BLODAGAR: BEGRUNDELSE, ANVENDELSER OG KLARGØRING - BIOLOGI - 2025

Den blodagar er et fast dyrkningsmedium beriget forskellen men ikke-selektivt. Det bruges til nyttiggørelse og vækst af en lang række mikroorganismer fra kliniske prøver eller til subkulturer.

Klassisk blodagar bør inkluderes til podning af de fleste kliniske prøver, der modtages i laboratoriet; bortset fra afføringsprøver, hvor det ikke er nyttigt, medmindre det er forberedt med visse ændringer.

Blodagarplade

Dette dyrkningsmedium består dybest set af en beriget base-agar og 5% blod. Agarbasen kan variere alt efter behov, men den vil hovedsageligt være sammensat af peptoner, aminosyrer, vitaminer, kødekstrakt, natriumchlorid, agar, blandt andre.

Hvad angår blod, er det normalt påkrævet at have kontakt med et vivarium for at få blod fra dyr, såsom får, kanin eller hest. Dette er dog ikke altid muligt, og menneskeligt blod bruges undertiden.

Blodagarmedium kan fremstilles i laboratoriet eller kan købes færdigfremstillet fra dedikerede virksomheder. Fremstillingen af ​​dette medium er en af ​​de mest delikate, enhver uforsigtighed i dens forberedelse vil resultere i en forurenet batch.

Derfor skal alle mulige forholdsregler tages, og i slutningen skal der udføres en kvalitetskontrol ved at inkuberes ved 37 ° C 1 plade for hver 100, der er klargjort.

Basis

Staphylococcus aureus dyrket på blodagar. Nathan Reading på Flickr Nathan R. på Twitter, via Wikimedia Commons Det er allerede nævnt, at blodagar har kendetegnende for at være et beriget, differentielt og ikke-selektivt medium. Grundlaget for hver af disse egenskaber forklares nedenfor.

Blodagar er et beriget medium, fordi det indeholder 5-10% blod på en agarbase som dets vigtigste tilsætningsstof. Begge forbindelser indeholder mange næringsstoffer, og denne egenskab gør det muligt for de fleste dyrkbare bakterier at vokse i det.

Denne vækst sker uden begrænsninger; af denne grund er det ikke-selektivt. Hvis der imidlertid sættes forbindelser til dette medium, der forhindrer vækst af nogle mikroorganismer og favoriserer andre, bliver det selektivt. Dette er tilfældet, hvis der tilføjes visse typer antibiotika eller svampemidler.

Ligeledes er blodagar et differentielt medium, da det giver os mulighed for at skelne mellem 3 typer bakterier: beta-hemolytisk, alfa-hemolytisk og gamma-hemolytisk.

Betahæmolytika er dem, der har evnen til at lysere eller nedbryde røde blodlegemer fuldstændigt og danne en klar glorie omkring kolonierne, derfor producerer de ß eller ß-hemolyse, og mikroorganismerne kaldes ß-hæmolytisk.

Eksempler på ß-hæmolytiske bakterier er Streptococcus pyogenes og Streptococcus agalactiae.

Alfa-hæmolytika er dem, der udfører delvis hæmolyse, hvor hæmoglobin oxideres til methemoglobin, hvilket skaber en grønlig farve omkring kolonierne. Dette fænomen kaldes α eller α -hemolyse, og bakterier klassificeres som α - hæmolytiske.

Eksempler på a-hæmolytiske bakterier er Streptococcus pneumoniae og Streptococcus fra viridans-gruppen.

Endelig er der de såkaldte gamma-hæmolytiske eller ikke-hæmolytiske bakterier. Disse vokser på agaren uden at skabe ændringer på den, en effekt kendt som y -hemolyse, og mikroorganismerne er y -hemolytiske.

Eksempel på y-hæmolytiske bakterier: nogle stammer fra gruppe D Streptococcus (Streptococcus bovis og Enterococcus faecalis).

Applikationer

Blodagarkulturmediet er et af de mest almindeligt anvendte i mikrobiologilaboratoriet.

Blandt mikroorganismer, der er i stand til at vokse på blodagarmediet, er: strenge aerobe, fakultative, mikroaerofile, anaerobe, gram-positive eller gram-negative bakterier, hurtigtvoksende eller langsomtvoksende bakterier.

