ERNÆRINGSAGAR: BEGRUNDELSE, KLARGØRING OG ANVENDELSE - BIOLOGI - 2025

Den næringsagar er et ikke-selektivt medium, og ingen forskellen fast kultur. Alle former for bakterier, der ikke er krævende fra et ernæringsmæssigt synspunkt, vokser i dette medium.

Det er et simpelt medium, og på trods af sit navn indeholder det en lavere ernæringsværdi sammenlignet med andre lignende medier, såsom Brain Heart Infusion Agar eller Trypticase Soy Agar.

Koloni regner med næringsagar

Dets brugbarhed i laboratoriet er meget varieret. Det bruges hovedsageligt til subkulturarter, opretholdelse af stammer, tælling af kolonier, som et grundlag for blandt andet at fremstille blodagar.

På samme måde kan produktionen af ​​pigmenter, der genereres af nogle bakteriestammer, på grund af sin lette beige farve undtagelsesvis skelnes, såsom det grønlige pigment af Pseudomonas aeruginosa, det murstenrøde pigment produceret af Serratia marcescens ved stuetemperatur, det gyldne gule pigment af Staphylococcus aureus, blandt andre.

Derudover er det et af de billigste voksende medier, der findes på markedet.

Basis

Som allerede nævnt ovenfor er det et meget simpelt medium, der er afhængig af at give næringsstoffer til bakterievækst uden begrænsning og uden komplekse reaktioner at fortolke.

Da mediet er gennemskinneligt, er det ideelt til at tælle kolonier ved dybfræsningsmetoden.

Sammensætning

Det er hovedsageligt sammensat af kødekstrakt eller gærekstrakt, peptoner eller gelatine-bugspytkirtlen, agar-agar, natriumchlorid og destilleret vand.

Kød- eller gærekstraktet og peptonerne repræsenterer de væsentlige kilder til kulstof og mineraler (nitrogen, fosfor og svovl), som vil blive brugt af bakterier som en kilde til energi og vækstfaktorer.

Ligeledes er agar-agar basen i alle faste dyrkningsmedier, der kommer til at erstatte gelatine, som var den første baseforbindelse, der blev brugt af Robert Koch til at give en solid konsistens til hans medier.

Agar er et polysaccharid sammensat af galactose, galactomannan, agarose og agaropectin. Den indstilles til 40 ° C og smelter tæt på 100 ° C.

På sin side giver natriumchlorid mediet den osmolaritet, der er nødvendig til bakterieudvikling.

Endelig tjener vandet til at hydratisere og opløse de lyofiliserede forbindelser. Der skal anvendes destilleret vand justeret til neutral pH. Ledningsvand bør ikke bruges, fordi det indeholder calcium og magnesium, der kan reagere med fosfater i mediet og danne uopløselige salte.

Forberedelse

For en liter næringsagar skal 31 g af det dehydrerede medium vejes. Læg den i en kolbe og opløs den i en liter destilleret vand. Efter 5 minutters stående opvarmning over en varmekilde og bland konstant, indtil den koges i 1 eller 2 minutter.

Fremstilling af kulturmedium.

Kolben anbringes derefter i en autoklav og steriliseres ved 121 ° C i 20 minutter.

Sterilisering i autoklav

Ved afslutningen af ​​tiden fjernes den fra autoklaven og serveres i sterile petriskåle ved hjælp af en laminær flowhætte eller Bunsen-brænderen.

Hvis petriskålene er engangs (plast), skal mediet fordeles, når agaren har en temperatur på ca. 50 ° C for at forhindre, at de deformeres af overdreven varme.

Lad størkne og opbevares på en omvendt pladeholder og opbevares i køleskab ved 2-8 ° C indtil brug.

Pladerne skal hærdes, før de podes. Næringsstofagarplader bør ikke bruges, hvis de er forurenet eller dehydreret.

PH-værdien for det forberedte medium skal indstilles til 7,3 ± 0,2.

Applikationer

Det er det enkleste kulturmedium, der bruges i mikrobiologilaboratoriet. Dens formulering er fremragende til vækst af ikke-krævende bakterier.

