BHI AGAR: FUNDAMENT, FORBEREDELSE OG ANVENDELSER - BIOLOGI - 2025

The BHI-agar eller Brain Heart Infusion agar medium er en nærende fast kultur. På spansk betegner vi det som hjerneinfusionsagar. Det er et ikke-selektivt kulturmedium, hvilket betyder, at alle typer Gram-positive og Gram-negative bakterier kan udvikle sig, såvel som nogle gær- og filamentøse svampe.

Det er sammensat af en infusion af kalvehjerne og hjerte, peptisk hydrolysat fra dyrevæv, pancreashydrolysat af kasein, natriumchlorid, glukose, dinatriumphosphat og agar.

BHI-plader. Kilde: Foto taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil.

Det skal bemærkes, at BHI-agar er et af de mest anvendte kulturmedier i bakteriologilaboratorier. Det kan bruges uden kosttilskud som primær kultur, subkultur af kolonier opnået på andre selektive medier eller til vedligeholdelse af stammer i laboratoriet.

På den anden side er det et ideelt medium, der skal bruges som base til fremstilling af berigede medier, såsom blodagar og chokoladeagar. Begge er ideelle til at isolere krævende mikroorganismer fra et ernæringsmæssigt synspunkt. Det skal dog bemærkes, at da det indeholder glukose, det ikke er egnet til at observere hæmolysemønstre.

Ligeledes kan BHI-agar anvendes til fremstilling af specielle medier til isolering af vanskelige at dyrke patogene mikroorganismer i almindelige medier, blandt dem: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae og Histoplasma capsulatum.

Med det antibiotiske additiv bliver BHI-agar et selektivt medium til isolering af svampe.

Basis

Det er et nærende kulturmedium til at isolere moderat krævende mikroorganismer, og dets berigelse kan øges med tilsætning af blod og andre ernæringstilskud.

Det er et ikke-selektivt kulturmedium, derfor tillader det vækst af de fleste Gram-positive og Gram-negative bakterier samt nogle svampe. Imidlertid kan det gøres selektivt med tilsætning af antibiotika.

Mediet indeholder infusion af kalvehjerne og hjerte, peptisk hydrolysat af dyrevæv og pancreashydrolysat af kasein; Alle disse forbindelser fungerer som kilder til vitaminer, aminosyrer, nitrogen og kulstof.

Glukose er et kulhydrat, der leverer energi til mikroorganismer, når de har fermenteret det. I mellemtiden opretholder natriumchlorid og dinatriumphosphat osmotisk balance og tilvejebringer en pH tæt på neutralitet. Endelig giver agaren den medium faste konsistens.

Forberedelse

Vej 52 gram af det dehydrerede medium og opløst i en liter destilleret vand. Bring blandingen til en varmekilde, indtil den koger, og omrøres ofte under opløsningen.

BHI-agarplader eller kiler kan fremstilles uden tilsætningsstoffer.

Kiler

Til tilberedning af kiler serveres præparatet, indtil halvdelen af ​​hvert rør er fyldt, dækker og steriliserer i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter, når de forlader, læg dem på en base, indtil de størkner. Opbevares senere i køleskabet, indtil brug.

BHI-kiler til bakterioteca. Kilde: Foto taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil.

Plader

Den opløste blanding autoklaveres ved 121 ° C i 15 minutter, når den forlades, lodes den afkøle til 50 ° C, og 20 ml af mediet serveres i sterile petriskåle. De får lov at stivne, vendes og opbevares i køleskabet indtil brug. Lad pladerne komme til stuetemperatur inden podning.

PH i mediet skal forblive på 7,4 ± 0,2.

Det rå medium er beige i farve, og det tilberedte medium har lys ravfarvet farve.

Forberedelse af blodagar

Efter sterilisering af mediet afkøles til en temperatur på ca. 45 til 50 ° C, tilsættes derefter blodet (50 ml), bland forsigtigt til homogenisering og server aseptisk 20 ml i hver petriskål. Hvis der dannes bobler på pladen, skal den lettere flamme føres hurtigt over boblerne for at fjerne dem.

Ligeledes kan specielle medier fremstilles ved at tilsætte de tilsvarende additiver, når blandingen når en temperatur på 45 til 50 ° C.

Mediet forbliver kirsebærrødt.

