KLAMRET AGAR: BEGRUNDELSE, ANVENDELSER OG FORBEREDELSE - BIOLOGI - 2025

Den CLED agar (Cystin-lactose-Elektrolyt-Deficient) er et fast dyrkningsmedium differentiale, anvendes til diagnose af urinvejsinfektioner. Sammensætningen af ​​kulturmediet er designet til god vækst af urinpatogener og er ideel til kvantificering af kolonidannende enheder (CFU).

CLED-kulturmediet er ikke-selektivt, da Gram-negative og Gram-positive mikroorganismer kan vokse i det. Men dette er ikke et problem, da de fleste UTI'er kun er forårsaget af en type mikroorganisme.

CLED agar

I tilfælde af polymikrobielle infektioner kan der opnås 2 eller 3 forskellige bakterier, men det er meget sjældent, og for det meste er det kontaminerede prøver.

Blandt de Gram-negative bakterier, der kan vokse i dette medium, er bacillerne, der hører til familien Enterobacteriaceae og andre enteriske baciller, hvor uropatogenerne hyppigt isoleres i urinprøver er følgende: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, blandt andre.

Ligeledes blandt de Gram-positive bakterier, der kan vokse i dette medium, er Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp og endda gær, såsom Candida albicans-komplekset.

På grund af mediets kemiske sammensætning tillader det imidlertid ikke vækst af nogle krævende genitourinære patogener, såsom Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, blandt andre.

CLED Agar Rationale

CLED-kulturmediet har kødekstrakt, pancreashydrolysat af kasein og hydrolysat af gelatine som en energikilde. De leverer næringsstoffer til udvikling af krævende bakterier.

Det indeholder også cystin, en aminosyre, der tillader vækst af coliforms, der kan skelnes ved deres lille størrelse.

Ligeledes indeholder den lactose som et gæret kulhydrat, hvorfor dette medium er forskelligt; at være i stand til at skelne de fermenterende bakterier fra ikke-lactosegæringen.

Fermenterende bakterier får mediet til at ændre sig ved produktion af syrer og udvikle gule kolonier, mens ikke-fermenterende bakterier ikke skaber ændringer i mediet, derfor tager de farven på den oprindelige agar, grøn.

Fermenteringsreaktionen afsløres takket være tilstedeværelsen af ​​pH-indikatoren, der i dette medium er bromothymolblå.

På den anden side inhiberer den lave elektrolytkoncentration af mediet den typiske invasive vækst af slægten Proteus, kaldet den sværmende virkning. Dette skaber en fordel i forhold til andre medier, da det tillader tælling af CFU'er, inklusive hvis Proteus-slægten er til stede.

Imidlertid hæmmer den lave koncentration af elektrolytter væksten af ​​nogle arter af slægten Shigella, hvilket er en ulempe sammenlignet med andre medier.

Begrundelse for CLED-agar (Bevis)

Der er en variant eller modifikation af dette medium foretaget af Bevis, der inkorporerede sur fuchsin (Andrades indikator) i den originale sammensætning. Det fungerer sammen med bromothymolblå for at skelne gæring fra ikke-fermenterende bakterier.

Forskellen mellem konventionelt og modificeret medium er den farve, som kolonierne tager på. I tilfælde af laktosegærende bakterier bliver kolonierne rødlige orange med en lyserød eller rød glorie, mens de ikke-fermenterende bakterier er blågrå.

Applikationer

CLED-agar bruges udelukkende til podning af urinprøver. Brugen af ​​dette medium er især hyppigt i europæiske laboratorier, mens det i Amerika er mindre brugt.

Prøveindsamling skal opfylde visse parametre for at opnå pålidelige resultater, herunder:

• Tag ikke antibiotika før prøveudtagning.
• Tag fortrinsvis den første urin om morgenen, da den er mere koncentreret, når det ikke er muligt at tage prøven med invasive metoder.
• Vask kønsorganerne godt, før du tager prøven.
• Kasser den første vandladningsstrøm, og anbring derefter beholderen.
• Opsaml 25 til 30 ml urin i en velmærket steril beholder.
• Tag straks til laboratoriet omgivet af is.
• Det skal behandles inden for 2 timer efter udstedelse eller nedkøles ved 4 ° C i højst 24 timer.

Såning af urinprøver

Urinprøven skal fortyndes 1:50.

Til fortynding anbringes 0,5 ml patienturin og fortyndes med 24,5 ml steril fysiologisk opløsning.

Mål 0,1 ml af den fortyndede urin og overfladespredning med en drigalski-spatel på CLED-mediet. Dette er den bedste podemetode til tælling af kolonier. Af denne grund bruges det i urinprøver, da resultaterne skal udtrykkes i CFU / ml.

For at kvantificere de opnåede kolonier skal du gøre som følger: tæl kolonierne på pladen og gang med 10 og derefter med 50. Dette giver dig mængden af ​​CFU / ml urin.

Tolkning

Tæller over 100.000 CFU / ml - Angiver urininfektion

Tæller under 1000 CFU / ml- Ingen infektion

Tæller mellem 1000-10.000 CFU / ml - tvivlsom, mulig kontaminering, gentag prøveudtagning.

ID

Kolonierne, der dyrkes på CLED-agar, skal have en Gram, og afhængigt af mikroorganismens morphotintorale karakteristika, udføres en vis subkultur.

For eksempel, hvis det er en Gram-negativ bacillus, vil den blive sået på en MacConkey-agar, hvor fermenteringen eller ikke af lactose er bekræftet. Derudover er der knyttet en næringsagar til at udføre oxidasetesten.

I tilfælde af, at Gram afslører Gram-positive cocci, kan den subkultureres på salt mannitol-agar og på næringsstof-agar. I sidstnævnte udføres katalasetesten. Endelig, hvis der observeres gær, bliver det sået på Sabouraud-agar.

Mange laboratorier undgår brug af CLED-medium og foretrækker kun at bruge blodagar, MacConkey og næringsstofagar frem for urinprøver.

Forberedelse

I en kolbe med en liter destilleret vand opløses 36,2 g CLED agarpulver. Efter 5 minutters henstand opvarmes den resuspenderede agar, blandes konstant til kogning i 1 minut.

Derefter steriliseres ved 121 ° C i 15 minutter i autoklaven. Ved afslutningen af ​​tiden fjernes den fra autoklaven og lades afkøle til en temperatur på 45 ° C. Derefter serveres 15-20 ml i hver steril petriskål.

Tallerkenes serveringsprocedure skal udføres i en laminar flowhætte eller foran Bunsen-brænderen for at undgå forurening.

De serverede plader lader stivne, arrangeres i et omvendt rack og opbevares i køleskab (2-8 ° C) indtil brug.

Det færdige medias endelige pH-værdi skal være 7,3 ± 0,2.

Referencer

1. Anbefalinger til mikrobiologisk diagnose af urininfektion. chil. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Fås på: scielo.org.
2. Panchi J. Identifikation af det mikrobielle middel, der forårsager urinvejsinfektioner hos patienter, der gennemgår blærekateterisering. 2016. Grundlæggende arbejde for at kvalificere sig til bachelorgrad i klinisk laboratorium. Det tekniske universitet i Ambato. Ecuador.
3. Britannia Laboratories. CLED medium. Fås på: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories. Brugsanvisning, CLED Agar. 2013 Tilgængelig på: es.renylab.ind.br.
5. Kultiverede laboratorier. Grundlæggende manual for mikrobiologi. Fås på: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. CLED-agarindstillingen i urinkulturrutine. En fremtidig og komparativ evaluering. Diagnose Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. udgave. UCA Publications Service.