MAISMELAGAR: BAGGRUND, KLARGØRING OG ANVENDELSE - BIOLOGI - 2025

Den majsmelagar er et fast dyrkningsmedium, lav næringsværdi effekt, anvendelige til subkultivering af visse svampe og for demonstration af chlamydosporer i stammer af Candida albicans kompleks. På engelsk er det kendt som Corn Meal Agar.

Det konventionelle kornmel-medium har en meget enkel sammensætning, det indeholder kornmel, agar-agar og vand. På grund af dets lave ernæringsniveau er det ideelt til brug i vedligeholdelse af svampestammer i moderate perioder, især sorte svampe.

A. Grafisk gengivelse af Candida albicans-komplekset på majs-agar. B. Chlamydosporer af Candida albicans-komplekset set under mikroskopet, dannet på majsmel-agar. Kilde: A. GrahamColm / B. Af: CDC / Dr. William Kaplan, høflighed: Public Health Image Library.

Sporulering af Candida albicans-komplekset foretrækkes i dette medium, hvis 1% af Tween 80 tilsættes under fremstillingen af ​​agaren. Dannelsen af ​​chlamydosporer er karakteristisk for denne art og praktisk talt den eneste, der påvirker mennesker.

Der er andre arter, der danner chlamydosporer, men det er usandsynligt, at de påvirker mennesker, såsom Candida australis, der er til stede i pingvinudtrækning eller C. clausenii, som er en saprofyt, der sjældent forekommer. Ligeledes kunne undtagelsesvis arterne C. stellatoidea og C. Tropisis danne dem.

På den anden side favoriserer tilsætning af glukose til cornmeal-mediet dannelsen af ​​pigmenter i Trichophytom rubrum-stammer.

Det er vigtigt at fremhæve, at der er svampe, der ikke danner hyfer eller pseudohyphae i majsmel-agar, såsom Cryptococcus neoformans, der adskiller sig fra andre slægter.

Cornmeal agar kan fremstilles hjemme i laboratoriet, eller kommercielle medier kan også bruges.

Basis

Cornmeal er underlaget, agar er størkningsmidlet, og vand er opløsningsmidlet.

Cornmeal agar kan suppleres med tween 80 (sorbitan monooleat eller polysorbate polyester 80). Denne forbindelse reducerer mediets overfladespænding på grund af dets emulgeringsevne.

Det skaber også et fjendtligt miljø, der hæmmer en overdrevet cellemultiplikation og stimulerer væksten af ​​hyfer, hvilket også favoriserer produktionen af ​​chlamydosporer; sidstnævnte betragtede strukturer af modstand. Denne struktur hjælper med at identificere Candida albicans-arter.

På sin side øger glukose i dette medium pigmentdannelsesevnen hos nogle svampe.

Det skal bemærkes, at majsmelmediet med glukose ikke er nyttigt til demonstration af chlamydosporer i Candida albicans-komplekset.

Forberedelse

Hjemmelavet cornmeal agar tilberedning

Vej 47 g gult majs og opløs i 500 ml destilleret vand. Opvarm til 60 ° C, mens der omrøres præparatet i en periode på cirka 1 time. Filtrer derefter gennem et stykke gasbind og bomuld, eventuelt kan det filtreres igen ved at føre præparatet gennem et Whatman nr. 2-filterpapir.

Fyld op til 1000 ml med destilleret vand. Tilsæt 17 g agar-agar, opvarm, indtil den er opløst. Autoklave i 15 minutter ved 121 ºC.

Serveres i sterile petriskåle. Opbevares i køleskab.

Farven på det forberedte medium er hvidagtig med et klumpet udseende.

Hvis du vil tilberede majsmel med glukose til det ovenfor beskrevne præparat, skal du tilføje 10 g glukose.

Kommerciel majsagar

Vej 17 g af det dehydratiserede medium og opløst i 1 liter destilleret vand. Blandingen kan opvarmes, omrystes forsigtigt for at opløses fuldstændigt. Steriliser i en autoklav ved 121 ºC, ved 15 lb, i 15 minutter.

Hæld i sterile petriskåle. Lad stivne. Vend og opbevar i køleskabet, indtil brug. Temperatør inden brug.

PH skal være 6,0 ± 0,2 ved 25 ºC.

