Den agar Endo eller Endo medium er et fast medium, differentiale og med en vis grad af selektivitet kultur. Den oprindelige formel blev oprettet af Endo i 1904 for at differentiere laktosegæring fra ikke-fermenterende bakterier. Oprindeligt blev det designet til isolering af Salmonella typhi, men senere vendte formålet med mediet sig mod søgen efter coliforms.
Princippet om Endo Agar er fortsat, men dens formulering har gennemgået utallige ændringer gennem årene. I øjeblikket er mediet sammensat af peptisk fordøjelse af dyrevæv, lactose, dipotassiumhydrogenphosphat, natriumsulfit, basisk fuchsin og agar.
A: Virgin Endo Agar B: Seededo Endo Agar, i midten af agaren kan du bemærke den metalliske glans fra en E. coli-stamme. Kilde: A: Strolch1983 / B: LenkaM
Den vigtigste anvendelse af mediet er blevet knyttet til isolering og differentiering af Gram-negative baciller, der hører til Enterobacteriaceae-familien og til andre nære familier.
I lang tid blev det brugt til påvisning af coliforms i vand, mejeriprodukter og fødevareprøver, men i dag er brugen af dette medium fortrængt af andre med lignende funktioner. Nogle mikrobiologiske laboratorier bruger imidlertid denne agar til isolering af Enterobacteriaceae fra prøver af klinisk oprindelse.
Basis
Endo agar indeholder peptoner, der tjener som en kilde til aminosyrer, nitrogen, kulstof og energi, der er nødvendigt for vækst af krævende mikroorganismer.
På den anden side tilvejebringes den lidt selektive karakter af agaren ved tilsætning af natriumsulfit og basisk fuchsin; begge komponenter hæmmer delvist eller totalt væksten af de fleste Gram-positive bakterier.
Den differentielle karakter gives ved tilstedeværelsen af det fermenterbare kulhydrat, som i dette tilfælde er lactose og basisk fuchsin, der også fungerer som en pH-indikator.
Gram-negative bakterier, der vokser på denne agar og er i stand til at fermentere laktose, vil danne stærke lyserøde kolonier; er patognomonisk for Escherichia coli dannelsen af mørkerøde kolonier med en iriserende grønlig metallisk glans. Dette skyldes den høje produktion af syrer fra kulhydratfermentering.
Det skal bemærkes, at mediet omkring kolonierne også får en stærk lyserød farve. Mens ikke-laktosegærende Gram-negative stænger danner lyserosa kolonier, der ligner mellemstore eller farveløse.
Dipotassiumhydrogenphosphat afbalancerer mediets pH-værdi, og agar er den komponent, der giver den faste konsistens.
Forberedelse
Endo agar
Vej 41,5 g af det dehydrerede medium og opløst i 1 liter destilleret vand. Opvarm blandingen under hyppig omrøring, indtil der er fuldstændig opløsning af mediet. Steriliser i en autoklav ved 121 ° C ved 15 lb tryk i 15 minutter.
Når du fjerner det fra autoklaven, lad det afkøle til en temperatur på ca. 45-50 ° C, ryst blandingen til homogenisering inden servering. Hæld 20 ml i sterile petriskåle.
Lad pladerne stivne, vendes og opbevares i en plaquero eller indpakning med mørkt papir, før de opbevares i køleskabet. Det er meget vigtigt at beskytte det forberedte medium mod direkte lys. En bedste praksis er at forberede det nøjagtige beløb, du har brug for.
Hvis de opbevares i køleskab, skal pladerne få lov til at varme op inden brug.
PH i mediet skal være mellem 7,2 og 7,6, og farven på det fremstillede medium er lyserosa.
M-Endo agar-variant
Der er en anden version af Endo agar (m-Endo), der følger formlen fra McCarthy, Delaney og Grasso, som indeholder flere forbindelser og varierer i form af forberedelse.
Denne variant indeholder: lactose, tryptose, enzymatisk fordøjelse af kasein, enzymatisk fordøjelse af animalsk væv, natriumchlorid, dibasisk kaliumfosfat, natriumsulfit, gærekstrakt, monobasisk kaliumphosphat, basisk fuchsin, natriumdeoxycholat, laurylsulfat natrium og agar.
I dette tilfælde vejes 51 g af det dehydrerede medium og suspenderes i 1 liter destilleret vand indeholdende 20 ml ethanol.
Opvarm let under omrøring, indtil mediet opløses helt. Det bør ikke overophedes og bør ikke autoklaveres. Når blandingen er homogen, serveres den i sterile petriskåle og lad dem stivne.
Brug
I nogle lande bruges det stadig til at tælle totale og fækale coliformer i fødevare- og vandprøver, især tilstedeværelsen af Escherichia coli som den vigtigste indikator på fækal kontaminering.
M-Endo agar anbefales af American Public Health Association (APHA) til overvågning og kontrol af desinfektions- og spildevandsrensningsprogrammer samt til evaluering af drikkevandskvaliteten.
Den mest anvendte metode er membranfiltrering efter berigelse af prøven med Laurylsulfat-bouillon i 2 til 4 timer.
Det kan også bruges som erstatning for EMB-agar i den mikrobiologiske analyse af fødevarer og vand ved den mest sandsynlige taleteknik (MPN), specifikt i den komplette bekræftelsesfase til bekræftelse af tilstedeværelsen af E. coli fra uklar EC-bouillon.
QA
Kendte eller certificerede kontrolstammer sås for at vurdere kvaliteten af den forberedte Endo agar-batch.
Blandt de stammer, der kan bruges til dette formål, er: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteo mirC15300.
Stammerne podes ved udmattelse og inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i aerobiose.
De forventede resultater er:
- For Escherichia coli: stærke røde kolonier, med metallisk glans.
- For E. cloacae og K. pneumoniae skal kolonierne være lyserød mucoid.
- I tilfælde af S. typhimurium, S. flexneri og P. mirabilis er kolonierne normalt lyserøde eller farveløse.
- Endelig forventes E. faecalis at blive delvist hæmmet, derfor skal dens vækst være dårlig med meget små, stærke lyserøde kolonier.
Begrænsninger
-Endo-medium har lav selektiv kraft, derfor er det muligt, at nogle Gram-positive mikroorganismer som Staphylococcus, Enterococcus og endog gær kan vokse.
-Andre baciller, der ikke hører til Enterobacteriaceae-familien, kan udvikle sig i dette medium, såsom Pseudomonas sp og Aeromonas sp. Egenskaberne ved disse stammer er farveløse uregelmæssige kolonier.
-Dette forberedte medium er meget følsom over for lys, og derfor forværrer langvarig eksponering for det indikatorsystemet og ødelægger mediet irreversibelt.
-Komponentene i mediet betragtes som kræftfremkaldende, derfor bør direkte kontakt undgås.
-Dehydratiseret medium er meget hygroskopisk og skal opbevares i sin originale beholder ved stuetemperatur, tæt lukket og i et tørt miljø.
Referencer
- BD Laboratories. Endo Agar. 2013. Tilgængelig på: bd.com
- Neogen Laboratories. M Endo Agar. Fås på: foodsafety.neogen.com
- Endo Agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 7. september 2017, 08:27 UTC. 28. februar 2019, 22:55. Fås på: en.wikipedia.
- MercK Laboratory. Endo agar. 2019. Tilgængelig på: merckmillipore.com
- Tekniske arklaboratorier. M –Endo Agar LES. 2015. Tilgængelig på: liofilchem.net