MACCONKEY AGAR: BEGRUNDELSE, FORBEREDELSE OG ANVENDELSER - BIOLOGI - 2025

Den MacConkey agar er et fast medium, som tillader eksklusiv isoleringen af Gram-negative bakterier. Af denne grund er det et selektivt medium og tillader også skelnen mellem lactosegæring og ikke-fermenterende baciller, hvilket gør det til et differentielt medium. Det er et af de mest anvendte kulturmedier i et mikrobiologisk laboratorium.

Dette medium bruges hovedsageligt til isolering af Gram-negative baciller, der hører til familien Enterobacteriaceae, inklusive opportunistiske og enteropatogene arter.

MacConkey-agar frøet med to typer bakterier. Laktosegærende kolonier i venstre side, fermenteringskolonier fra højre side.

Det kan også bruges til at isolere andre enteriske baciller, der lever i mave-tarmkanalen, men hører ikke til Enterobacteriaceae, såsom Aeromonas sp, Plesiomonas sp, blandt andre.

Endelig kan det isolere andre ikke-glukosegærende Gram-negative baciller, der findes i miljøet, vand eller jord, men det kan undertiden være opportunistiske patogener såsom Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaligenes sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, blandt andre.

Basis

MacConkey-agar

Grundlaget for dette medium kan forklares gennem beskrivelsen af ​​dets komponenter, da hver enkelt har et formål, der bestemmer en egenskab ved det.

Galgesalte og krystalviolet

I denne forstand har MacConkey-agar en kompleks sammensætning. Først og fremmest indeholder galdesalte og krystalviolet.

Disse elementer er ansvarlige for at hæmme væksten af ​​Gram-positive bakterier og nogle hurtige Gram-negative baciller. Til gengæld favoriserer det udviklingen af ​​Gram-negative baciller, der ikke er påvirket af disse stoffer. Derfor er det et selektivt medium.

Det siges at være lidt selektiv sammenlignet med andre medier, der også hæmmer væksten af ​​Gram-positive bakterier og også de fleste Gram-negative bakterier.

Peptoner, polypektoner og lactose

Det indeholder stoffer, der leverer de nødvendige næringsstoffer til de mikroorganismer, der udvikler sig i dette miljø, såsom peptoner, polypectoner og lactose.

Laktose er nøglepunktet for at mediet er et differentielt medium, da mikroorganismer, der har evnen til at fermentere laktose, vil udvikle stærke lyserøde kolonier.

Nogle bakterier kan fermentere laktose langsomt eller svagt og udvikle lyserøde kolonier og forbliver laktosepositive.

Dem, der ikke fermenterer lactose, bruger peptoner som en energikilde, der producerer ammoniak og alkaliserer mediet. Af denne grund er de oprindelige kolonier farveløse eller gennemsigtige.

PH-indikator

Farveændringen opnås gennem en anden vigtig forbindelse, som MacConkey agar har. Denne forbindelse er pH-indikatoren, som i dette tilfælde er neutral rød.

Fermentering af lactose frembringer produktion af blandede syrer. De syrner mediet til en pH-værdi under 6,8.

Dette får pH-indikatoren til at dreje mod en dyb lyserød farvetone. Farveintensiteten kan variere afhængigt af den endelige pH.

Destilleret vand, natriumchlorid og agar

På den anden side indeholder det destilleret vand og natriumchlorid, der giver medium hydrering og osmotisk balance. Endelig indeholder mediet agar, som er den base, der giver konsistensen af ​​fast medium.

Det forberedte MacConkey-agarmedium skal have en endelig pH-værdi justeret til 7,1 ± 0,2.

Forberedelse

For en liter MacConkey-agar skal 50 g af det dehydratiserede medium vejes, derefter anbringes i en kolbe og opløst i en liter destilleret vand. Efter 10 minutters henstand opvarmes det, blandes konstant, indtil det koges i 1 minut.

Kolben anbringes derefter i autoklaven og steriliseres ved 121 ° C i 20 minutter. Ved afslutningen af ​​tiden fjernes den fra autoklaven og får lov til at afkøle, indtil den når en temperatur på 45 ° C, for senere at servere i sterile petriskåle inde i en laminar flowhætte eller foran Bunsen-brænderen.

Lad størkne og opbevares i en omvendt pladeholder og opbevares i køleskab ved 2-8 ° C indtil brug.

