AGAR FRU: FOUNDATION, KLARGØRING OG ANVENDELSE - BIOLOGI - 2025

Den agar MRS er et selektivt fast medium kultur anvendes til isolering og tælling af mælkesyrebakterier, især af slægten Lactobacillus. Denne agar blev oprettet i 1960 af Man, Rogosa og Sharpe, med samme navn, men på grund af dens kompleksitet bruges ofte forkortelsen MRS.

Det er sammensat af proteose pepton, kødekstrakt, gærekstrakt, glucose, sorbitan monoleat, dipotassiumphosphat, natriumacetat, ammoniumcitrat, magnesiumsulfat, mangansulfat og agar.

Mand Rogosa og Sharpe Agar (MRS) frøet med Lactobacillus sp. Kilde: Foto doneret til denne artikel af forfatterne: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto taget under undersøgelsen med titlen: Evaluering af mælkesyrebakterier og Bifidobacteria med probiotisk potentiale i modermælk og spædbarnsmarkering.

Denne sammensætning tillader korrekt udvikling af mælkesyrebakterier fra kliniske prøver, såsom fæces, vaginal udflod, orale prøver og modermælk samt mejeri- og kødfødevarer.

Det bruges ikke rutinemæssigt i kliniske laboratorier, fordi mælkesyrebakterier sjældent er involveret i sygdomsprocesser. På området fødevaremikrobiologi er brugen af ​​MRS-agar imidlertid hyppigere.

På den anden side bruges dette medium af nogle forskningscentre, hvis mål er studiet af mælkesyrebakterier.

Basis

Mand, Rogosa og Sharpe agar har en ret kompleks sammensætning. Ved at nedbryde funktionen af ​​hver af dens komponenter, kan dens fundament forklares.

Proteose pepton, kødekstrakt, gærekstrakt og glukose er næringsstoffer, der giver kilden til kulstof, nitrogen, vitaminer og mineraler, der er nødvendige for bakterievekst. Derudover er glukose den universelle energikilde, der bruges i de fleste kulturmedier.

På den anden side for at favorisere vækst af mælkesyrebakterier er tilstedeværelsen af ​​cofaktorer (kationer), der er essentielle i metabolismen af ​​Lactobacillus og beslægtede bakterier, nødvendig. Disse forbindelser er natrium-, magnesium- og mangansalte.

Ligeledes er sorbitan monoleat eller polysorbate 80 en vigtig kilde til fedtsyrer, da de absorberes som næringsstoffer.

Endvidere virker sorbitanmonoleat og ammoniumcitrat ved at hæmme udviklingen af ​​den ledsagende flora, især Gram-negative bakterier, hvilket giver denne agars selektive karakter.

Endelig er agar-agaren den, der tilvejebringer den faste konsistens til mediet.

Der er andre varianter af Man Rogosa Sharpe-agar; en af ​​dem er suppleret med cystein (MRSc), meget nyttig til isolering af bifidobakterier, blandt andre mikroorganismer. På den anden side er der MRS-mediet suppleret med neomycin, paromomycin, nalidixinsyre og lithiumchlorid, specielt til selektiv optælling af bifidobakterier i mejeriprodukter.

Forberedelse

Vej 68,25 gram af det dehydrerede medium og opløst i en liter destilleret vand. Lad stå i 5 minutter. For at opløse fuldstændigt skal du dreje til en varmekilde under omrøring ofte og koge i 1 til 2 minutter. Steriliser i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Når du forlader autoklaven, skal du stå i et par minutter og fordele, mens den stadig er varm i sterile petriskåle.

Lad plader stivne og vendes, bestil dem i pladestativer og opbevares i køleskab indtil brug. Lad pladerne opvarmes til stuetemperatur før brug.

PH i mediet bør være 6,4 ± 0,2. Nogle kommercielle huse anbefaler pH mellem 5,5 og 5,9.

Det dehydratiserede medium er beige i farve og tilberedt er mørkt rav.

Både det dehydratiserede medium og de forberedte plader skal opbevares ved 2-8 ° C.

Applikationer

MRS agarplader kan være overfladefrøede (udmattelse eller Drigalski-spatel). Det kan også sås efter dybde. Pladerne inkuberes ved 37 ° C i microaerophilicity (4% O ₂ og 5-10% CO ₂) i 24 til 72 timer.

Såningsmetoden vælges i henhold til det tilsigtede formål (isolering eller optælling).

Karakteristika for kolonierne

De formodede kolonier af Lactobacillus vokser hvidlige farver og har et mucoid eller cremet udseende på denne agar. De skal derefter identificeres.

Isolering af mælkesyrebakterier

Til dette anvendes overfladefrøsåning. De prøver, der skal sås, kræver en tidligere procedure.