Applikationer

Brug uden kosttilskud

BHI-agaren uden tilsætningsstoffer er nyttig som en primær kultur og til såning af rene stammer af lav eller medium krævende mikroorganismer til deres efterfølgende identifikation.

Da det er et lysfarvet medium, er det ideelt til observering af pigmenter, og da det ikke indeholder interfererende stoffer, kan nogle biokemiske tests, såsom oxidase og katalase, udføres på det, eller andre biokemiske tests kan monteres fra kolonier herfra agar.

Ligeledes bruges BHI-agarkiler i vid udstrækning til vedligeholdelse af stammer i et bestemt tidsrum i laboratoriet (bakterioteca).

Plader eller kiler, der er podet af overfladen med bakteriestammer, inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer. I mellemtiden afhænger temperaturen og inkubationstiden i svampe af den type svampe, der søges.

Som basisagar til forberedelse af andre medier

Med denne base kan berigede og selektive medier fremstilles.

Beriget

Dets vigtigste funktion er at tjene som grundlag for forberedelse af blodagar til rutinemæssig anvendelse i mikrobiologiske laboratorier. Især er BHI-basen befordrende for isoleringen af ​​Streptococcus sp. Imidlertid har det den ulempe, at den ikke er egnet til at observere hæmolysemønstre, fordi den indeholder glukose.

Det bruges også til fremstilling af kanin- eller hesteblodagar til isolering af Haemophilus sp. For de bedste resultater kan der tilføjes et berigelsestilskud (IsoVitaleX).

Hvis prøverne kommer fra luftvejene, kan bacitracin sættes til agaren for at hæmme den ledsagende flora og øge sandsynligheden for bedring af Haemophilus sp. Stammer.

Alternativt kan blodagar (lam eller menneske) med cystint Tellurit fremstilles til at isolere Corynebacterium diphtheriae. Ligeledes er det nyttigt at fremstille kaninblodagar med tilsætning af cystin og glukose til isolering af Francisella tularensis.

Såning af blodagarpladerne udføres ved udmattelse, og de inkuberes ved 35-37 ° C i 24-48 timer i mikroaerofilicitet (5-10% CO ₂).

Selektiv

Dette medium med tilsætning af antibiotika kan erstatte Sabouraud-agar til isolering af svampe.

Kombinationen af ​​BHI-agar med chloramphenicol - gentamicin eller penicillin -, streptomycin og hesteblod er ideel til isolering af Histoplasma capsulatum.

Afhængig af mikroorganismen, der skal isoleres, anbefales det at inkubere ved 35-37 ° C eller ved stuetemperatur i aerobiose. Undertiden er inkubation nødvendig i begge temperaturområder ved hjælp af 2 plader til dette.

Nogle svampe, såsom Trichophyton mentagrophytes, skal inkuberes ved stuetemperatur i op til 7 dage.

QA

Fra hver forberedt batch anbefales det at inkubere en plade eller kile ved 37 ° C i 24 timer og kontrollere, at der ikke er nogen vækst; Det er især vigtigt, når man tilbereder blodagar, fordi det er et let forurenet medium.

På den anden side kan kvaliteten af ​​mediet evalueres ved at inokulere kendte eller certificerede standardstammer og observere deres udvikling.

I denne forstand kan man anvende stammer af Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 eller Candida albicans ATCC 10231 til at evaluere BHI-agar uden additiver og inkuberes ved 37 ° C i aerobiose i 24 til 48 timer. I alle tilfælde forventes en tilfredsstillende vækst.

Stammer af Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 eller Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 kan podes for at evaluere blodagarplader.

Bakteriestammer inkuberes ved 37 ° C i mikroaerofilicitet i 24 timer, medens svampen inkuberes ved stuetemperatur i et fugtigt kammer i op til 7 dage. I alle tilfælde forventes tilfredsstillende vækst.

Referencer

1. Britannia Laboratories. Hjernen hjerteinfusion agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com.
2. BD Laboratories. Brain Heart Infusion (BHI) Agar. 2013. Tilgængelig på: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Brain Heart Infusion Agar. 2009.
4. Neogen Laboratory. Hjernen hjerteinfusion agar. Fås på: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Blodagar: fundament, anvendelser og klargøring. 2018. Tilgængelig på: lifeder.com.
6. Wikipedia-bidragydere. Hjerneinfusion. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 19. september 2018, 03:58 UTC. Fås på: wikipedia.org. Åbnede 2. marts 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.