Maismelagar med Tween 80

For at overholde ISO 18416 skal cornmeal-agar fremstilles som følger:

Vej 65 gram pr. Liter, og tilsæt 10 ml Tween 80. Opvarm og kog i nogle få minutter, indtil den er opløst, og pas på ikke at overophedes for meget. Steriliser ved 121 ° C i 15 minutter.

Majsagar med glukose

For at forbedre den kromogene kraft af Trichophyton rubrum-kolonier og differentiere dem fra T. mentagrophytes kan 0,2% glucose sættes til den originale formel. Du behøver ikke at have Tween 80, da glukose hæmmer dannelsen af ​​chlamydosporer.

Brug

Hovedsageligt er brugen af ​​majsmel-agar beregnet til undersøgelse af Candida-stammer, hvilket hjælper med deres identifikation gennem den karakteristiske observation af chlamydosporer i albicans-arten. Det vil sige, brugen af ​​denne agar tjener som en hjælpemetode til identifikation af disse gærer.

Både saprofytiske og patogene arter kan udvikle sig på denne agar, men hver danner karakteristiske mycelstrukturer. For eksempel producerer arter af slægten Torulopsis ikke mycelium og reproduceres kun ved blastoconidia.

Ligeledes producerer Trichosporon- og Geotrichum-arter arthroconidia på majsmel-agar, og det er undertiden vanskeligt at skelne mellem det ene og det andet.

Arthroconidia af slægten Geotrichum producerer en forlængelse af hyferne der ligner en hockeystok.

Produktionen af ​​pigmenter ved anvendelse af majsmelagar suppleret med glukose er nyttig til identificering af Trichophytom rubrum.

sået

Mistænkelige Candida-kolonier, der er opnået i det primære dyrkningsmedium - Sabouraud-agar - fra kliniske prøver, kosmetik, jordbund, er blandt andet dyrket på majs-agar. Mediet podes og inkuberes ved 22 ° C i 24 til 48 timer. Inkubationstiden kan forlænges om nødvendigt.

Chlamydospore demonstration

Til dette formål skal maismelagaren med Tween 80 inokuleres ved hjælp af Dalmau-teknikken. Denne metode består i at tage en del af den mistænkte koloni med platinhåndtaget og foretage tre parallelle snit i midten og holde grebet på 45º. Udskæringerne skal adskilles med en afstand på 1 cm fra hinanden.

Derefter anbringes et tidligere flammet dækobjekt på de striber, der er sået, på en sådan måde, at halvdelen er dækket og den anden afdækkes.

Inkuber de podede plader ved 30 ° C i 48-72 timer og undersøg derefter under mikroskopet gennem dækslet.

Vedligeholdelse af svampestammer

Til vedligeholdelse af stammer opbevares de podede og dyrkede plader i køleskab (4 til 8 ºC). På denne måde kan de vare flere uger og bruges til undervisnings- eller forskningsformål.

QA

Til sterilitetskontrol inkuberes en plade uden inokulering ved stuetemperatur, det forventes, at der ikke vil være nogen vækst eller farveændring.

Til kvalitetskontrol kan kendte stammer sås, såsom: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

De forventede resultater er delvis inhibering af S. aureus og E. coli. Mens der forventes en tilfredsstillende vækst i resten af ​​stammerne.

Aspergillus niger vokser med sorte og sporulerede kolonier i en omtrentlig tid på 5 dages inkubation.

Candida albicans gærkolonier med produktion af chlamydospore.

Saccharomyces cerevisiae producerer store gærceller.

Begrænsninger

Der dannes et gult bundfald i bunden af ​​pladen, som ikke bør forveksles med kolonier.

Referencer

1. Neogen Laboratories. Corn Meal Agar. Fås på: foodsafety.neogen.com.
2. Kultur Media Microkit. Corn Meal Agar. Fås på: Medioscultivo.com.
3. Linares M, Solís F. Vej til identifikation af gær. Fås på: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Folkesundhed, 2002; 19 (4): 206-208. Fås på: Scielo.com
5. Casas-Rincón G. Generel mykologi. 1994. 2. udg. Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela Caracas.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
8. Castillo E. Sammenlignende undersøgelse af nogle makro- og mikroskopiske metoder til isolering og genkendelse af slægten Candida. Colombianske pastor i farmaceutiske kemiske videnskaber. 1970; 3 (1): 33-57. Fås på: Ciencias.unal.edu.co