Den bismuth sulfit agar er et fast medium selektiv og differentieret kultur, specielt formuleret til isolering af Salmonella enterica underart enterica serotype Typhi, blandt andre arter af Salmonella. Mediet er kendt som BSA-agar for dets forkortelse på engelsk Bismuth Sulfite Agar.
Den originale formel for vismutsulfitagar blev oprettet i 1927 af Wilson og Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); det indeholdt natriumsulfit, glucose, vismutopløsning, ammoniumcitrat, jernsulfat og agar-agar.
Vækst på 48 timers inkubation af Salmonella sp på vismutsulfitagar. Kilde: Pixnio.com Forfatter: Dr. WR Erving, USCDCP
I dag er der en modifikation af det originale medium, der består af kødekstrakt, kød- og kaseinpeptoner, vismutsulfitindikator, glukose, dinatriumphosphat, jernsulfat, lysegrøn og agar-agar.
Der er mange midler til isolering af Salmonella-arter, men når det kommer til at udvinde Typhi-serotypen, har vismutsulfit-agar en bemærkelsesværdig fordel i forhold til dem, da der i det meste opnås en meget lav eller ingen nyttiggørelse af denne mikroorganisme.
Det er dog nødvendigt at bruge mere end en type medium, når man prøver at isolere enteropatogener, fordi vismutsulfitagar er mindre effektiv for andre arter af Salmonella og for slægten Shigella, som hæmmes eller udvikler sig meget dårligt. i denne agar.
Det skal bemærkes, at Typhi-serotypen af alle Salmonella-arter er en af de vigtigste enteropatogener hos mennesker, hvilket er dets eneste reservoir. Denne serovar forårsager tyfoidfeber, gastroenteritis, bakteræmi og septikæmi.
Af denne grund er det relevant at medtage denne agar ved analyse af vand, fæces eller fødevareprøver, hvor det er mistænkt at det er tilstedeværelse.
Basis
Som de fleste kulturmedier indeholder Bismuth Sulfite Agar næringsstoffer til fremme af bakterievækst, såsom peptoner og kødekstrakt. Ligeledes fungerer glukose som en kilde til energi og kulstof.
Imidlertid vil ikke alle bakterier vokse på dette medium, da Bismuth Sulfite Agar er et selektivt medium. Det indeholder forbindelser, der hæmmer væksten af Gram-positive mikroorganismer og visse Gram-negative bakterier. Disse forbindelser er: indikatoren vismuthsulfit og lysegrøn.
På sin side opretholder dinatriumphosphat mediets osmolaritet og pH.
Derudover bismuth sulfit agar er en differential medium takket være tilstedeværelsen af ferrosulfat, der viser dannelsen af H 2 S. H 2 S dannes af bakterier reagerer med ferrosulfat og danner et klart synligt uopløseligt sort bundfald.
Endelig tilvejebringer agar-agaren den faste konsistens til mediet.
Forberedelse
Vej 52,3 g af det dehydrerede medium og opløst i en liter vand. Opvarm blandingen til kogning i 1 minut under hyppig omrøring, indtil den er helt opløst. Overophedes ikke for meget. Dette medium er ikke autoklaverbart, fordi ekstrem varme skader kulturmediet.
Lad afkøle til 45 ° C, og ryst før servering i sterile petriskåle. Det anbefales at fremstille plader med god tykkelse. For at gøre dette skal der hældes 25 ml i hver plade. Lad stivne. Da det er et medium, der ikke er steriliseret, er det normalt, at dets umiddelbare anvendelse foreslås.
Imidlertid viste en undersøgelse udført af D'aoust i 1977, at der er en bedre bedring af Salmonella typhimurium og Salmonella enteritidis som bismuth-sulfit-agar-middelalder, hvilket ikke påvirker ydeevnen for serovarer Typhi og Paratyphi B.
D'aoust anbefaler at bruge pladerne på dag 4 i køling, skønt den advarer om, at efterhånden som middelalderen falder selektiviteten, og Proteus vulgaris-stammer udvikles lettere.
Af denne grund for stærkt forurenede prøver, såsom fæces, foretrækkes det at anvende frisk fremstillet medium. Brug ellers på dag 4 til forberedelsen. Andre forfattere anbefaler at bruge pladerne dagen efter deres tilberedning, opbevaret i køleskabet.
Kølede plader skal hærdes inden brug. PH i mediet bør være 7,5 ± 0,2. Det rå medium er beige, og det tilberedte medium er grøngrå opaliserende.
Applikationer
Blandt de prøver, der kan plantes i dette medium, er prøver af fæces, drikkevand eller spildevand og mad.
For at forbedre isolaterne anbefales det at udføre en præberikelsesbehandling med lactosebuljong og efter berigelse med tetrathionatbuljong eller cystinselenit-bouillon inden podning på vismutsulfitagar.
Pladerne inkuberes ved 35 ° C ± 0,2 i 24 til 48 timer i aerobiose.
Karakteristika ved kolonierne på vismutsulfitagar
Salmonella Typhi-kolonier ses typisk på denne agar inden for 24 timer med et sort centrum og omgivet af en lysegrøn glorie. Mens de inden for 48 timer bliver helt sorte på grund af dannelsen af hydrogensulfid.
-Dette medium hæmmer de fleste arter af slægten Shigella.
- S. Typhi og S. arizonae kan give meget lignende kolonier.
-De coliforme bakterier, der producerer H 2 S, såsom Proteus og Citrobacter producere kolonier ligner de i Salmonella, så det er nødvendigt at udføre biokemiske identifikationsprøver.
-En god striation skal udføres for at opnå isolerede kolonier; Det er den eneste måde at observere de typiske egenskaber ved kolonier i slægten Salmonella.
QA
Til sterilitetskontrol inkuberes en ikke-inokuleret plade ved 37 ° C, det forventes, at der ikke vil være nogen vækst eller farveændring.
Til kvalitetskontrol er kendte stammer såsom:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Escherichia coli og Shigella flexneri forventes at være delvist inhiberet ved at udvikle henholdsvis grønbrune og brune kolonier. Mens begge salmonellaer skal have en fremragende udvikling med sorte kolonier med metallisk glans, og endelig skal Enterococcus faecalis hæmmes fuldstændigt.
Referencer
- Wilson, W., & EM McV. Blair. Anvendelse af et glukosebismut sulfit jernmedium til isolering af B. typhosus og B. proteus. Journal of Hygiene, 1927; 26 (4), 374-391. Hentet fra.jstor.org
- D'aoust JY. Effekt af opbevaringsbetingelser for ydelsen af vismutsulfitagar. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Fås på: ncbi.nlm.nih.gov
- IVD Laboratories. Vismut-sulfit-agar ifølge WILSON-BLAIR. 2009. Tilgængelig på: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2).pdf
- Himedia Laboratories. Bismuth sulphite Agar. 2017. Tilgængelig på: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G og Ybarra M. Bakteriologisk kvalitet af rå gedemælk produceret i Miravalles, Puebla. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54