GALLE-ESCULIN-AGAR: BEGRUNDELSE, KLARGØRING OG ANVENDELSER - BIOLOGI - 2025

Den galde esculin agar er et selektivt og differentielt medium fast kultur. Det bruges som en diagnostisk test til at bestemme evnen af ​​en bestemt mikroorganisme til at vokse i et medium indeholdende galden og også til at nedbryde glukosid-esculin til esculetin og glukose.

Denne diagnostiske test bruges til at differentiere arter af slægten Streptococcus, der hører til gruppe D (galde-esculin-positiv) fra andre grupper af Streptococcus, der reagerer negativt på denne test.

Galle-esculin-agarplade, podet med en Enterococcus-stamme (test positiv). Kilde: Ingen maskinlæsbar forfatter leveret. Philippinjl antog (baseret på ophavsretskrav).

Det skal bemærkes, at nogle Streptococcus fra viridans-gruppen kan hydrolysere esculin, men ikke er i stand til at vokse i nærværelse af galden i en koncentration på 40%, derfor er reaktionen for denne gruppe negativt i dette medium.

På den anden side er galde-esculin-mediet også nyttigt til diagnose af Listeria monocytogenes eller Aerococcus sp-arter, da disse mikroorganismer er galde-esculin-positive.

Esculin Bile Agar er sammensat af pepton, kødekstrakt, ox gal, esculin, jerncitrat, agar og destilleret vand. Nogle kommercielle huse inkluderer natriumazid i sammensætningen af ​​mediet.

Mediet kan fremstilles i laboratoriet, hvis du har alle forbindelserne separat, eller det kan fremstilles fra det kommercielle dehydratiserede medium.

Basis

Esculin med galden indeholder peptoner og kødekstrakt, begge forbindelser tilvejebringer de nødvendige næringsstoffer til vækst af mikroorganismer.

Det indeholder også esculin; Denne forbindelse er et glycosid dannet ved foreningen af ​​et simpelt monosaccharid (glucose) med en forbindelse kaldet 6,7-dihydroxycoumarin eller esculetin (aglucone), bundet med en acetal eller glukosidisk binding.

Testen er baseret på at vise, om bakterierne er i stand til at hydrolysere esculin. Hvis dette sker, nedbrydes esculinen i esculetin og glukose. Esculetina reagerer med det jern, der er til stede i mediet, og danner en mørkebrun, næsten sort forbindelse.

Dette betyder, at jerncitrat fungerer som en reaktionsudvikler. Denne egenskab gør Bile Esculin Agar til et differentielt medium.

Galden er på sin side en hæmmer, der forhindrer vækst af nogle mikroorganismer, derfor skal bakterien, inden spaltning af esculin, kunne vokse i nærværelse af galden. Derfor betragtes dette medium som selektivt.

De bakterier, der kan udvikle sig i dette miljø, er hovedsageligt de, der lever i tarmmiljøet.

I denne forstand tilføjer nogle kommercielle virksomheder natriumazid til mediet for yderligere at hæmme væksten af ​​enteriske Gram-negative baciller, hvilket øger mediets selektivitet til vækst af Streptococcus.

Endelig giver agaren den faste konsistens til mediet, og vand er opløsningsmidlet af forbindelserne.

Forberedelse

Hjemmelavet tilberedning af galde-esculin-agar

At veje:

5 g peptoner

3 g kødekstrakt

40 g oksekød

1 g esculin

0,5 g jerncitrat

15 g agar

1000 ml destilleret vand

I tilfælde af tilsætning af natriumazid vejes 0,25 g / liter og tilsættes til blandingen.

Opløs komponenterne i liter destilleret vand, opvarm, indtil forbindelserne er helt opløst. Fordel 5 ml i 16 x 125 mm reagensglas med skruehætte. Autoklaver ved 121 ° C, 15 kg tryk i 15 minutter.

