Den cetrimid-agar eller cetrimid er en selektiv fast dyrkningsmedium designet til isolering af Pseudomonas aeruginosa. Det er baseret på at vise produktionen af karakteristiske pigmenter af denne art og blev foretaget af ændringen af Tech-agar, oprettet af King, Ward og Raney.
Den originale formel indeholdt salte af magnesiumchlorid, kaliumsulfat, pancreasfordøjelse af gelatine og agar-agar. Modificeringen af formlen bestod af tilsætning af cetrimid (cetyltrimethylammoniumbromid) og glycerol.
Cetrimid-agar podet med Pseudomonas aeruginosa Kilde: BiotechMichael, fra Wikimedia Commons
Cetrimid-agar er nyttig til den mikrobiologiske undersøgelse af prøver, hvor der er mistanke om tilstedeværelse af Pseudomonas aeruginosa. Det skal bemærkes, at denne bakterie er ekstremt vigtig, fordi selv om den er en del af den normale miljømikrobiota, opfører den ofte sig som et opportunistisk patogen.
Af denne grund er et af de mest almindelige problemer forårsaget af denne kim nosokomiale infektioner, dvs. dem, der forekommer i hospitalets miljø, og angriber patienter, der har et deprimeret immunsystem.
På den anden side på grund af den affinitet, som denne mikroorganisme har med fugtighed, er de mest sårbare forureningsmål: assisteret åndedrætsudstyr, medicin, forstøver, vandkilder, klimaanlæg, desinfektionsmidler, sæbeopløsninger, injicerbare opløsninger, åbne sår, katetre, urinrør, blandt andre.
I denne forstand er cetrimid-agar nyttigt til at udføre mikrobiologiske kontroller og kulturer til de tidligere nævnte elementer.
Basis
Cetrimid-agar er baseret på mediets evne til at fremme væksten af P. aeruginosa, stimulere produktionen af dets pigmenter og til gengæld hæmme væksten af andre mikroorganismer.
Disse egenskaber skyldes funktionen af hver af dens komponenter. Den tilstedeværende gelatinpepton tjener som en kilde til nitrogen, vitaminer og mineraler. Glycerol eller glycerin fungerer som en kulstofkilde.
På sin side er cetrimid (cetyltrimethylammoniumbromid) det stof, der hæmmer væksten af andre bakterier end P. aeruginosa, inklusive andre arter, der tilhører den samme slægt.
Inhibering sker, fordi cetramid fungerer som et kationisk detergent, der formår at destabilisere plasmamembranen for de fleste bakterier, bortset fra P. aeruginosa og nogle andre, der formår at overleve.
På den anden side indeholder det magnesiumchlorid og kaliumsulfat. Disse forbindelser stimulerer fænotypisk ekspression relateret til Pseudomonas aeruginosas evne til at producere forskellige pigmenter, herunder: pyocyanin, pyoverdin, pyorrubin, pyomelanin og fluorescein. Endelig indeholder den agar-agar, hvilket giver den en solid konsistens.
Tolkning
Fortolkningen af væksten opnået i denne agar udføres som følger:
Observationen af runde, glatte kolonier med regelmæssige kanter med produktion af blågrønlige, grønne, brune eller rødlige pigmenter plus udsendelse af frugtagtig lugt (aminoacetophenon) er et formodende resultat af tilstedeværelsen af denne bakterie i nævnte prøve.
På den anden side er observationen af et lysgrønt-gult pigment på kolonierne tegn på P. aeruginosa, når pladen udsættes for ultraviolet lys.
Fluorescens af P. aeruginosa-kolonier på cetrimidagar under ultraviolet lys.
Det skal bemærkes, at hver observeret farve skyldes produktionen af et specifikt pigment. Det blågrønne pigment svarer til produktionen af pyocyanin, det grønne til pyoverdin, det rødligt til pyorubin, det brune til pyomelanin og den lysegulgrønne fluorescens under UV-lys til fluorescein.
Forberedelse
Vej 43 g af det dehydrerede medium, og opløs det i destilleret vand. Tilsæt 10 ml glycerol. Tag blandingen til en varmekilde. Lad det koge et par minutter, indtil den er fuldstændig opløst.
Autoklave ved 121 ° C i 15 minutter. Lad stå og server i sterile petriskåle, når temperaturen er omkring 50 ° C.
Lad størkne, vend om, rækkefølgen i plaqueros og opbevares i køleskabet, indtil brug. Cetrimid-agarplader skal fjernes fra køleskabet på forhånd til podning og lad dem komme til stuetemperatur.
Mediets endelige pH-værdi skal være 7,2 ± 0,2.
Farven på det dehydratiserede medium er beige, og præparatet er uigennemsigtigt hvidt.
Applikationer
Alle former for prøver, hvor der er mistanke om tilstedeværelse af Pseudomonas aeruginosa, kan sås på cetrimid-agar. Derfor er det nyttigt inden for alle områder af mikrobiologi (miljø, industri, klinisk, vand og mad).
Det er meget vigtigt at analysere hospitalets miljøer og således være i stand til at anvende korrigerende forholdsregler, da denne mikroorganisme når patienter gennem kontamineret udstyr, medicin, opløsninger og forsyninger, der bruges af patienten.
På denne måde kan mikroorganismen inficere den nedre luftvej, urinvej og sår hos immunsupprimerede patienter.
Kolonitællinger af P. aeruginosa kan også udføres i mikrobielle grænsetest.
sået
Cetrimid-agar kan bruges som en primær kultur. Pladen inokuleres på en af dens kanter, og derfra distribueres den ved udmattelse til resten af pladen. Flydende prøver kan overflades med en drigalski-spatel.
Pladerne inkuberes aerobt ved 37 ° C i 24 timers inkubation.
Begrænsninger
-En lille procentdel af Pseudomonas aeruginosas-stammer producerer ikke pyocyanin, så et falsk negativt kan fortolkes.
-Nogle Pseudomonas-arter af klinisk betydning hæmmes i dette medium.
- Uanset hvilke karakteristika, der er beskrevet for Pseudomonas aeruginosa, skal de bekræftes med yderligere identifikationstest. En test, som ikke bør gå glip af, er oxidasetesten, den skal give positiv.
-Nogle Enterobacteriaceae kan vokse i dette medium og udvikle et gult pigment, men det adskiller sig fra Pseudomonas aeruginosa, idet når pladen udsættes for ultraviolet lys, er der ingen fluorescens.
- Serratia marcescens formår at udvikle og fremstille et lyserødt pigment.
-Hvis pladerne podet med cetrimid-agar udsættes i et stykke tid ved stuetemperatur, kan P. aeruginosa-stammerne miste den fluorescens, der observeres under ultraviolet lys, men egenskaben genvindes, hvis de igen inkuberes ved 37 ° C.
QA
For at analysere den gode præstation af cetrimid-agar kan kontrolstammer bruges, såsom: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.
De forventede resultater er:
- God vækst for P. aeruginosa med blågrønt pigment og positivt fluorescein.
- S. maltophilia og S. aureus vil være delvist til fuldstændigt inhiberet.
- Escherichia coli forventes at blive fuldstændigt hæmmet.
Referencer
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Fænotypisk og serologisk karakterisering af kliniske isolater af Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Conda Pronadisa Laboratories. Cetrimid-agarbase. 2014. Tilgængelig på: condalab.com
- Britannia Laboratories. Cetrimid-agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
- BD Laboratories. BD Pseudosel-agar (Cetrimide-agar). 2013. Tilgængelig på: bd.com
- Francisco Soria Melguizo Laboratory, CA Cetrimide agar. 2009. Tilgængelig på: