CZAPEK AGAR: BEGRUNDELSE, KLARGØRING, ANVENDELSE OG BEGRÆNSNINGER - BIOLOGI - 2025

Den Czapek (CZA) er en selektiv fast medium specielt designet til dyrkning blødrådsakterier og svampe. Det blev skabt af botanikeren Friedrich Johann Franz Czapek, af polsk oprindelse, og den amerikanske kemiker Arthur Wayland Dox; af denne grund er denne agar også kendt som Czapek-Dox-medium.

Det originale medium var flydende, men agar blev senere tilsat for at gøre det til et fast medium. Czapek-medium består af natriumnitrat, bipotassiumphosphat, magnesiumsulfat, kaliumchlorid, jernholdigt sulfat, saccharose, agar og destilleret vand.

Czapek agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Kilde: A. Medmyco / B. Foto: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

PH-værdien af ​​Czapek agar er 7,3, men der er en variant, hvortil der tilsættes 10% mælkesyre, hvis pH-værdi forbliver på 3,5. Dette syremedium bruges til dyrkning af acidofile mikroorganismer.

På den anden side modificerede nogle kommercielle huse sammensætningen af ​​Czapek-agar ved at ændre magnesiumsulfat og bipotassiumphosphat med glycerophosphat; denne modifikation forhindrer, at magnesiumphosphatpræcipitatet observeret med den konventionelle formel dannes. Ligeledes er der en anden variant, til hvilken gærekstrakt føjes.

Endelig anbefales Czapek agar af American Public Health Association APHA til undersøgelse af Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp og Penicillium sp. Disse arter er kendetegnet ved at være miljømikroorganismer og opportunistiske patogener.

Basis

Dette medium indeholder saccharose; dette kulhydrat tjener som kulstofkilden, mens natriumnitrat er nitrogenkilden, men i modsætning til andre medier er det leverede nitrogen uorganisk.

Af denne grund betragtes Czapek-mediet som selektivt, da kun mikroorganismer, der er i stand til at bruge uorganiske forbindelser som den eneste nitrogenkilde, kan vokse.

Som et regulerende stof til mediets osmolaritet er bipotassiumphosphat. For deres del giver magnesiumsulfat, kaliumchlorid og jernsulfat essentielle mineraler til vækst af saprofytiske (frit levende) mikroorganismer. Denne formel danner et bundfald af magnesiumphosphat.

Endelig er agar-agar den forbindelse, der tilvejebringer den faste konsistens til mediet, og vand er opløsningsmidlet for alle komponenter.

Med den modificerede Czapek-agarformel er der ingen dannelse af bundfald, og det forbedrer vækstydelsen for nogle svampe.

Den ekstreme surhedsgrad af Acid Czapek Agar gør det til et mere selektivt medium, hvilket kun tillader vækst af surtørrede mikroorganismer, der er i stand til at anvende uorganisk nitrogen. I mellemtiden forbedrer Czapek-gær agar ydelsen for visse svampe.

Forberedelse

Medium Czapek-Dox

Vej 49 g af det dehydrerede kulturmedium og opløst i destilleret vand. Tilfør varme indtil kogning. Ryst blandingen ofte, indtil den er helt opløst.

-Czapek Agar-kiler

Fordel den opløste blanding i rør og autoklaver ved 121 ° C i 15 minutter. Når man fjerner fra autoklaven, homogeniseres, før rørene lægges ned og lad stivne.

-Czapek agarplader

Autoklaver den opløste blanding ved 121 ° C i 15 minutter og lad den afkøle til 50 ° C, homogeniseres og hæld 20 ml i sterile petriskåle. Lad størkne, vend om og opbevar i køleskabet, indtil brug.

PH skal forblive på 7,3 ± 0,2. Farven på det dehydratiserede medium er hvidt, og det fremstillede medium er lys gul, let uklar på grund af tilstedeværelsen af ​​et flokkulerende bundfald.

Czapek-medium ved sur pH

Forbered som allerede beskrevet, men tilsæt 10 ml steril 10% mælkesyre til hver liter fremstillet medium. Det modificerede Czapek-medium skal være ved pH 3,5 ± 0,2.

Ændret Czapek Medium

Afvej 45,4 g af det dehydrerede medium og opløst i 1 liter vand. Resten af ​​præparatet er det samme som beskrevet ovenfor. Farven på det dehydrerede medium er hvidt, og det tilberedte medium er hvidligt. Mediets endelige pH er 6,8 ± 0,2.

