- Basis
- Peptoner og gærekstrakt
- Glukose
- L-lysin
- PH indikator (bromocresol lilla)
- Jernholdig ammoniumcitrat og natriumthiosulfat
- Fortolkning af testen
- Lysin-dekarboxylering
- Deamination af lysin
- Produktion af hydrogensulfid (H
- Registrering af resultater
- Forberedelse
- Applikationer
- Referencer
Den agar LIA (lysin jern) er en biokemisk test anvendes til at identificere bakterier fra Enterobacteriaceae-familien. Dette medium blev oprettet af Edwards og Fife, baseret på Falkow-formlen.
Oprindeligt var denne test en bouillon indeholdende peptoner, gærekstrakt, glukose, L-lysin, bromocresol-lilla og destilleret vand. Edwards og Fife tilsatte agar-agar, ferri-ammoniumcitrat og natriumthiosulfat.
Positiv og negativ test for lysindekarboxylering. Kilde: Foto og diagram egenskab for forfatteren MSc. Marielsa gil
Testen består grundlæggende af at demonstrere tilstedeværelsen af enzymet lysin decarboxylase, der er i stand til at reagere med carboxylgruppen i aminosyren L-lysin. En deamination af aminosyren kan også forekomme på grund af tilstedeværelsen af enzymlysindeaminasen.
Yderligere viser sammensætningen af mediet evnen for nogle bakterielle slægter til at producere hydrogensulfid. Endelig er det også muligt at observere generering eller ikke af gas i mediet.
Basis
Peptoner og gærekstrakt
Som de fleste dyrkningsmedier indeholder Lysine Iron Agar komponenter, der giver kilden til næringsstoffer, der er nødvendige til bakterievækst. Disse komponenter er repræsenteret ved peptoner og gærekstrakt.
Glukose
Ligeledes indeholder denne agar glukose som et gærbart kulhydrat. Alle bakterier i familien Enterobacteriaceae vides at fermentere glukose.
Dette trin er afgørende, fordi det vil være ansvarlig for forsuring af mediet, en væsentlig betingelse for, at enzymet lysin-decarboxylase - hvis det er til stede - til at virke på dets underlag.
I nogle bakterielle slægter kan gasproduktion på grund af glukosefermentering observeres.
Gassen er påvist, når der er en forskydning af agaren i røret, hvilket efterlader et tomt rum i bunden af røret eller ved brud på mediet i to eller flere dele.
L-lysin
Når lysin er dekarboxyleret, dannes en diamin (cadaverin) og carbondioxid.
Decarboxylering forekommer i nærværelse af co-enzympyridoxalfosfat. Denne reaktion er irreversibel.
PH indikator (bromocresol lilla)
Alle pH-ændringer, der forekommer i mediet ved de forskellige reaktioner, detekteres af den lilla bromocresol pH-indikator.
I denne forstand, når der er forsuring, bliver mediet gult, og når der er alkalisering, vender mediet tilbage til den oprindelige lilla eller lilla farve.
Når lysindeamination sker på grund af tilstedeværelsen af lysindeaminase-enzymet, dannes en rødlig farve på overfladen, typisk i slægterne Proteus, Providencia og nogle Morganella-arter.
Dette skyldes det faktum, at under deamineringsprocessen dannes alfa-keto-kolsyre, der reagerer med ammoniumcitrat i nærvær af ilt, hvilket forårsager den nævnte farve.
Jernholdig ammoniumcitrat og natriumthiosulfat
På den anden side, bakterier, som producerer hydrogensulfid vil blive påvist ved tilstedeværelsen af natriumthiosulfat (svovlkilde) og ferriammoniumcitrat, som er udvikleren af H 2 S.
Bakterier, der har enzymet thiosulfat reduktase har evnen til at virke ved at reducere natriumthiosulfat stede, danner sulfit og hydrogensulfid (H 2 S).
Sidstnævnte er en farveløs gas, men når man reagerer med jernsaltet, danner den jernholdigt metallisk sulfid, som er en uopløselig forbindelse (synligt sort bundfald).