I tilfælde af modermælksprøver anbefales det at centrifugere 1 ml af prøven ved 14.000 o / min i 10 minutter for at fjerne fedtlaget. 900 µl kasseres, og i de resterende 100 µl suspenderes sedimentet og hældes på overfladen af ​​MRS-agaren. Det skal derefter fordeles jævnt med en Drigalski-spatel.

I tilfælde af afføringsprøver vejes et (1) gram afføring og homogeniseres i 9 ml 0,1% sterilt peptonvand svarende til en 1/10 fortynding. Derefter fremstilles serielle fortyndinger, indtil ^{der opnås} en endelig fortynding på ^10-4.

Endelig 100 pi af 10 ^-2, 10 ^-3 og 10 ^-4 fortyndinger træffes og hver fortynding podes på MRS-agar, distribuere jævnt med en Drigalski spatel.

Mælkesyrebakterier tæller

I dette tilfælde sker såningen med dybde.

For modermælksprøver udtages 1 ml og anbringes i et sterilt, konisk plastrør. MRS-agar sættes ved en omtrentlig temperatur på 40 ° C til et slutvolumen på 25 ml til opnåelse af en homogen blanding. Derefter hældes det i sterile petriskåle på en ensartet måde og får lov at henstå, indtil polymerisation.

For afføringsprøver fremstilles fortyndinger som tidligere beskrevet. Tag 1 ml af hver fortynding og anbring den i sterile koniske plastrør. Smeltet MRS-agar sættes til et volumen på 25 ml.

Blandingen af ​​hver fortynding hældes jævnt i sterile petriskåle. Endelig får det hvile indtil polymerisation.

Koloni tæller på Man Rogosa og Sharpe (MRS) agar. Kilde: Foto doneret til denne artikel. Forfattere: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto taget under forskningen: Evaluering af mælkesyrebakterier og Bifidobacteria med probiotisk potentiale i modermælk og spædbarn.

Forskningsniveau

Hver dag får undersøgelsen af ​​mælkesyrebakterier større interesse; Forskere søger især at lære om nye stammer og deres potentiale som startfermenter til standardisering i fremstilling af mejeriprodukter, blandt andre anvendelser.

I denne forstand har Alvarado et al. (2007) brugte MRS-agar til at gennemføre en undersøgelse, hvor de isolerede, identificerede og karakteriserede mælkesyrebakterier til stede i en håndværker Andean røget venezuelansk ost.

I osten fandt de tilstedeværelsen af ​​bakterier fra Lactococcus- og Lactobacillus-slægterne, og konkluderede, at blandingerne af isolerede stammer er egnede som startstammer til fremstilling af oste fra pasteuriseret mælk.

På den anden side Sánchez et al. (2017) anvendte MRS-agar til at undersøge tilstedeværelsen af ​​mælkesyrebakterier i fordøjelseskanalen hos smågrise for at bruge dem som naturligt probiotika, der øger produktiviteten af ​​sunde smågrise.

Med dette medium lykkedes det at isolere fire arter: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae og Pediococcus pentosaceus.

Ligeledes Báez et al. (2019) anvendte MRS-agar til at evaluere mælkesyrebakterier (LAB) og bifidobakterier med probiotisk potentiale i modermælk og spædbarnets afføring.

Det lykkedes dem at isolere 11 BAL og 3 Bifidobacteria sp i modermælk og 8 BAL og 2 Bifidobacteria sp. i fæces. Alle opfyldte visse parametre, der beviser dem som bakterier med probiotisk aktivitet.

Forfatterne konkluderede, at både modermælk og fæces fra udelukkende ammede spædbørn fungerer som naturlige kilder til probiotiske bakterier.

QA

For at evaluere kvaliteten af ​​MRS-agar skal du kontrollere stammer såsom:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escheracia colerei og BERCERCIA coli.

De forventede resultater er tilfredsstillende vækst for de første 6 bakterier, mens E. coli og Bacillus cereus skal hæmmes fuldstændigt.

Referencer

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Isolering, identifikation og karakterisering af mælkesyrebakterier fra en venezuelansk røget andisk artisanost. Dens brug som en startkultur. Kelig. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Fås på: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Isolering af mælkesyrebakterier fra fordøjelseskanalen i smågrisen. Rev. investiga. dyrlæge. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Fås på: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Evaluering af mælkesyrebakterier og Bifidobacteria med probiotisk potentiale i modermælk og fæces hos spædbørn i Acevedo kommune, Miranda 2017. Grundlæggende arbejde med at kvalificere sig til bachelorgraden i bioanalyse. University of Carabobo, Venezuela.
4. Britannia Laboratory. MRS agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
5. Wikipedia-bidragydere. MRS agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 10. januar 2018, 19:44 UTC. Tilgængelig på: wikipedia.org Åbnede den 17. februar 2019.
6. Roy D. Media til isolering og tælling af bifidobakterier i mejeriprodukter. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.