Czapek-gærmedium

Også kaldet Czapek gær ekstrakt agar (CYA). Det indeholder elementerne i den klassiske Czapek-agar plus gærekstrakt.

Brug

Czapek-mediet bruges til at søge efter saprofytiske mikroorganismer i blandt andet prøver af jord, grøntsager, korn, luft, insekter.

Czapek-agar ved sur pH-værdi bruges til vækst af acidofile mikroorganismer, medens modificeret Czapek-agar er især nyttig til dannelse af chlamydosporer i arter i Candida albicans-komplekset.

Endelig er Czapek-gæragar meget nyttig til isolering af Aspergillus og Penicillium.

sået

-Czapek agar

For at søge efter Actinomycetes i jorden skal du fortsætte som følger: prøven behandles med phenoliseret vand i 30 minutter, og derefter sås 1 ml af suspensionen på Czapek agar. Inkuber ved 28 ° C i 5 til 7 dage.

For vegetabilske, korn- og insektprøver placeres de direkte på agaren. Du kan også lave fortyndinger og frø 0,1 ml på agaroverfladen.

-Modificeret Czapek-agar

Til såning bruges en lige sløjfe eller nål, den imprægneres med vatpinden, og agaren inokuleres ved at lave en punktering, indtil den berører pladen. Inkuber i 24 timer ved 28 ° C og undersøg under et mikroskop over og under pladen for at se, om der er dannet chlamydosporer.

Inkubationstemperatur og -tid

Inkubationstemperaturen og tiden varierer afhængigt af typen af ​​mikroorganisme, der skal isoleres. Plader inkuberes generelt i en til to uger i et temperaturområde fra 20 til 25 ° C.

Der er dog specifikke betingelser for nogle stammer. For eksempel vokser de fleste arter af slægten Aspergillus optimalt ved 30 ° C; A. A. fumigatus vokser dog ved 50 ° C.

Med hensyn til inkubationstiden er en eller to uger normal, men Candida albicans kan udvikle sig i løbet af 24 til 48 timer ved 25 ° C.

Egenskaber ved nogle kolonier på dette medium

-Penicillium atrovenetum

Det udvikles i 12 dages inkubation ved 27 ° C. Deres kolonier er små (25 mm).

Kolonierne har et fløjlsagt udseende med en defineret hvid kant og en blågrøn farvetone i midten, der bliver grå, når den ældes. Koloniens bagside er orange, hvilket gør midten til samme farve på grund af pigmentproduktionen.

-Aspergillus niger

Det udvikler sig med hvidt til gult mycelium og sorte sporer.

-Candida albicans

Cremet lys beige kolonier udvikler sig. I modificeret Czapek-agar danner det chlamydosporer.

-Aspergillus parasiticus

Et mørkegrønt mycel udvikles på 7 dage ved 25 ° C.

QA

For at evaluere kulturmediets kvalitet kan certificerede kontrolstammer plantes, såsom: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger udvikler hvidt til gult mycel og sorte sporer på ca. 5 dage, mens Candida albicans vil have en tilfredsstillende vækst i 24 timers inkubation ved 25 ° C; kolonier er cremefarvet.

Begrænsninger

Nogle undersøgelser har afsløret, at til nyttiggørelse af Actinomycetes, agar med det bedste udbytte er kartoffeldextrose-agar, hvor Czapek-agar er på andenpladsen, men til genvinding af Aspergillus og Penicillium er Czapek-agar den, der giver den højeste genvindingsgrad.

Referencer

1. Dávila M, et al. Antagonistiske actinomyceter mod fytopatogene svampe af landbrugsmæssig betydning. Præsten Mex. Videnskab. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Fås på: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, hvede Á. Isolering af Aspergillus niger-stammer, der producerer ochratoxin A, i opbevaret grøn kaffe (Coffea arabica). Præsten Mex. Mic. 2010; 32: 63-68. Tilgængelig på.scielo.org.
3. Wikipedia-bidragydere. Czapek medium. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 13. januar 2019, 20:30 UTC. Tilgængelig på: en.wikipedia.org
4. Conda Pronadisa Laboratories. Ændret Czapek-Dox Agar. Fås på: condalab.com
5. Kultur Media Microkit. Czapek-Dox Agar. Diosponible på: Medioscultivo.com