TRYPTICASEIN SOJAAGAR: BEGRUNDELSE, KLARGØRING OG ANVENDELSER - BIOLOGI - 2025

Den sojaagar trypton eller Trypticase Soy Agar er et fast dyrkningsmedium, og ernæringsmæssig ikke-selektive. Det er betegnet med bogstaverne TSA for dets akronym på engelsk Trypticase Soy Agar. Det er sammensat af triptein, sojapepton, natriumchlorid og agar-agar.

På grund af sin høje ernæringskraft er den ideel til dyrkning af moderat krævende og ikke-krævende mikroorganismer. Medium uden yderligere kosttilskud anbefales ikke til primære kulturer, men det er meget nyttigt til underkultur af rene stammer og for at holde dem levedygtige blandt andre anvendelser.

Trypticasein sojaagarkiler i rør med bakelitkapper. Kilde: Foto taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil.

Denne agar tjener også som en base til fremstilling af berigede medier, såsom blodagar, især når det er nødvendigt at observere hæmolysemønstrene og montere de optoquine og bacitracin taxaer, der kræves i diagnosen henholdsvis Streptococcus pneumoniae og Streptococcus pyogenes.

På den anden side, når det kombineres med antibiotika, er det nyttigt at isolere klinisk vigtige fakultative og strenge anaerobe mikroorganismer fra prøver med blandet flora.

Endelig opfylder sammensætningen af ​​trypticasein sojaagar og dens ydeevne kravene, der er fastlagt af de forskellige farmakopéer (europæisk, japansk og nordamerikansk).

Basis

For en ordentlig udvikling af bakterier er tilstedeværelsen af ​​energiforsyning nødvendig, såsom aminosyrer, vitaminer, puriske og pyrimidiske baser.

I denne forstand tilvejebringer triptein og sojapepton disse næringsstoffer til mikroorganismer, hvilket tillader deres fulde udvikling. For hårde bakterier er det imidlertid nødvendigt at supplere denne agar med defibrineret blod eller opvarmet blod for at øge dens berigelse.

På den anden side, hvis der tilsættes antibiotika til mediet, bliver det et selektivt medium. 0,6% gærekstrakt kan også tilsættes for at favorisere isoleringen af ​​arterne af slægten Listeria, mens tilsætning af cystint Tellurit og lammeblod er ideel til Corynebacterium diphteriae.

Endelig tilvejebringer natriumchlorid den osmotiske balance til mediet, og agaren giver den faste konsistens.

Forberedelse

Trypticasein soja-agarplader

For at fremstille trypticasein sojaagar bør 40 g af det dehydrerede kommercielle medium vejes i digital skala. Det opløses i en liter destilleret vand indeholdt i en kolbe.

Blandingen får lov til at hvile i 5 minutter, og derefter føres den til en varmekilde for at hjælpe med at opløse mediet. Det omrøres ofte og koges i 1 til 2 minutter. Derefter steriliseres mediet i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

Lad afkøle til 50 ° C og fordel i sterile petriskåle. Lad størkne, vend, ordre i plaqueros og opbevares i køleskab.

Mediets endelige pH-værdi skal være 7,3 ± 0,2.

Det skal bemærkes, at farven på det dehydrerede kulturmedium er let beige og bør opbevares mellem 10 og 35 ° C på et tørt sted.

Den forberedte agar er på sin side lys gul i farve. Forberedte plader skal opbevares i køleskab (2-8 ° C) indtil brug.

Pladerne skal nå stuetemperatur inden brug.

Trypticasein sojaagarplader suppleret med blod

Blodagar fremstilles ved at tilsætte 5% defibrineret blod på tidspunktet for afkøling af trypticasein sojaagar til 50 ° C. Blandingen homogeniseres ved at rotere med blide bevægelser.

Serveres i sterile petriskåle. Den midterste farve skal være kirsebærrød.

