Den agar Salmonella Shigella også kendt som SS-agar er et selektivt og differentielt medium moderat, specielt designet til isolering af enteropatogene bakterier af slægterne Salmonella og Shigella, såvel miljømæssige prøver, såsom klinisk.
SS-agar har en kompleks sammensætning; Det består af kødekstrakt, pepton, lactose, galdesalte, natriumcitrat, natriumthiosulfat, jerncitrat, agar, neutral rød, lysegrønt og destilleret vand. I betragtning af dens store selektivitet kan der sås prøver med rigelig blandet flora.
SS-agar med kolonier af Salmonella sp. Kilde: Manurx27, fra Wikimedia Commons
I mikrobiologilaboratorier er Salmonella-Shigella-mediet i vid udstrækning brugt til at undersøge tilstedeværelsen af Salmonella og Shigella i diarré afføringsprøver, spildevand, drikkevand og mad.
Nogle gange er det nødvendigt at bruge præberikningsbuljong (lactosebuljong) og berigelsesbuljong (selenitcystinbuljong) for at genvinde stammer af Salmonella.
Disse trin er påkrævet, når der er mistanke om eksistensen af Salmonella i en meget lav mængde, eller hvor stammen kan misbruges af processer, der er typiske for industriel produktion, hovedsageligt forarbejdede fødevarer. Det tilrådes også at berige afføringsprøver fra patienter, der er blevet behandlet med antibiotika.
Efterfølgende kan den berigede bouillon podes på Salmonella-Shigella-agar og andre lignende medier, såsom xylose-agar, lysin-deoxycholat (XLD) og enterisk Hektoen-agar (HE).
Basis
Hver bestanddel af kulturmediet Salmonella-Shigella har en bestemt funktion, og blandingen som helhed giver det de egenskaber, der karakteriserer det.
Nærende kraft
Kødekstrakt og pepton (fordøjet med kasein og animalsk væv) tilvejebringer de nødvendige næringsstoffer (nitrogener, kulstof og vitaminer) til udvikling af mikroorganismer, der er i stand til at tolerere resten af komponenterne.
Konsistens
Agar-agaren er ansvarlig for at give mediet den faste konsistens.
Selektiv
Dette medium er meget selektivt, fordi det indeholder galdesalte, natriumcitrat og lysegrønt. Derfor hæmmer det væksten af alle Gram-positive bakterier og de fleste Gram-negative baciller, inklusive nogle coliforms.
Mens bakterier af slægten Salmonella og nogle Shigella-stammer understøtter disse forbindelser.
Hovedsagelig er slægten Salmonella meget modstandsdygtig over for galdesalte, så meget, at de er i stand til at leve i galdeblæren hos nogle bærerpatienter, der konstant kaster bakterierne i deres afføring.
Differential
Laktose er det fermenterbare kulhydrat, der hjælper med at differentiere laktosegæringsstammer fra ikke-fermenterende stammer. Denne egenskab bevises ved tilstedeværelsen af pH-indikatoren, der i dette medium er fenolrød.
Laktosegæringsstammer giver røde kolonier, mens ikke-fermenterende stammer er farveløse. Denne egenskab er vigtig, da Salmonella og Shigella ikke gærer lactose.
På den anden side indeholder dette medium natriumthiosulfat som en kilde til sulfid og jerncitrat som en kilde til jern. Begge forbindelser er i stand til at differentiere bakterier, der er i stand til at producere hydrogensulfid. Disse reagerer på dannelse af et synligt, uopløseligt, sort jernsulfidudfældning.
Denne egenskab findes i nogle stammer af slægten Salmonella. Normalt er deres kolonier flade farveløse med en sort prik i midten af det. Resten af Salmonellas ikke producerer H 2 S og udvikle sig som farveløse kolonier.
På den anden side er kolonier af slægten Shigella flade farveløse uden sorte.
Forberedelse
Dette medium er meget enkelt at tilberede.
Afvej 63 g af det dehydrerede kommercielle medium og opløses i en liter destilleret vand. Varm opløsningen, og omrør. Blandingen kan koge i op til minutter.
Dette medium må ikke autoklaveres. Efter opløsning serveres det direkte på enkelt- eller dobbeltsterile plader.
Når de størkner, arrangeres de omvendt på blodplader og opbevares i køleskab (2-8 ° C) indtil brug.
Mediet efter tilberedning skal forblive ved pH 7,2 ± 0,2 og med en orange-rød farve.
Det er vigtigt at lade pladerne opvarme, før prøverne podes. Den originale prøve kan sås direkte ved at udlede materiale på en del af agaren og derefter strebe derfra.
I tilfælde af brug af berigede bouilletter skal du passere en del af seleniet og så med en drigalski-spatel.
Inkuber ved 37 ° C i 24 timer i aerobiose.
Husk, at antallet af gram, der skal vejes, og mediets endelige pH-værdi kan variere fra et kommercielt hus til et andet. Den midterste base bringer altid indikationerne for dens forberedelse.
Brug
Det bruges ofte i afføringskulturanalyse og i den mikrobiologiske undersøgelse af spildevand, drikkevand og fødevareprøver.
Ofte fremstilles dobbeltplader, på den ene side anbringes Salmonella-Shigella-agar og på den anden XLD-agar.
Begrænsninger
-Nogle Shigella-stammer vokser ikke i dette medium. Derfor anbefales det ikke til primær isolering af denne slægt.
-Ikke hver gennemsigtig koloni med sort center er tegn på Salmonella; Biokemiske test skal udføres for at identificere korrekt, da kolonierne i nogle Proteus-stammer ikke kan skelnes fra Salmonellas.
-Dehydratiseret medium skal passe på eksponering for miljøet, da det er meget hygroskopisk. Derfor skal det opbevares i et tørt og godt lukket miljø. Åben i meget korte perioder.
-Overalt kan galdesalte i mediet udfælde og danne et billede, der ligner en mått i agaren, men dette påvirker ikke resultaterne.
-Nogle Shigella-stammer kan langsomt fermentere laktose.
QA
For at bevise, at mediet fungerer korrekt, anbefales det at plante kendte eller certificerede kontrolstammer og observere, om væksten opfylder de forventede egenskaber.
Til dette kan stammer af E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium eller Enterococcus faecalis anvendes.
De forventede resultater er:
Enterobacter og Klebsiella ------ store kolonier og røde eller lyserøde mucoider.
Shigella flexneri ---------- gennemsigtige eller farveløse flade kolonier.
Salmonella typhimurium ------ farveløse kolonier med sorte centre.
Enterococcus faecalis -------- total hæmning.
Referencer
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Salmonella-Shigella agar. 2009. Tilgængelig på: f-soria.es
- BD-laboratorium. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Tilgængelig på: bd.com
- Britannia Laboratories. Salmonella-Shigella Agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
- Valtek-diagnostik. Salmonella-Shigella Agar (SS Agar). 2010. Fås på: andinamedica.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.