olie et giftigt produkt. Derfor bør direkte kontakt med hud og slimhinder undgås, hvor det kan forårsage let irritation. For at undgå ulykker anbefales brug af handsker og sikkerhedsbriller til at håndtere det.
I tilfælde af kontakt med olien skal området vaskes med rigeligt vand. Hvis olien sprøjter i øjnene, skal den vaskes på samme måde og hold øjnene åbne. I tilfælde af utilsigtet indtagelse er det vigtigt at indtage varmt vand og fremkalde opkast, ud over at gå til den nærmeste læge.
Referencer
- "Total intern reflektionsfluorescensmikroskop." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 30. dec. 2018, 22:46 UTC. 14. maj 2019, 01:54
- IVD. Mikroskopi Olie nedsænkning. Tilgængelig på: Brugere / Team / Downloads.
- Miljøbiologi og mikrobiologi. Betjening af det optiske mikroskop. Fås på: eumed.net/libros.
- Sánchez Lera Rita María, Oliva García Ninfa Rosa. Historik om mikroskopet og dets indvirkning på mikrobiologi. Rev Hum Med, 2015; 15 (2): 355-372. Fås i: scielo.
- Herrero J. Praksis nr. 1: Grundlæggende elementer og anvendelse af det almindelige optiske mikroskop. Universitat d´Alacant Tilgængelig på: rua.ua.es/dspace
- Scharlau - MSDS. Nedsænkningsolie til mikroskopi. 2001. Fås på: insumos-labcentral.