Nogle ernæringsmæssigt krævende eller hårde bakterier vokser også såvel som svampe og gær. Ligeledes er det nyttigt til subkulturering eller genaktivering af stammer, der er metabolisk meget svage.

Valget af blodtype og base-agar vil imidlertid variere afhængigt af den sandsynlige mikroorganisme, der mistænkes for at komme sig, og den anvendelse, som pladen skal bruges til (kultur eller antibiogram).

Valg af blodtype

Blodet kan være lam, kanin, hest eller menneske.

Det mest anbefalede er lammeblod med nogle undtagelser. For eksempel at isolere Haemophilus-arter, hvor det anbefalede blod er hest- eller kaninblod, da lammeblod har enzymer, der hæmmer faktor V.

Den mindst anbefalede er menneskelig, men det er den mest anvendte, måske fordi det er den nemmeste at få.

Blodet skal defibrineres, opnås uden nogen form for tilsætningsstof og fra sunde dyr. Ved anvendelse af humant blod skal flere faktorer tages i betragtning:

Hvis blodet kommer fra personer, der har haft bakterielle infektioner, vil de have specifikke antistoffer. Under disse forhold vil væksten af ​​nogle bakterier sandsynligvis blive hæmmet.

Hvis det fås fra blodbanken, indeholder det citrat, og visse bakterier vokser muligvis ikke i dens nærvær. På den anden side, hvis blodet kommer fra patienter, der tager antibiotika, kan væksten af ​​modtagelige bakterier hæmmes.

Og hvis blodet kommer fra en diabetiker, påvirker overskydende glukose den rette udvikling af hæmolysemønstre.

Valg af basisagartype

Basisagaren, der bruges til fremstilling af blodagar, kan være meget bred. Blandt dem er: næringsstofagar, hjerneinfusionsagar, trypticase sojaagar, Müeller Hinton agar, Thayer Martin agar, Columbia agar, Brucella agar, Campylobacter agar osv.

Anvendelse af blodagar i henhold til det basemedium, der bruges til dets fremstilling

Ernæringsagar

Denne base er den mindst anvendte, da den hovedsageligt vil vokse ikke-krævende bakterier, såsom enteriske baciller, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, blandt andre. Det anbefales ikke at isolere Streptococcus.

Brain Heart Infusion Agar (BHI)

Det er en af ​​de mest anvendte som basis for blodagar, fordi den indeholder de nødvendige næringsstoffer til vækst af de fleste bakterier, herunder Streptococcus sp og andre krævende bakterier. Selvom det ikke er passende at observere mønstre af hæmolyse.

Lammets blod bruges generelt med denne base.

Blodagarvarianter kan også fremstilles, hvor andre forbindelser tilsættes for at isolere visse mikroorganismer. F.eks. Kan hjerneinfusion agar suppleret med kaninblod, cystin og glukose bruges til at isolere Francisella tularensis.

Mens det med cystint Tellurit er nyttigt til isolering af Corynebacterium diphteriae. Humant eller lammeblod kan bruges.

Med den første beta-hæmolyse vil blive set på som en smal glorie, mens med den anden halo vil være meget bredere.

Ligeledes bruges denne base sammen med bacitracin, majsstivelse, hesteblod og andre berigelse (IsoVitaleX) til isolering af slægten Haemophilus sp fra åndedrætsprøver.

Hvis kombinationen af ​​antibiotika chloramphenicol - gentamicin eller penicillin - streptomycin med hesteblod tilsættes, er den også ideel til isolering af krævende patogene svampe, selv med et højere udbytte end Sabouraud-glukoseagar. Det er især nyttigt til isolering af Histoplasma capsulatum.

Trypticase soja agar

Denne base er den mest anbefalede til en bedre observation af hæmolysemønsteret og til udførelse af diagnostiske tests såsom optoquine taxa og bacitracin. Det er den klassiske blodagar, der bruges rutinemæssigt.

Med denne base kan du også forberede den specielle blodagar til Corynebacterium diphteriae med cystint Tellurit og lammeblod .

Ligeledes er kombinationen af ​​denne agar med lammeblod plus kanamycin-vancomycin ideel til vækst af anaerober, især Bacteroides sp.

Müeller Hinton-agar

Denne base suppleret med blod bruges til at udføre antibiogrammet af hurtige mikroorganismer, såsom Streptococcus sp.

Det er også nyttigt til isolering af bakterier, såsom Legionella pneumophila.

