Den mannitolsaltagar eller manitol salt er et fast medium selektiv og differentieret kultur. Det blev oprettet af Chapman til isolering af patogene Gram-positive cocci, især Staphylococcus aureus.
Det er imidlertid også nyttigt at isolere Staphylococus epidermidis, som undertiden kan være til stede som et opportunistisk patogen, og Staphylococcus saprophyticus, en anerkendt urinpatogen blandt andre arter.
A. Fiola med tilberedt salt mannitol-agarmedium. B. Saltede mannitolagarplader podet med fermenterende og ikke-fermenterende mannitolbakteriestammer. Kilde: A og B: Fotos taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil.
Nogle Enterococcus er i stand til at vokse på dette medium såvel som visse Gram-positive sporedannende stænger.
Dette medium er meget nyttigt i analysen af kliniske prøver, men det bruges også til mikrobiologisk undersøgelse af fødevarer og til kvalitetskontrol af industriprodukter, såsom kosmetik, medicin, blandt andre.
Salt Mannitol Agar består af ekstrakter og peptoner fra oksekød, triptein, mannitol, natriumchlorid, phenolrød og agar.
Basis
Mannitol-agar er selektiv takket være sin høje koncentration af salt. Saltholdighed fungerer som et hæmmende stof og forhindrer vækst af Gram-negative bakterier.
Det er også forskelligt på grund af tilstedeværelsen af karbohydratmannitol og den fenolrøde pH-indikator. Fra dette producerer bakterier, der er i stand til at fermentere mannitol, syrer, forsurede mediet, gør kolonierne og mediet gule.
På den anden side vokser kolonier, der ikke fermenterer mannitol, i mediet, idet de næringsstoffer leveres af ekstrakter og peptoner af kød og triptein. Derefter udtager bakterierne kulstof, nitrogen, vitaminer og mineraler, der er nødvendige for deres vækst.
Kolonierne i dette tilfælde kan være svage eller stærke lyserøde, og mediet forbliver den samme farve eller skifter til fuchsia.
Agar er det stof, der giver konsistensen til mediet.
Forberedelse
For at fremstille en liter salt mannitol-agar vejes 111 g af det dehydrerede medium fra det foretrukne kommercielle firma og opløses i 1000 ml destilleret vand under anvendelse af en kolbe.
Varme tilføres under hyppig omrøring af mediet for at forbedre opløsningen. Kog et minut.
Kolben anbringes i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.
Ved slutningen af tiden fjernes hætteglasset fra autoklaven, lad det hvile og server mellem 15 til 20 ml på sterile petriskåle, når temperaturen er ca. 50 til 55 ° C.
Det er tilladt at størkne, bestilles på en omvendt måde i plaqueros og opbevares i køleskabet indtil brug. Inden du sætter en prøve i, skal du vente på, at pladen når stuetemperatur.
Pladerne podes ved stribning eller ved overfladefrø med en drigalski-spatel. Det færdige medias endelige pH skal være 7,4 ± 0,2
Farven på det dehydrerede medium er lys beige, og farven på det tilberedte medium er orange rød.
Applikationer
På grund af dets høje selektivitet er dette medium ideelt til såning af prøver med blandet flora, hvor tilstedeværelsen af Staphylococus aureus, som den største patogen i denne slægt, søges.
I denne forstand er en af dets hyppigste anvendelser i den mikrobiologiske analyse af pharyngeal ekssudater og næseudladningsprøver, især til påvisning af asymptomatiske S. aureus-bærere.
Nogle lande har implementeret denne analyse som et obligatorisk krav for folk, der ønsker at arbejde som fødevareleverandører.
Denne kontrol forhindrer kontrahering af mennesker, der er bærere af S. aureus, og dermed undgår massiv madforgiftning på grund af forbruget af mad, der er kontamineret med stafylokokk enterotoxin.
Det kan også være inkluderet i podning af sårinfektioner, blodkulturer, CSF, bronchoalveolær skylning, blandt andre.
Saltet mannitol-agar er nyttigt til re-isolering af kolonier fra urinkulturer fra CLED-agar eller blodagar, hvis gram har afsløret gram-positive klynger af cocci.
Det er også gyldigt i mikrobiologisk analyse af mad, drikkevand, jord, blandt andre anvendelser.
QA
Når en batch af plader med salt mannitolagar er blevet tilberedt, anbefales det at udføre en kvalitetskontrol. Kontrolstammer sås for at vise, om der er vækst eller ej.
Kendte Staphylococcus aureus-stammer kan bruges som en positiv kontrol. Det skal vokse tilfredsstillende med at udvikle gule kolonier, og mediet bliver også den samme farve.
Ligeledes er det praktisk at indbefatte en kendt stamme af Staphylococcus epidermidis. Det skal vokse tilfredsstillende med at udvikle lyserøde kolonier, og mediet forbliver den samme farve eller mørkere til en stærkere lyserød.
Som negativ kontrol bruges stammer, der ikke bør vokse på dette medium. For eksempel kan en kendt stamme af Escherichia coli eller Klebsiella pneumoniae dyrkes. Det forventede resultat er fuldstændig hæmning, dvs. ingen vækst.
Derudover skal en uinokuleret plade inkuberes. I det bør der ikke være nogen vækst eller farveændring.
Det er vigtigt, at pladen ikke bruges, hvis der er tegn på forringelse, såsom forurening, dehydrering, misfarvning, blandt andre.
Endelige tanker
Når du bruger salt mannitol agar medium, er der nogle vigtige aspekter at overveje:
- At få en vækst af gule kolonier indikerer ikke, at det er Staphylococcus aureus. Det skal huskes, at nogle stammer af Enterococcus er i stand til at vokse i dette medium og fermentere mannitol såvel som visse sporformende Gram-positive stænger.
Derfor er det vigtigt at udføre en Gram på kolonien og en test for katalase.
På den anden side må det overvejes, at andre Staphylococcus-arter end aureus også er i stand til at fermentere mannitol. Derfor er det vigtigt at subkulturere kolonien til en næringsmedium for at tage derfra og udføre koagulasetesten.
Blandt Staphylococcus-arter af klinisk betydning for mennesker, som fermenterer mannitol, er: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, blandt andre.
Andre kan give en variabel reaktion, dvs. undertiden positiv og undertiden negativ. Nogle er S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, blandt andre.
-Det anbefales ikke at tage kolonier direkte fra mannitol-agar for at udføre koagulasetesten, da mediets høje saltkoncentration kan forstyrre resultatet.
-Findeligt anbefales det at inkubere pladerne podet med salt mannitol i op til 48 timer, da nogle stammer af S. aureus langsomt kan fermentere mannitol, selvom dette ikke er meget hyppigt.
Referencer
- Britannia Laboratories. Salt mannitol agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
- "Salt mannitol-agar". Wikipedia, The Free Encyclopedia. 31. oktober 2018, 19:08 UTC. 17. januar 2019, 20:55, tilgængelig på: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, Redaktion Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Argentina. Redaktionel Panamericana SA
- BD Laboratories. BD Mannitol Salt Agar. 2013. Tilgængelig på: bd.com.