CHOKOLADEAGAR: BASIS, ANVENDELSER OG KLARGØRING - BIOLOGI - 2025

Den chokoladeagar er et fast dyrkningsmedium, beriget, ikke - selektive og ikke - forskellen. Det bruges hovedsageligt til isolering af mikroorganismer, der kræver fra ernæringsmæssigt synspunkt, selvom enhver type bakterier kan vokse i den.

Af denne grund øges dens anvendelighed især ved podning af prøver, der normalt er sterile, såsom CSF og ledvæske. Skønt det også er inkluderet i det valgte middel til såning af polymikrobielle prøver, men i disse tilfælde er tilføjelse af antibiotika, der inhiberer den samtidige flora, nødvendig.

Chokoladeagar med bakterievækst

Dette medium har en karakteristisk brun farve, der meget ligner chokolade, og dets navn. Præparatet svarer meget til blodagar, kun i dette tilfælde skal blodet opvarmes for at de røde blodlegemer kan nedbrydes.

Dens præparat er som blodagar meget delikat, da det let er forurenet. Af denne grund foretrækker mange laboratorier at erhverve dette medium, der allerede er forberedt af kommercielle virksomheder, der garanterer dets kvalitet.

Basis

Dette medium består af en næringsrig agarbase og opvarmet blod. Hemolyse af røde blodlegemer tilvejebringer faktor X (hemin) og faktor V (NAD), som er nødvendig for væksten af ​​nogle mikroorganismer, såsom slægten Haemophilus. Det er også meget nyttigt til isolering af Neisserias sp.

Ligesom blodagar kan forskellige medier bruges som basisagar afhængigt af behovet. Blandt de anvendte medier er hjerneinfusion og trypticase sojaagar, selvom den mest anbefalede er Columbia agar, Müeller Hinton, GC agar og Thayer Martin agar.

Nogle varianter af chokoladeagar inkluderer et kommercielt tilgængeligt forstærket supplement kaldet Isovitalex eller Polivitex.

Disse kosttilskud indeholder vitamin B ₁₂, L-glutamin, adenin, guaninhydrochlorid, p-aminobenzoesyre, nicotinamid-adenindinucleotid (NAD), thiaminpyrophosphat, jernnitrat, thiaminhydrochlorid, cysteinhydrochlorid, L-cystin og glukose.

Det er vigtigt at bemærke, at chokoladeagar er mere beriget end blodagar, men det tillader ikke observation af hæmolysemønstre.

Applikationer

Kilde: pixnio.com. Forfatter:

Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, ph.d., Audra Marsh, USCDCP

Chokoladeagar tilberedt med Columbia agar

Dette medium indeholder pancreasfordøjelse af kasein og hjerte, peptisk fordøjelse af kød, natriumchlorid, agar, gærekstrakt og majsstivelse. Det er også rig på vitaminer, mineraler og essentielle aminosyrer.

Denne opvarmede blodbase er ideel til isolering af bakterier i slægten Neisseria. På den anden side, hvis et supplement til Brucella tilføjes yderligere til mediet, kan den nævnte mikroorganisme isoleres. Resultaterne forbedres ved hjælp af hesteblod.

Chokoladeagar tilberedt med GC-baseagar (til gonococci)

Dette medium indeholder peptoner, majsstivelse, monobasiske og dibasiske buffere, natriumchlorid og agar.

De fleste kommercielt forberedte chokoladeagarpræsentationer leveres med denne base og indeholder ikke opvarmet blod, men snarere en syntetisk blanding af hemin og et kemisk supplement af vækstfaktorer, vitaminer, mineraler, aminosyrer, faktor V og glukose.

Chokoladeagar tilberedt med Müeller Hinton-agar

Det bruges til at teste den antimikrobielle følsomhed for hurtige mikroorganismer, såsom Streptococcus pneumoniae ved anvendelse af 5% opvarmet fåreblod.

Det bruges også til den primære isolering af Neisserias og Haemophilus, men i det særlige tilfælde af isolering af Haemophilus foretrækkes brugen af ​​hesteblod, da det er en rig kilde til faktor X og V.