Imidlertid evnen til at danne H 2 S med dette medium er ikke meget pålidelige, fordi nogle lysindecarboxylase negative bakterier stand til at producere H 2 S ikke danne den sorte bundfald, som surhed mediet forstyrrer. Derfor anbefales det at tjekke med andre medier, der indeholder jern.
Fortolkning af testen
Lysin-dekarboxylering
Rørene skal læses efter 24 timers inkubation, ellers er der en risiko for fejlagtolig reaktion og rapportering af falske negativer.
Det skal huskes, at den første reaktion, der vil finde sted, er gæring af glukose, derfor bliver alle rørene efter 10 til 12 timer gule.
Hvis der efter inkubationstiden (24 timer) er en gul baggrund med en lilla eller lilla overflade observeret, er reaktionen negativ. Den lilla farve på overfladen svarer til alkaliniseringen af mediet ved anvendelse af peptoner.
En positiv reaktion er en, hvor rørets bund og overflade er helt lilla, dvs. at det vender tilbage til den oprindelige farve.
Hvem der bestemmer testens positivitet er mediet eller baggrunden for mediet. Hvis du er i tvivl om farven, kan den sammenlignes med et ikke-inokuleret LIA-rør.
Deamination af lysin
Et rør, der viser lysdeamination, har en rødlig rødbrun overflade og en gul (syre) baggrund eller hele røret rødligt rødbrun.
Denne reaktion tolkes som negativ for lysindekarboxylering, men positiv for lysindeamination.
Denne reaktion er defineret og fortolket på rammen.
Produktion af hydrogensulfid (H
En positiv reaktion observeres ved udseendet af et sort bundfald i hele eller dele af mediet. Normalt mellem kanten af afskærmningen og basen.
Hvis bundfaldet forekommer i hele røret, afslører det ikke de andre reaktioner, der forekommer i midten.
Registrering af resultater
Ved fortolkning af testen registreres resultaterne som følger:
Først affasningen er læst, så bunden eller blok, så produktionen af H 2 S, og endelig produktion af gas.
Eksempel: K / A + (-). Det betyder:
- K: Alkalisk ring (lilla farve)
- A: Syrebaggrund (gul), dvs. negativ decarboxyleringsreaktion og negativ deamination.
- +: Produktion af hydrogensulfid
- (-): Uden gas.
Forberedelse
Vej 35 g af det dehydrerede jernagarlysinmedium og opløst i en liter destilleret vand.
Varm op, indtil agaren er helt opløst, så lad den koge et minut under omrøring ofte. Fordel 4 ml af mediet i 13/100 reagensglas med bomuldshætter.
Steriliser i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og lad stå i en vinkel, så der er en dyb base og en kort skrå kant.
Opbevares i køleskab 2-8 ° C. Lad det varme op, inden bakteriestammen sås.
Farven på det dehydratiserede medium er beige, og det tilberedte medium er rødligt lilla.
Det endelige pH for det fremstillede medium er 6,7 ± 0,2
Mediet bliver gult ved pH 5,2 eller mindre og er lilla ved pH 6,5 og derover.
Applikationer
Denne test sammen med andre biokemiske test anvendes til identifikation af baciller fra familien Enterobacteriaceae.
Mediet podes med en lige sløjfe eller nål, der laves en eller to punkteringer til bunden af røret, og derefter overføres mediets overflade i en zigzag.
Inkuber i 24 timer ved 35-37 ° C i aerobiose. Om nødvendigt lader det inkuberes i yderligere 24 timer.
Det er hovedsageligt nyttigt at differentiere laktosegegative Citrobacter-arter fra Salmonellas sp.
Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
Referencer
- Mac Faddin J. (2003). Biokemiske test til identifikation af bakterier af klinisk betydning. 3. udg. Redaktionel Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
- Britannia Laboratories. Lysin jernagar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
- BD Laboratories. BBL Lysine Iron Agar Slants. 2007. Tilgængelig på: bd.com
- Valtek Laboratories. Medium LIA 2009. Tilgængelig på: andinamedica.com