Trypticasein sojaagarplader suppleret med opvarmet blod

For at forberede den TSA-baserede blodagar skal du fortsætte med de samme procedurer, der allerede er beskrevet, men når du forlader autoklaven, lad den hvile, indtil mediet på temperaturen er ca. 56 til 70 ° C. På det tidspunkt placeres blodet og blandes, indtil mediet bliver brunt.

Serveres i sterile petriskåle. Mediets farve er chokoladebrun.

Trypticasein Soy Agar-kiler

Agarforberedelsesproceduren er den samme som beskrevet for plader med den forskel, at i stedet for at servere mediet på Petri-skåle, fordeles det mellem 10 til 12 ml i rør med Bakelit-dæksler inden sterilisering.

Efterfølgende autoklaveres rørene ved 121 ° C i 15 minutter. Når de rejser, er de tilbøjelige med hjælp fra en støtte og får lov til at størkne.

De tilberedte kiler sås af overfladearealet og tjener til at holde visse ikke-krævende mikroorganismer levedygtige i et bestemt tidsrum.

Applikationer

Trypticasein Soy Agar bruges i følgende tilfælde:

-Som en base til at forberede den klassiske blodagar, der bruges rutinemæssigt i de fleste laboratorier.

-Isolationen af ​​krævende bakterier.

-Observation af hæmolysemønsteret.

-Udførelse af diagnostiske test.

-Som en base til fremstilling af speciel blodagar til Corynebacterium diphteriae med cystint Tellurit og lammeblod.

-Som en base til fremstilling af lamblodagar plus kanamycin-vancomycin til vækst af anaerober, især Bacteroides sp.

- Til vedligeholdelse af ikke-krævende stammer (Bacterioteca).

- Aerobt mikrobielt antal i undersøgelsen af ​​mikrobielle grænser for vand, miljø, mad og kosmetiske prøver.

sået

Prøver kan sås direkte på overfladen af ​​Trypticasein Soy Agar suppleret med blod eller andre tilsætningsstoffer. Det sås ved udmattelse.

Der henviser til, at trypticasein-sojaagarplader uden tilsætningsstoffer generelt anvendes til subkultur af mikrobielle stammer (bakterier eller gær).

QA

Sterilitetskontrol

For at kontrollere steriliteten af ​​de forskellige medier, der er fremstillet med trypticasein-sojabaseagar, anbefales følgende: fra hver forberedt batch skal 1 eller 2 uinokulerede plader eller rør inkuberes ved 37 ° C i 24 timer for at demonstrere deres sterilitet. I alle tilfælde skal det forblive uden vækst.

Hvis der findes kontaminering, skal hele partiet kasseres.

Vækstkontrol

Følgende bakteriestammer kan bruges til at undersøge, om trypticasein sojaagar fungerer korrekt: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 og Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Stammerne podes og inkuberes aerobt ved 37 ° C i 24 timer.

I alle tilfælde skal væksten være tilfredsstillende.

Svampe såsom Candida albicans Complex ATCC 10231 og Aspergillus niger ATCC 16404 kan også bruges. Man forventer god vækst for begge stammer.

Vækstkontrol og hemolysemønster af trypticasein sojaagar suppleret med blod

For at verificere den korrekte funktion af blodagaren, der er fremstillet med denne base, kan følgende stammer anvendes: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 og Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

De podes og inkuberes ved 37 ° C i mikroaerofilicitet i 24 timer.

I alle tilfælde skal vækst være tilfredsstillende under hensyntagen til, at der skal observeres beta-hæmolyse (let halo omkring kolonien) i S. pyogenes og alfa-hemolyse (grønlig halo omkring kolonien) i begge stammer af S. pneumoniae. kolonier).

Referencer

1. Wikipedia-bidragydere. Trypticase Jeg er agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 17 december 2018, 15:47 UTC. Tilgængelig på:
2. Britannia Laboratories. Triptein soja agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Tryptisk sojaagar. Fås på: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Argentina. Redaktionel Panamericana SA
5. BD Laboratories. Trypticase Jeg er Agar. 2014. Tilgængelig på:.bd.com