BAIRD PARKER AGAR: FUNDAMENT, KLARGØRING OG BRUG - BIOLOGI - 2025

Den agar Baird Parker er et fast medium selektiv og differentieret kultur. Det blev oprettet i 1962 til påvisning og tælling af koagulasepositive stafylokokker (Staphylococcus aureus).

Den består af pancreashydrolysat af kasein, kødekstrakt, gærekstrakt, lithiumchlorid, glycin, natriumpyruvat, kalium Tellurit, agar og æggeblommeemulsion.

Typiske Staphylococcus aureus-kolonier på Baird Parker-agar. Kilde: Daizy John

Baird Parker Agar er baseret på S. aureus 'evne til at reducere tellurit og producere lecithinase. Begge egenskaber genererer en koloni med specifikke egenskaber for denne art. Derfor er det yderst effektiv til påvisning af denne mikroorganisme.

De typiske kolonier af S. aureus er sort eller mørkegrå med en farveløs kant og en lys glorie, der omgiver dem, og som adskiller dem fra andre mikroorganismer. Denne patogen findes i kliniske prøver, farvande, kosmetik og rå eller kogte fødevarer.

Dets diagnose eller detektion er yderst vigtig på grund af de mange patologier, den producerer, såsom madforgiftning, skoldet hudsyndrom, toksisk choktsyndrom, abscesser, meningitis, septikæmi, endokarditis, blandt andre.

Basis

Nærende kraft

Pankreatisk caseinhydrolysat, kødekstrakt og gærekstrakt er kilderne til næringsstoffer, vitaminer og mineraler, der er nødvendige til generel mikrobiel udvikling, mens pyruvat og glycin er forbindelser, der understøtter den specifikke vækst af Staphylococcus aureus.

Selektiv

Baird Parker Agar er selektiv, fordi den indeholder stoffer, der hæmmer væksten af ​​den ledsagende flora, mens den fremmer udviklingen af ​​S. aureus. De inhiberende forbindelser er lithiumchlorid og kalium Tellurit.

Differential

Dette medium gør det muligt at differentiere S. aureus fra resten af ​​de koagulase-negative Staphylococci. S. aureus har evnen til at reducere tellurit til frit metallisk sort tellur, hvilket danner sorte eller mørkegrå kolonier.

Ligeledes tilvejebringer æggeblommen substraterne til at demonstrere tilstedeværelsen af ​​enzymet lecithinase og lipase. S. aureus er lecithinase-positiv, og derfor vil en klar glorie blive observeret omkring kolonien, hvilket indikerer, at lecithinet blev hydrolyseret.

I denne forstand indikerer udseendet på denne agar af blanke sorte eller mørkegrå kolonier med en lys glorie omkring dem tilstedeværelsen af ​​S. aureus.

Hvis der dannes en nedbørzone, er det tegn på lipaseaktivitet. Nogle stammer af S. aureus er lipasepositive og andre negative.

I det tilfælde, at S. aureus er lipasepositiv, vil der blive observeret et uigennemsigtigt område omkring den sorte eller mørkegrå koloni og derefter en lys glorie på grund af virkningen af ​​lecithinase.

Kolonier af andre bakterier end S. aureus, der er i stand til at vokse på dette medium, vil udvikle farveløse eller brune kolonier uden omgivende glorie.

Atypiske sorte kolonier kan også ses med eller uden en farveløs kant, men uden en let glorie. Der bør ikke tages højde for disse kolonier, de svarer ikke til S. aureus.

Forberedelse

Æggeblommeemulsion

Tag et frisk kyllingæg, vask det godt og anbring det i 70% alkohol i 2 til 3 timer. Ægget åbnes derefter aseptisk, og det hvide adskilles omhyggeligt fra æggeblommen. Derefter tages 50 ml af æggeblommen og blandes med 50 ml steril fysiologisk opløsning.

Kalium Tellurit 1% w / v

Nogle kommercielle huse sælger 1% kalium Tellurit klar til brug. Det sættes til mediet, før mediet størkner.

For at fremstille denne opløsning på laboratoriet vejes 1,0 g kalium Tellurit og opløses i en del vand. Derefter afsluttes mængden af ​​vand, indtil den når 100 ml. Opløsningen skal steriliseres ved filtreringsmetoden.

Fremstilling af kulturmedium

Vej 60 g af det dehydrerede medium og opløs i 940 ml destilleret vand. Lad blandingen sidde i ca. 5-10 minutter.