Dets vigtigste anvendelser forklares nedenfor:

Som grundlag for fremstilling af blodagar

Dette medium bruges undertiden som en base til fremstilling af blodagar, men det er ikke den mest almindeligt anvendte base.

Stimulere sporuleringen af ​​sporedannende bakterier

Dette dyrkningsmedium er især nyttigt til at stimulere sporuleringen af ​​sporedannende bakterier, såsom Bacillus sp.

Til dette sås en stamme af Bacillus-slægten og inkuberes i 24 timer ved 37 ° C ved aerobiose. Når kolonierne er vokset, udsættes pladen for temperaturspænding, dvs. temperaturen i ovnen øges til 44 ° C og henstilles i yderligere 24 timer eller anbringes i køleskab i 24 timer.

I slutningen af ​​tiden laves udstrygninger af kulturen og farves med Gram-farvning eller med Shaeffer-Fulton-sporfarvning. I dem observeres bacillerne med endosporer (sporer inde i bacillus) og exosporer (sporer uden for bacillen).

Stamme vedligeholdelse

Nogle forsknings- eller universitetsundervisningsstøttelaboratorier kræver opretholdelse af levedygtige bakterier af klinisk betydning så længe som muligt for at bruge bakteriebanken (bakterioteca) til forskningsarbejde eller til forberedelse af undervisningspraksis, hvor Studerende lærer at manipulere og identificere disse mikroorganismer.

Næringsagar såvel som hjerneinfusionsagar kan bruges til dette formål. Agaren tilberedes, hældes i rør med et bakelit låg og vippes på en base på en sådan måde, at agaren størkner og danner en blok i bunden og en skrå kant på overfladen (fløjte næb).

Hvert rør er mærket med navnet på de bakterier, der skal podes, og datoen. Hver af bakterierne podes på skråkant og inkuberes i 24 timer. Når kolonierne er vokset, opbevares rørene ved stuetemperatur.

Bakterioteca skal fornyes fra 1 til 3 måneder for at undgå forurening og dehydrering af mediet samt bakteriens død.

Kun ikke-kræsne bakterier kan opretholdes på denne måde.

Kolonitælling

Selvom der er specialiserede midler til at tælle kolonier, såsom standard tælleaggar, kan næringsagar bruges til dette formål, enten ved overfladesåning med en drigalski-spatel eller ved dybde. Af denne grund er det meget nyttigt i den mikrobiologiske analyse af mad og vand.

Kører diagnostiske test

Da det er et medium, der ikke indeholder blod eller andre additiver, er det ideelt til at tage kolonier, der er dyrket på dette medium, til at udføre katalasetesten.

På samme måde antages det på grund af dens lette farve at udføre oxidasetest direkte på et område af den frøede agar uden interferens.

Gendannelse af mesofile aerober fra rekreativt saltvand (strande)

Næringsagar fremstillet med 10% havvand er nyttigt til vurdering af mesofile aerober i strandvand.

På denne måde kan det reelle kontaminationsniveau, som vandene har med disse mikroorganismer, forstås, da resultaterne i denne type prøver overlappes, når kulturmedier, der er fremstillet på konventionel måde, anvendes.

Dette blev demonstreret af Cortez et al. i 2013 i et forskningsarbejde.

Dette kan forklares på grund af den pludselige ændring, som bakterier gennemgår, når de går fra et hypersaltet miljø til et miljø med lavt salt, derfor kommer mikroorganismerne i en tilstand af sløvhed, hvor de er levedygtige, men ikke kan dyrkes.

Referencer

1. "Ernæringsagar." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 13 september 2016, 20:33 UTC. 29. december 2018, 21:04 da.wikipedia.org
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Argentina. Redaktionel Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, Redaktion Panamericana SA
4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Effekt af kulturmedier tilberedt med havvand på sundhedsindikatorer i havvand i kurbade i Chichiriviche, Falcón delstat, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M og Cardoso M. Mikrobiologisk vandkvalitet til insemineringsdoser til svin. Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. udgave. UCA Publications Service.