For at få en MacConkey-agar, der hæmmer den sverningseffekt, der er produceret af Proteus-slægten, bruges en lav-salt MacConkey-agar.

Anvendelser af konventionel MacConkey-agar

MacConkey Agar er inkluderet i alle kulturmediesæt, der er arrangeret til såning af kliniske prøver modtaget i laboratoriet. Det er også nyttigt i fødevaremikrobiologi og miljømikrobiologi.

Mangfoldigheden af ​​Gram-negative stænger, der vokser i dette medium, udtrykker fænotype egenskaber, der hjælper med at stille en formodende diagnose af den pågældende art. F.eks. Er koloniernes størrelse, farve, konsistens og lugt nogle af de egenskaber, der kan vejlede.

I dette medium producerer Escherichia coli, Klebsiella sp og Enterobacter sp arter stærke lyserøde kolonier omgivet af en zone med udfældet galle.

Mens bakterier som Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp og Hafnia sp kan forekomme farveløse efter 24 timer eller lyserosa på 24-48 timer.

På samme måde producerer slægterne Proteus, Edwadsiella, Salmonella og Shigella farveløse eller gennemsigtige kolonier.

Andre varianter af MacConkey agar

Der er andre varianter af MacConkey Agar, der har specifikke formål. De er nævnt nedenfor:

MacConkey agar med sorbitol

Dette medium blev designet til at skelne den enteropatogene stamme (enterohemorrhagic Escherichia coli O157: H7) fra resten af ​​Escherichia coli-stammerne.

Dette medium udveksler kulhydratlactose med sorbitol. De enterohemorrhagiske E. coli-stammer O157: H7 adskiller sig fra resten, fordi de ikke fermenterer sorbitol, og derfor opnås transparente kolonier, mens resten af ​​E. coli-stammerne fermenterer sorbitol og kolonierne er stærke lyserøde.

MacConkey agar uden krystalviolet eller salt

Denne agar adskiller sig meget fra den klassiske MacConkey-agar, da den ikke har en violet krystal, og Gram-positive bakterier kan vokse.

På den anden side inhiberer fraværet af salt forekomsten af ​​sværmende på agaren produceret af nogle enteriske baciller, såsom dem af Proteus-slægten, og letter således isoleringen af ​​alle de tilstedeværende bakterier, inklusive Gram-positive bakterier.

MacConkey agar med cefoperazon

Denne MacConkey Agar-variant var designet til oprindeligt at isolere Laribacter hongkongensis og blev senere fundet at være nyttig til isolering af Arcobacter butzleri. Begge er let buede Gram-negative stænger, der er resistente over for cefoperazon.

Disse bakterier er for nylig blevet knyttet til at forårsage gastroenteritis og erhvervet diarré hos asiatiske og europæiske individer, og fremstå som to kraftfulde nye patogener.

Antibiotikum gør det muligt at hæmme den ledsagende flora i mave-tarmkanalen, som favoriserer udviklingen af ​​disse bakterier, hvilket forhindrer dem i at gå upåagtet hen, da de kræver 72 timer at vokse.

MacConkey-agar fremstillet med havvand ved 10% v / v

Denne variant er nyttig til vurdering af bakterielle sanitære indikatorer for fækal kontaminering, inklusive samlede coliforms og fecal coliforms i rekreative salte farvande (strande og bugter).

Cortez et al i 2013 demonstrerede, at mediet, der var fremstillet på denne måde, øger udvindingen af ​​disse mikroorganismer i saltvandsmiljøet markant sammenlignet med brugen af ​​MacConkey-agar tilberedt med destilleret vand.

Dette skyldes det faktum, at det modificerede medium stimulerer væksten af ​​bakterier, der er fysiologisk i en latenstilstand "levedygtig, men ikke kultiverbar", derfor kan de ikke genvindes i konventionelle medier.

Referencer

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT, et al. Brug af cefoperazon MacConkey-agar til selektiv isolering af Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
2. MacConkey-agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 4 apr. 2018, 18:16 UTC. 29. december 2018, 15:22 da.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Argentina. Redaktionel Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, Redaktion Panamericana SA
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Effekt af kulturmedier tilberedt med havvand på sundhedsindikatorer i havvand i kurbade i Chichiriviche, Falcón delstat, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. udgave. UCA Publications Service.