KARTOFFEL DEXTROSE AGAR: BEGRUNDELSE, KLARGØRING OG ANVENDELSE - BIOLOGI - 2025

Den kartoffeldextroseagar er et medium, fast ikke - selektiv næringsstof kultur. Bakterie- og svampearter kan vokse i det, men dets anvendelse er især indiceret til isolering af filamentøse svampe og gær. Det er også kendt som PDA-medium for det engelske udtryk Potato Dextrose Agar.

Det er især nyttigt til isolering af fytopatogene svampe, dvs. dem, der påvirker planter. For at så prøverne fra inficerede grøntsager kan andre midler, såsom Sabouraud-agar eller malta-agar, anvendes, men til rutinemæssig anvendelse foretrækkes kartoffeldekstroseagar, da der opnås større sporulation.

Aspergillus niger og Sinemas på henholdsvis kartoffel dextrose-agar. Kilde: Alextrevelian 006 på engelsk Wikipedia / Joselrojas

Det bruges også til optælling af svampekolonier i prøver af kosmetik, farmaceutiske produkter og nogle mejerimad. Ligeledes er det velegnet til såning af prøver af hudskrabninger på jagt efter dermatofytter, der vokser meget godt i dette medium og udvikler deres karakteristiske pigmenter.

Kartoffeldextrosemedium er et meget enkelt og let medium at tilberede i laboratoriet. Den indeholder, som navnet antyder, infusion af kartoffel, dextrose og agar-agar. Derudover kan inhiberende stoffer tilsættes for at forhindre bakterievækst og øge selektiviteten for svampearter.

Basis

Potato dextrose agar er et kulturmedium, der tilvejebringer de ernæringselementer, der er nødvendige for udvikling af filamentøs svampe og gær.

Kombinationen af ​​infusion af kartoffel med glukose giver den perfekte energikilde til en tilfredsstillende vækst af svampe. Mens agaren er den, der giver konsistensen til mediet.

Mediet alene hæmmer ikke væksten af ​​bakterier, derfor er det et ikke-selektivt medium. For at gøre det selektivt har det brug for tilsætning af hæmmende stoffer som vinsyre eller antibiotika.

Forberedelse

- Hjemmelavet (ikke-kommercielt) præparat af kartoffel dextrose-agar

Petriskåle

Det fremstilles som følger:

I første omgang vaskes kartoflerne meget godt, hvilket fjerner den jord, de har. De skæres i tynde skiver med alt og skal. 200 gram kartofler vejes og koges i en liter destilleret vand i en halv time.

Ved afslutningen af ​​tiden skal du filtrere eller sil alt præparatet gennem en osteklæde.

Den opnåede væske afsluttes med destilleret vand op til en liter. 20 g agar-agar og 20 g dextrose sættes til infusionen, blandes godt og autoklaveres ved 121 ° C ved 15 kg tryk i 15 minutter.

Lad afkøle til 50 ° C og server i sterile petriskåle. De tilberedte plader opbevares i køleskab.

Kiler

Potte dextrose agar kiler kan også tilberedes.

I dette tilfælde, før sterilisering i autoklaven, anbringes 12 til 15 ml af mediet i rør, senere autoklaveres de, og når de forlades, ligger de på specielle underlag, indtil det stivner. Opbevares i køleskab.

Mediet forbliver ved en pH-værdi på 5,6 ± 0,2, men nogle laboratorier tilsætter 10% vinsyre for at sænke pH-værdien til 3,1 ± 0,1 for at hæmme bakterievækst.

I samme forstand foretrækker andre laboratorier at tilføje antibiotika for at gøre det selektivt til dyrkning af svampe og forhindre bakterievækst.

-Kommersiel fremstilling af kartoffel dextrose agar

Afvej 39 g af det kommercielt tilgængelige dehydratiserede medium og opløst i en liter destilleret vand. Lad det hvile i 5 minutter.

Blandingen opvarmes under hyppig omrøring, indtil den er helt opløst. Derefter steriliseres den i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Plader eller kiler kan tilberedes. Fortsæt som beskrevet ovenfor.

PH-værdien forbliver ved 5,6 ± 0,2. Hvis en pH-værdi på 3,1 ønskes, skal 14 ml steril 20% vinsyre tilsættes inden servering på pladerne.

Det rå medium er beige, og det tilberedte medium er let rav med en let uklar eller opalescent udseende.

Applikationer

Fremgangsmåde til såning af planteprøver på kartoffel dextrose-agar

-For farvede blade

Bladene skæres i stykker.

I et 50 cm3 glas med 50% alkohol, anbring bladene (farvede og sunde stykker) for at desinficere overfladen i 20 til 30 sekunder. Kast alkoholen, og tilsæt 20% natriumhypochlorit i 40 til 50 sekunder, hvis de er tynde blade, og øg tiden til 80 sekunder, hvis det er bark og træstammer.

Kasser natriumhypochlorit og tag de desinficerede stykker med en steril tang, og anbring dem på overfladen af ​​mediet (højst 10 stykker). Indstil datoen og inkuber på 20-30 ° C.