Fjern fra autoklaven, og vip rørene på en støtte, så agaren stivner i et bredt fløjtsnæb.

Opbevares i køleskab indtil brug. Brænd til stuetemperatur før såning.

Galle-esculin-agarplader kan også fremstilles; i dette tilfælde autoklaveres hele blandingen i en kolbe og fordeles derefter i sterile petriskåle. Lad dem stivne og opbevares i køleskabet.

PH i mediet skal være 6,6 ± 0,2.

Fremstilling af galde-esculin-agar fra et kommercielt medium

Vej det beløb, der er angivet af indsatsen. Dette kan variere fra et forretningshus til et andet. Fortsæt derefter den samme som proceduren beskrevet ovenfor.

PH i mediet bør være 6,6 ± 0,2. Farven på det dehydrerede medium er lys beige, og det tilberedte medium er mørk rav.

Kommerciel galde-esculin-medium. Kilde: Foto taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil.

Applikationer

Galle-esculin-mediet bruges hovedsageligt til at differentiere gruppe D Streptococcus (galde-esculin-positiv) fra resten af ​​Streptococcus-grupperne (galde-esculin-negativ).

Ved at kombinere den hypersaltede buljongvæksttest med galden-esculin-test kan identificere en speciel gruppe af gruppe D Streptococcus kaldet Enterococcus.

Denne specielle gruppe Streptococcus tilhører gruppe D af den førnævnte slægt, og de er i stand til at hydrolysere esculin i nærvær af galden ligesom resten af ​​medlemmerne af gruppe D, men de er også i stand til at udvikle sig i et hypersaltet medium (BHI med klorid af 6,5% natrium), en egenskab, der gør forskellen.

Derfor kaldes Streptococci, der hydrolyserer esculin galden, men ikke vokser i hypersalt bouillon, ikke-enterococci gruppe D Streptococci.

sået

Inokuler mediet fortrinsvis fra en ren Todd-Hewitt 24-timers bouillon.

Tilsæt 2 dråber til overfladen af ​​mediet med en pasteurpipette og spred i mediet med en platineløkke.

Inkuber ved 35 ° C i 48 timer, mens inkubationstiden er overholdt, det kan overvåges for at se, om der er en positiv reaktion. Hvis reaktionen ved slutningen forbliver negativ, kan den inkuberes i op til 72 timer.

Tolkning

Positiv reaktion: forekomst af en mørkebrun, næsten sort farve i fløjtsnæbben (i tilfælde af rørprøve) eller formørkning af agaren omkring kolonierne (i tilfælde af pladetesten).

Negativ reaktion: ingen formørkning af mediet forekommer, eller der er sort udseende i mindre end halvdelen af ​​røret efter 72 timers inkubation. På den anden side bør bakterievækst i mediet uden den sorte farves udseende betragtes som en negativ test.

QA

For at evaluere mediets kvalitet skal en Enterococcus faecalis ATCC 29212-stamme være tilgængelig som en positiv kontrol og en Streptococcus-stamme, der ikke hører til gruppe D som en negativ kontrol.

Begrænsninger

-Media, der ikke indeholder natriumazid, tillader vækst af enteriske Gram-negative baciller. Nogle af dem kan sorte midten.

- Nogle kommercielle huse tilføjer en lav koncentration af galden (10%), og af denne grund kan nogle Streptococcus, der ikke hører til gruppe D, udvikle sig i mediet og hydrolysere esculin, hvilket kan generere fejl i fortolkningen.

Referencer

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemiske test til identifikation af bakterier af klinisk betydning. 3. udg. Redaktionel Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Lab. Britannia. Esculin gald med azidagar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
5. "Bile Esculin Agar." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 22 aug. 2017, 17:30 UTC. 22. april 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorios Bd. Bile Esculin Agar Slants. 2015. Tilgængelig på: bd.com
7. Neogen Laboratories. Galle-esculin-agar. Fås på: foodsafety.neogen.com