Thayer Martin Agar

Dette medium er ideelt som base for blodagar, når der er mistanke om Neisseria-slægt, især Neisseria meningitidis, da N. gonorrhoeae ikke vokser på blodagar.

Det bruges også til at teste for følsomhed over for Neisseria meningitidis.

Columbia agar

Denne base er fremragende til podning af gastriske biopsiprøver til Helicobacter pylori.

Mediet fremstilles ved at tilsætte 7% lamblod defibrineret med antibiotika (vancomycin, trimethoprim, amphotericin B og cefsulodin) for at begrænse væksten af ​​andre typer bakterier, der kan være til stede.

Denne samme base suppleret med humant eller lammeblod, nalidixinsyre og colistin er nyttig til isolering af Gardnerella vaginalis. Det er også ideelt til vurdering af den antimikrobielle følsomhed over for antibiotika af den samme mikroorganisme.

Derudover bruges det til fremstilling af blodagar til dyrkning af anaerober, tilsætning af aminoglycosider og vancomycin.

Denne base giver mulighed for korrekt observation af hæmolysemønstre.

Brucella agar

Dette medium, der bruges som base for blodagar sammen med tilsætning af K-vitamin, er ideelt til dyrkning af anaerobe bakterier. I dette tilfælde anbefales brugen af ​​lammeblod.

Campylobacter agar

Campylobacter agar suppleret med 5% fåreblod og 5 antibiotika (cephalothin, amphotericin B, trimethoprim, polymyxin B og vancomycin), er det medium, der bruges til at isolere Campylobacter jejuni i afføringsprøver.

Forberedelse

Hvert kommercielt hus medfører instruktionerne om at forberede en liter kulturmedium på bagsiden af ​​containeren. Tilsvarende beregninger kan foretages for at forberede den ønskede mængde afhængigt af den valgte basisagar.

Vej og opløs

Basisagaren er dehydreret (pulver), derfor skal den opløses i destilleret vand indstillet til pH 7,3.

Mængden angivet med den valgte basisagar vejes og opløses i den tilsvarende mængde vand i en kolbe, opvarmes derefter over moderat varme og blandes med roterende bevægelser, indtil alt pulveret er opløst.

Sterilisere

Når den er opløst, steriliseres den i en autoklav ved 121 ° C i 20 minutter.

Blodaggregat

Når autoklaven forlades, lad kolben afkøle, indtil temperaturen ligger mellem 40 til 50 ° C; Det er en temperatur, som den menneskelige hud understøtter, og på samme tid har agaren endnu ikke størknet.

For at gøre dette røres hætteglasset med hånden, og hvis varmen er acceptabel, er det den ideelle temperatur at tilføje den tilsvarende mængde defibrineret blod (50 ml for hver liter agar). Bland forsigtigt for at homogenisere.

Overførslen af ​​blodaggregering er afgørende, for hvis det udføres, når mediet er meget varmt, bryder de røde blodlegemer ned, og mediet vil ikke blive brugt til at observere hæmolyse.

Hvis det tilsættes for koldt, klumper det sig, og mediets overflade vil ikke være glat for at tillade korrekt score.

Hæld i petriskåle

Serveres i sterile petriskåle umiddelbart efter homogenisering af blodet. Cirka 20 ml hældes i hver petriskål. Denne procedure udføres i en laminar flowhætte eller i nærheden af ​​brænderen.

Når der serveres blodagar i petriskålene, skal der ikke forblive luftbobler på overfladen af ​​pladen. Hvis dette sker, føres flammen af ​​Bunsen-brænderen hurtigt over pladen for at fjerne dem.

Pladerne fik lov at størkne og opbevares i køleskab (2-8 ° C), der vendes indtil brug. Før du bruger blodagarpladerne, skal de hærdes (får lov til at nå stuetemperatur) for at kunne podes.

De tilberedte plader varer ca. 1 uge.

Referencer

1. Bayona M. Mikrobiologiske betingelser for kulturen af ​​Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. udgave. UCA Publications Service.
3. "Blodagar." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 10 dec. 2018, 14:55 UTC. 27. december 2018, 01:49 da.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Argentina. Redaktionel Panamericana SA
5. CEDIVET Laboratory Veterinary Diagnostic Center. Guatemala. Fås på: trensa.com.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, Redaktion Panamericana SA