Den agar Hektoen eller Hektoen enterisk agar fast medium er en selektiv og differentieret kultur. Det blev oprettet på Hektoen Institute af King og Metzger til isolering af enteropatogene bakterier i Shigella- og Salmonella-slægterne.
Mediet er sammensat af proteose-pepton, gærekstrakt, galdesalte, lactose, sucrose, salicin, natriumthiosulfat, natriumchlorid, jerncitrat, ammoniumcitrat, bromothymolblåt, syre-fuchsin og agar. Denne formulering gør det muligt at differentiere Shigella- og Salmonella-slægterne fra resten af de bakterier, der er i stand til at vokse i dette medium.
A. Virgin Hektoen agar B. Frø Hektoen agar. Kilde: Flickr.com/Den originale uploader var Philippinjl på fransk Wikipedia.
Selvom der er andre medier med den samme funktion som Hektoen agar, har det en større fordel sammenlignet med andre medier, især når du vil genvinde Shigella-arter.
Arten af begge køn forårsager alvorlige mave-tarmproblemer hos mennesker på grund af forbruget af forurenet mad; transmission er derfor fecal - oral. Derfor er brugen af Hektoen-agar hovedsageligt indikeret i den mikrobiologiske analyse af afføring og fødevareprøver.
Basis
Hektoen Agar indeholder peptoner og gærekstrakt som kilde til næringsstoffer, hvilket giver de væsentlige elementer til mikrobiel udvikling.
Dog har det også galdesalte, der virker ved at hæmme væksten af nogle bakterier, især Gram-positive og nogle Gram-negative. Det er af denne grund, at det betragtes som et selektivt medium.
På den anden side er Hektoen agar et differentielt medium. Denne egenskab tildeles ved tilstedeværelsen af fermenterbare kulhydrater, såsom lactose, saccharose og salicin, sammen med pH-indikatorsystemet repræsenteret af bromothymolblåt og surt fuchsin.
Alle bakterier, der er i stand til at vokse på dette medium, der ikke hører til slægten Salmonella og Shigella, vil udvikle laks eller appelsinkolonier med undtagelse af slægten Proteus. Dette skyldes fermenteringen af en eller flere af de tilstedeværende kulhydrater, der syrner mediet, hvilket får pH-indikatoren til at dreje.
Slægten Shigella og Salmonella er på sin side ikke i stand til at fermentere nogen af de tilstedeværende kulhydrater ved kun at bruge peptoner som en energikilde, der alkaliserer mediet og derfor deres kolonier er grønblå.
Bakterier, der er i stand til at danne hydrogensulfid (farveløs gas), kan også skelnes i dette medium. Natriumthiosulfat fungerer som svovlkilden, mens jerncitrat er udvikleren. Begge forbindelser muliggør dannelse af et sort bundfald af jernsulfid, der viser reaktionen.
Det sorte bundfald i midten af kolonien med en gennemsigtig glorie omkring det giver et fiskøjeudseende. Denne egenskab antyder tilstedeværelsen af slægten Salmonella.
Endelig opretholder natriumchlorid den osmotiske balance, og agaren giver mediet den faste konsistens.
Forberedelse
Vej 76 g af det dehydrerede medium og opløst i en liter destilleret vand. Ryst blandingen kraftigt, og lad den derefter hvile i 10 til 15 minutter. Det kan opvarmes og koges, hvilket giver roterende bevægelser, indtil det er totalt opløst. Dette medium er ikke autoklaveret.
Når mediet når en temperatur på ca. 45 ° C, hældes et volumen på 20 ml direkte i sterile petriskåle.
Agaren får lov at størkne. På det tidspunkt er de klar til brug. Det anbefales at bruge dem straks. Hvis dette ikke er muligt, opbevares de i køleskabet indtil brug.
Pladerne skal fjernes fra køleskabet på forhånd inden podning for at bringe dem til stuetemperatur.
PH i mediet bør være 7,5 ± 0,2. Farven på det dehydratiserede medium er lilla, og det tilberedte medium er brungrønt.
Brug
Brug af Hektoen-agar anbefales til søgning efter bakterier af Shigella- og Salmonella-slægten i afføring og fødevareprøver.
Muligheden for at isolere disse bakterier forøges betydeligt, hvis prøven tidligere er beriget i specielle bouillon, såsom selenite-bouillon, cystin-selenite-bouillon, tetrathionat-bouillon osv.
Inokulatet skal være stærkt, og såningen udføres ved stribning. Pladerne inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer i aerobiose.
Inkubation i 48 timer anbefales, fordi koloniernes karakteristika er klarere for deres fortolkning og differentiering på dette tidspunkt.
QA
For at udføre kvalitetskontrol på dette medium anvendes certificerede bakteriestammer, såsom: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 og Shigella sonnei ATCC 25931.
De forventede resultater er som følger: Salmonella typhimurium og Salmonella enteritidis skulle udvikle blågrønne kolonier med eller uden et sort centrum. Mens Shigella-arten vokser som blågrønne kolonier.
Stammer af Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 og Staphylococcus aureus ATCC 25923 kan også inkluderes.
I disse tilfælde er de observerede egenskaber følgende: E. coli og K. pneumoniae vil udvikle laksorange kolonier i dette medium med et bundfald med samme farve omkring dem. Proteus vil udvikle blågrønne kolonier med eller uden et sort centrum.
Mens S. aureus og E. faecalis skal hæmmes, lykkes E. faecalis lejlighedsvis at vokse som meget små, gule kolonier.
På den anden side, da dette medium ikke autoklaveres, er det vigtigt at evaluere mediets sterilitet. Derfor skal en til to uinokulerede plader fra hver forberedt batch inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i aerobiose.
Naturligvis forventes ingen vækst af nogen art på pladen.
Begrænsninger
-Proteus-arten kan udvikle sig i dette medium, og egenskaberne ved deres kolonier kan forveksles med Salmonella- eller Shigella-arter. Af denne grund skal enhver mistænksom koloni bekræftes med biokemiske test.
-Det er nødvendigt at ledsage brugen af dette medium med andre mindre selektive agarer, fordi hvis den søgte mikroorganisme findes i lave koncentrationer, kan den muligvis ikke udvikle sig i dette medium.
-Ved ikke overophedet under forberedelse, da overdreven varme ændrer mediets sammensætning.
- Usædvanligt kan der forekomme kolonier af lactosegærende Salmonella, der kan gå upåagtet hen.
Referencer
- Wikipedia-bidragydere. Hektoen enterisk agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 13. marts 2019, 23:38 UTC. Tilgængelig på:.wikipedia.org / Adgang til 16. marts 2019.
- BD Laboratories. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Tilgængelig på: bd.com
- Britannia Laboratories. Hektoen Enteric Agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Hektoen agar. Fås på: f-soria.es
- Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. 2. udgave. Fås på: bd.com/europe