-Frugt og knolde

Hvis frugten er kødfuld, skal du åbne den frugt, der er påvirket af svampen, og tage stykker med en steril skalpell fra både de syge og sunde dele og placere dem på overfladen af ​​agaren.

Hvis frugten er citrus, såsom en citron eller en appelsin, skal den åbnes og dens frø sås.

Når frugtens overflade påvirkes og sporer observeres, er det ideelle at bruge ristemetoden på pladen; Dette består i at berøre sporerne med en steriliseret og afkølet "L" -formet spatel og derefter lave en zigzag-podning 2 til 3 gange på agaren.

-For korn

De desinficeres som beskrevet i bladene og placeres senere på agaren.

-For grene og stængler

En skrabning af barken udføres, og senere tages stykker af den sunde og syge del og sås direkte på agaren.

De podede plader inkuberes aerobt ved 20-30 ° C i 72 timer.

Fremgangsmåde til såning af prøver på hud, hår eller negle på kartoffeldekstroseagar

Prøveudtagningen skal udføres ved hjælp af en skalpel nr. 11, enten for at skære hår, hudvægte eller negle, der søger efter dermatofytter. Inden prøven tages, skal området desinficeres med 70% alkohol.

-Skin prøve

I skællede læsioner bør kanten af ​​læsionen skrabes, da svampen sandsynligvis findes der.

Ved ekssudative læsioner udtages prøven med en tør eller våd pind. Så straks på kartoffel dextrose agar eller Sabouraud agar. Undgå transportmidler.

En anden metode til prøveudtagning er gennem tæppet firkantede teknik fra Mariat og Adan Campos. I dette tilfælde gnides det berørte område 5 gange med et stykke steril uld til efterfølgende dyrkning.

Prøven kan placeres direkte i kulturmediet.

-Hårprøve

Afhængig af patologien kan den berørte del afskæres eller fornyes. Anbring prøven i kulturmediet.

-Nail prøve

En bestemt del af det berørte negl kan skrabes eller klippes. Det afhænger af typen af ​​skade.

Skær prøven i 1 mm stykker før såning for at øge sandsynligheden for svampens kontakt med kulturmediet.

Identifikationsprocedure

Kolonierne opnået på pladen isoleres i rør indeholdende kartoffeldextrose-agar for derefter at gennemføre den makroskopiske undersøgelse af kolonierne (udseende, farve, konsistens, udviklingsgrad.

Den mikroskopiske undersøgelse (observation af strukturer og deres formationer) kan udføres ved mikrokulturer eller direkte observation under mikroskopet mellem dias og dias.

Kolonitælling

Dette medium kan også bruges til at bestemme svampe- og gærbelastningen, der er til stede i plante-, fødevare-, kosmetik- eller medikamentprøver. Til dette formål anvendes kartoffeldextroseagar suppleret med antibiotika, såsom: (chloramphenicol, chlorotetracyclin eller begge dele).

Hæld 1 ml af prøven - fortrinsvis fortyndet - i en steril og tom petriskål, smelt derefter en pude kartoffeldextroseagar og lad den afkøle til 45 ° C. Hell på petriskålen og drej, indtil den er homogeniseret. Lad det hvile, indtil det stivner.

Inkuber aerobt ved 20-25 ° C (forme) eller 30-32 ° C (gær) i 5 til 7 dage eller mere, afhængigt af den ønskede svampetype og prøvetypen. To plader kan bruges til at inkuberes i begge temperaturområder.

Tælling af svampekolonier i en fødevareprøve. Kartoffel dextrose agar suppleret med antibiotika. Kilde: Pxhere.com foto / 777267

Vedligeholdelse af svampestammer

Potato Dextrose Agar kan bruges til at opretholde levedygtige svampestammer i flere år.

Til dette dyrkes svampen på kiler af kartoffel dextrose-agar, og når svampen først er vokset, er den dækket med mineralolie. Olien skal steriliseres i en autoklav i 45 minutter og have en viskositet på ca. 300 til 330 Saybolt. Olien skal være 1 til 2 cm over spidsen af ​​skråningen.

QA

Fra hver forberedt batch tages 1 eller 2 plader og inkuberes ved 25 ° C i 48 timer eller ved 20 ° C i 96 timer. En god sterilitetskontrol er en, hvor koloniudvikling ikke observeres.

Kendte eller certificerede kontrolstammer kan også bruges som:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Der forventes god vækst i alle tilfælde.

Referencer

1. Britannia Laboratories. Glucose agar kartoffel. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
2. Neogen Laboratories. Kartoffel Dextrose agar. Fås på: foodsafety.neogen.com
3. Insumolab Laboratorium. Kartoffel dextrose agar. Fås på: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
5. Casas-Rincón G. Generel mykologi. 1994. 2. udg. Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela Caracas.
6. Aceituno M. Evaluering af den mikrobiologiske kvalitet i øjenskygge, kompakt pulvertype af et nationalt produktionslaboratorium, i henhold til referencemetoden Pharmacopea Usp 2005. Speciale for at kvalificere sig til titlen Pharmaceutical Chemist. San Carlos universitet i Guatemala.
7. Cuétara M. Behandling af overfladeprøver. Iberoamerican Journal of Mycology. 2007; pp. 1-12