På den anden side, hvis prøven, der skal sås kommer fra et ikke-sterilt område, anbefales tilsætning af antibiotika for at hæmme den normale flora i området.

Eksempel på åndedrætsprøver, hvor der er mistanke om tilstedeværelse af bakterier i slægten Haemophilus, bacitracin anvendes til at hæmme væksten af ​​Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus og saprophytic Neisserias.

I tilfælde af genital chancre-prøver, hvor Haemophilus ducreyi mistænkes, er en chokolade-agar tilberedt som følger blevet brugt med succes: Müeller - Hinton-agar med 5% chokoladet hesteblod, 1% Isovitalex berigelse og 3 ug / ml vancomycin.

Chokoladeagar tilberedt med Thayer Martin agar

Dette medium er specielt til isolering af Neisseria gonorrhoeae. Det skal indeholde antibiotika for at hæmme den ledsagende flora. Lammets blod bruges.

Forberedelse

Du skal se indikationerne for forberedelse af basisagar, der skal bruges. De findes på bagsiden af ​​beholderen med det dehydrerede medium. De beskriver generelt, hvor meget du skal veje for at forberede en liter kulturmedium.

Den nøjagtige mængde, der kræves, kan tilberedes i laboratoriet, den kan være mere eller mindre end en liter.

Beregninger

En regel på tre bruges til at beregne, hvor meget man skal veje for at forberede det ønskede volumen. Eksempel:

Hvis det for 1 liter er nødvendigt at veje 40 gr, og laboratoriet kræver 800 ml, siges det:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

Formlen er som følger:

X = 32 g (mængde, der skal vejes i 800 ml).

Vej og opløs

Den nødvendige mængde vejes og anbringes i en kolbe med vandet.

Varm op over moderat varme og bland forsigtigt med roterende bevægelser, indtil det dehydratiserede medium er helt opløst, så det koges i 1 minut.

Sterilisere

Kolben anbringes i autoklaven for at sterilisere mediet ved 121 ° C i 20 minutter.

Blodaggregat

Når man forlader autoklaven, tillades det at stå, indtil mediet på temperaturen er ca. mellem 56 til 70 ° C for at placere blodet og blande, indtil mediet bliver brunt.

Hvis du tilføjer kosttilskud, er det tid til at gøre det. Derefter blandes og serveres 20 ml til hver steril petriskål.

Hele proceduren skal udføres i en laminar flowhætte eller omkring Bunsen-brænderen.

Lad stå, indtil de størkner og opbevares omvendt i køleskabet.

En anden måde at forberede chokoladeagar på uden at bruge blod

Basemediet fremstilles som beskrevet ovenfor, det kommercielt opnåede dehydratiserede hæmoglobin opløses og steriliseres i autoklaven.

Begge opløsninger får lov til at afkøle til 50 ° C, sammenføjes, og tilsætningen tilsættes. Bland under aseptiske forhold og server derefter i sterile petriskåle.

QA

Det er vigtigt, at blodet anbringes ved den angivne temperatur, da det er det ideelle til at lysere de røde blodlegemer og samtidig opretholde faktor V, der er temperaturfølsom.

Der må ikke være nogen bobler på agarens overflade. Fra hver batch på 100 plader skal en eller to plader inkuberes i ovnen ved 37 ° C i 24 timer for at verificere deres sterilitet.

For at opnå de bedste resultater skal chokolade-agar bruges kort efter tilberedning.

Der skal opbevares kontrolbakteriestammer i laboratoriet for at evaluere effektiviteten af ​​det friske medium til vækst af de vigtigste, hurtige mikroorganismer af klinisk betydning.

Referencer

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. udgave. UCA Publications Service.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Argentina. Redaktionel Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, Redaktion Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Mulighed for at anvende GC-Biocen Agar-basiskulturmedium i mikrobiologilaboratoriet. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Fås på: scielo.sld.
5. Wikipedia-bidragydere. Chokoladeagar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 17 december 2018, 19:54 UTC. Tilgængelig på: en.wikipedia.org.