Den agar Biggy er et fast medium selektiv og differentieret kultur. Det var designet til at isolere og hjælpe med at identificere de vigtigste Candida-arter. Dets navn BIGGY stammer fra forkortelsen på engelsk Bismuth Glucose Glycine Yeast.
Den originale formel blev oprettet af Nickerson, hvorfor dette medium også kaldes Nickerson agar. For tiden er det sammensat af gærekstrakt, glycin, dextrose, ammoniumcitrat, vismutcitrat, natriumsulfit og agar.
Grafisk repræsentation af BIGGY-agar. Kilde: Flickr.com
BIGGY-agar er formuleret til differentiering af arten Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei og C. kefyr, men andre arter vokser også, såsom Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum og Saccharomyces cerevisiae.
Det har god følsomhed og specificitet, men sammenlignet med andre medier med en lignende funktion, er det på andenpladsen, der overgås af CHROMagar. Af denne grund foretrækker mange laboratorier sidstnævnte, selvom det er meget dyrere.
Det skal være klart, at brugen af BIGGY-agar såvel som andre lignende midler hjælper en hurtig formodende identifikation, men aldrig bekræftende. Derfor skal yderligere identifikationsmetoder være tilgængelige; for eksempel Vitek 32 og API 20 identifikationssystemer.
Basis
BiGGY-agar betragtes som et delvist selektivt medium til isolering af gær, især af slægten Candida, selvom andre slægter kan vokse.
Det er også et differentielt medium, fordi afhængigt af den involverede art, vil der blive observeret forskellige egenskaber med hensyn til udseende, farve, form og størrelse. Det betragtes som et kromogent medium på grund af udviklingen i forskellige farver i kolonierne.
Farven på gærkolonierne skyldes tilstedeværelsen af vismutsulfit i agaren. Nickerson indså, at gær af slægten Candida udfører en ekstracellulær reduktion af vismuthsulfit og omdanner den til vismutsulfid (uopløseligt sort stof). Dette resulterer i lysebrune til sorte kolonier.
Denne agar indeholder gærekstrakt og dextrose, der giver kilden til basale næringsstoffer og energi til udvikling af gær. Glycin er et gærvækststimulerende middel, mens det hæmmer væksten af visse bakterier.
I denne samme forstand fungerer ammonium og vismutcitrat såvel som natriumsulfit som hæmmere for bakterievækst. Agar er det middel, der giver den medium faste konsistens.
Forberedelse
Vej 45 g af det dehydrerede kulturmedium og opløst i en liter destilleret vand. Ryst og opvarm blandingen, kog i 1 minut indtil fuldstændig opløsning. Dette kulturmedium er ikke autoklaverbart.
Efter afkøling til ca. 45 ° C i et vandbad, hældes 20 ml på sterile petriskåle.
Farven på det dehydratiserede medium er gulgrå og fremstillet er en gullig hvid gel, hvori et let flokkulerende bundfald kan observeres.
PH-værdien skal være 6,8 ± 0,2.
Det tilberedte medium skal opbevares i køleskab (4 ° C) og beskyttes mod lys. Da det er et medium, der ikke kan autoklaveres, skal det bruges så hurtigt som muligt. Dets brug anbefales inden 3 dage efter forberedelsen.
Brug
Pladerne inkuberes ved stuetemperatur (25 ° C) i 24, 48 og 72 timer, og inkubationstiden kan forlænges op til 5 dage.
Hver art af Candida udvikler visse egenskaber, der får dem til at skelne fra hinanden. Producenterne af mediet beskriver følgende egenskaber for hver art:
-Candida albicans-kompleks: udvikler sig på denne agar som glatte, runde, brune eller sorte kolonier med en let mycelial grænse. Med undtagelse af, at den mørke farve ikke diffunderer til midten.
-Candida tropis: lyse, små, mørkebrune kolonier med et sort centrum og en let myceliumkant. Den mørke farve diffunderer mod midten, en egenskab, der er typisk for denne art, efter at have været inkuberet i 72 timer.
-Candida krusei udvikler store, flade, uslebne kolonier med en brun til sortlig grænse.
-Candida parakrusei: mellemstore kolonier, for det meste ru og flade. Farven kan variere fra lys mørk rødbrun til lys rødbrun. Koloniernes grænse har omfattende, gulaktigt mycel.
-Candida stellatoidea: udvikler medium, flade kolonier, mørkebrun, næsten sort. Mycelial udvikling er meget knap.
En undersøgelse udført af Yücesoy og Marol i 2003 viste, at CHROMagar-medium har bedre følsomhed og specificitet for differentiering og identifikation af forskellige Candida-arter end BIGGY-agar.
QA
Til sterilitetskontrol inkuberes uinokulerede plader ved 25 ° C, i mørke i 24 til 48 timer forventes det, at der ikke er nogen vækst af nogen art eller farveændring.
De ATCC-stammer, der anbefales til kvalitetskontrol af mediet, er:
Candida albicans ATCC 60193 kompleks, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. I dem alle forventes vækst som beskrevet ovenfor.
Følgende stammer kan også bruges:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 og Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. I de første to forventes total hæmning, men i tilfælde af delvist voksende vil kolonierne være cremefarvet.
I tilfælde af S. aureus forventes det at blive hæmmet fuldstændigt, men hvis det vokser delvist, er dets kolonier hvide.
Begrænsninger
Nogle bakterier er i stand til at vokse i dette medium og kan endda blive mørke i farve ved at simulere en Candida-koloni, men når man udtværer kolonien og observerer den under et mikroskop, kasseres den let.
Tabel: Egenskaber ved kolonierne i nogle gærer på BIGGY-agar i henhold til arbejdet fra Yücesoy M og Marol S.
Kilde: Yücesoy M, Marol S. Ydelse af CHROMAGAR candida og BIGGY-agar til identifikation af gærarter. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7
Referencer
- Yücesoy M, Marol S. Ydelse af CHROMAGAR candida og BIGGY-agar til identifikation af gærarter. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Teknisk datablad BIGGY Agar. Tilgængelig på: mcdlab.net/
- Lab Neogen. BIGGY Agar. Fås på: foodsafety.neogen.com
- Conda Pronadisa Laboratories. BIGGY agar. Fås på: condalab.com
- BD Laboratories. BD BiGGY Agar (Bismuth Glucose Glycin gær Agar). 2011. Tilgængelig på: bd.com