Tilfør varme ved ofte at omrøre mediet for at forbedre opløsningen. Kog op i et minut. Steriliser i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

Lad stå, indtil den når en temperatur på 45 ° C, og tilsæt 50 ml æggeblommeemulsion og 10 ml 1% tellurit. Bland godt, og hæld 15-20 ml på sterile petriskåle.

Lad størkne, bestil omvendt i plaquere og opbevar i køleskab indtil brug.

Det færdige medias endelige pH skal være 6,8 ± 0,2.

Inden du sætter en prøve i, skal du vente på, at pladen når stuetemperatur. Frø pladerne ved stribning eller ved overflade podning med en Drigalski spatel.

Farven på det dehydratiserede medium er lysbrun og farven på det fremstillede medium er lys gul.

Brug

Kliniske prøver

De kliniske prøver sås direkte, hvoraf en del af materialet tømmes i den ene ende af pladen, og derfra strimles det af udmattelse. Inkuber i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C.

Madprøver

Vej 10 g af fødevareprøven og homogeniseres i 90 ml 0,1% peptonvand, hvorfra der fremstilles fortyndinger om nødvendigt. Inokuler pladerne i tredobling med 0,3 ml af de forberedte opløsninger og frø på overfladen med en Drigalski-spatel. Inkuber i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C.

Denne metode gør det muligt at tælle de opnåede typiske kolonier og er ideel, når der er mistanke om tilstedeværelse af S. aureus over 10 CFU pr. G / ml prøve.

Hvis mængden af ​​S. aureus mistænkes for at være lille, eller der er en masse ledsagende flora, foreslås det at berige prøven i trypticase sojabrug med 10% NaCI og 1% natriumpyruvat. Dette vil fremme væksten af ​​S. aureus og hæmme udviklingen af ​​den ledsagende flora. Grumsete rør frøes på Baird Parker agar.

Vandprøver

I et steriliseret vakuumfiltreringssystem filtreres 100 ml undersøgelsesvand, hvorefter den 0,4 mikron mikroporøse membran fjernes med en steril tang og anbringes på en Baird Parker-plade. Inkuber i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C. Denne teknik muliggør optælling af typiske S. aureus-kolonier.

QA

Kendte stammer såsom Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071 kan anvendes til at evaluere kvaliteten af ​​Baird Parker agar.

I tilfælde af S. aureus ATCC-stammer er det kendt at reducere tellurit, og de er lipase- og lecithinase-positive. Derfor skal der være en tilfredsstillende udvikling og vokse konvekse kolonier med en sort center og farveløs kant, med en uigennemsigtig halo og en let yderste glorie.

S. epidermidis forventes på sin side at udvikle sig dårligt på dette medium med brungrå til sorte kolonier uden en let glorie.

For E. coli og P. mirabilis forventes det, at den hæmmes fuldstændigt eller delvist. I tilfælde af vækst vil brune kolonier udvikle sig uden et uigennemsigtigt område eller en let glorie.

anbefalinger

-Mediet bør ikke opvarmes efter tilsætning af tellurit og æggeblommen.

-Forberedelsen af ​​æggeblommemulsionen og dens tilsætning i midten er et meget sårbart trin til kontaminering. Der skal udvises ekstrem omhu.

-Hvis der er tilstedeværelse af typiske kolonier af S. aureus, skal det bekræftes ved montering af en koagulasetest på nævnte stamme.

-Hvis der er tvivlsomme resultater med koagulase, skal andre bekræftende tests monteres.

-Vær forsigtig med ikke at forveksle tilstedeværelsen af ​​typiske S. aureus-kolonier med atypiske sorte kolonier.

Referencer

1. Wikipedia-bidragydere. Baird-Parker agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 15. marts 2017, 19:36 UTC. Tilgængelig på: wikipedia.org/ Tilgået den 18. februar 2019.
2. BD Laboratories. Baird Parker Agar. 2006. Tilgængelig på: bd.com
3. Britannia Laboratories. Baird Parker agar base. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Tilgængelig på:
5. Britannia Laboratories. Kalium-tellurit. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Transport af enterotoksigene Staphylococcus aureus type A, i nasopharyngeal udstrygning i fødevarebehandlere. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Venezuelansk Standard Covenin 1292-89. (1989). Foods. Isolering og tælling af Staphylococcus aureus. Fås på: sencamer.gob.ve