THAYER MARTIN AGAR: FUNDAMENT, KLARGØRING OG ANVENDELSE - BIOLOGI - 2025

Den agar Thayer Martin det er en meget nærende og solid selektivt medium til isoleringen af Neisseria meningitidis og Neisseria gonorrhoeae; både kendt som patogen eller klinisk vigtig Neisserias.

En af de vigtigste særlige egenskaber ved Thayer Martin Agar er det høje indhold af kosttilskud. Denne egenskab er vigtig, fordi Neisserias er meget krævende mikroorganismer fra ernæringsmæssigt synspunkt og derfor ikke vokser i almindelige medier.

Thayer Martin / Agar Thayer Martin forretningsmedium. Kildebillede 1: Taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil, billede 2. Pixinio.com bakteriacoloniseret, modificeret, Thayer, Martin, agar.

På den anden side, da disse mikroorganismer normalt findes i ikke-sterile områder, er tilsætningen af ​​inhibitorer nødvendig for at forhindre væksten af ​​den ledsagende flora uden at påvirke udviklingen af ​​Neisseria-slægten.

Denne agar er sammensat af GC-basisagar, hæmoglobin, yderligere ernæringstilskud og et kompleks af hæmmende stoffer (antibiotika og svampedræbende midler). De kommercielle huse sælger hvert af supplementerne separat.

Prøven, der skal sås i dette medium, afhænger af den mikroorganisme, der søges. For Neisseria gonorrhoeae er de ideelle prøver vaginale og urethrale sekretioner. For Neisseria meningitidis er de mest anvendte prøver CSF, svælg og nasopharyngeal ekssudater.

Basis

Neisserias er mikroorganismer klassificeret som irriterende, og derfor er deres isolering vanskelig. Derfor er Thayer Martín et komplekst medium, og hver af dens komponenter udfører en funktion, der er forklaret nedenfor:

GC-basisagar

GC-agar indeholder proteose-pepton, majsstivelse, natriumchlorid, dipotassiumphosphat, monopotassiumphosphat og agar-agar. Dens komponenter giver de basale næringsstoffer til mikrobiel udvikling, neutraliserer giftige fedtsyrer, hjælper med at opretholde osmotisk balance, definerer pH og giver solid konsistens til mediet.

Hæmoglobin

Hemoglobin tilvejebringer faktorer V og X (henholdsvis nikotinamidadenin-dinucleotid NAD og hemin). Af denne grund vokser Haemophilus-arter også i dette medium. Hemoglobin kan fås kommercielt i en dehydreret form, eller frisk defibrineret bovint blod kan tilsættes til mediet.

Berigelse supplement

På den anden side skal der også føjes et berigelsestilskud til Thayer-Martin-mediet, da næringsstofferne indeholdt i basisagaren ikke er tilstrækkelige til kravene i Neisseria-slægten.

Det mest almindeligt anvendte berigelsestilskud kaldes isovitalex. Det indeholder glutamin, adenin, NAD, cocarboxylase, guanin, jernnitrat, p-amino-benzoesyre, vitamin B12, thiamin og glucose. Alle disse forbindelser er nødvendige for korrekt udvikling af patogene Neisserias.

hæmmere

Da det er et meget nærende medium, bør der anvendes hæmmere, der forhindrer vækst af mikroorganismer fra den sædvanlige flora i området og således favoriserer isoleringen af ​​Neisseria-slægten.

Inhibitorkomplekset er sammensat af vancomycin, colistin og nystatin. Vancouveromycin hæmmer væksten af ​​Gram-positive bakterier, colistin forhindrer væksten af ​​Gram-negative bakterier, såsom Pseudomonas og nogle saprofytiske Neisserias, og nystatin virker på gær, såsom Candida albicans.

Imidlertid blev Thayer Martin Agar senere ændret; ændringerne bestod af tilsætning af trimethoprim, stigningen i mængden af ​​agar og tilsætning af ekstra glukose. Disse ændringer forbedrede bedring af Neisseria gonorrhoeae-arter betydeligt.

Det skal bemærkes, at trimethoprim hæmmer væksten af ​​slægten Proteus og dens deraf følgende svermdannelse. I denne forstand er det antibiotika, der giver den selektive karakter til Thayer Martin-mediet.

Forberedelse

Original Thayer Martin agar

-GC-agar

Afvej 8,2 g dehydreret GC-medium og suspenderes i 100 ml. Bland og kog i 1 minut under hyppig omrøring for at opløses helt. Steriliser blandingen i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

- 2% hæmoglobin

Suspendér 2 g dehydreret hæmoglobin i 2 eller 3 ml varmt destilleret vand, indtil der dannes en ensartet blanding. Tilsæt lidt efter lidt mere vand for at afslutte et volumen på 100 ml. Suspensionen skal være homogen inden sterilisering.

Steriliser i autoklave i 15 minutter.

-Berigelse supplement

Beregn det kommercielle hætteglas med det fortyndingsmiddel, der leveres af det samme kommercielle firma. Bland godt. Mængden af ​​fortyndingsmiddel, der skal bruges, vil blive specificeret i sætinstruktionerne.

-VCN-hæmningstilskud (vancomycin, colistin, nystatin)

Beregn hætteglasset med det fortyndingsmiddel, der leveres af det kommercielle selskab. Bland godt. Mængden af ​​fortyndingsmiddel, der skal bruges, vil blive specificeret i sætinstruktionerne.

-Forberedt

For hver 100 ml GC-agar skal du fortsætte som følger:

Når GC-agaren kommer ud af autoklaven, lad den afkøle til en temperatur på ca. 50 ° C, og tilsæt 2 ml af den tilberedte hæmoglobinopløsning, 2 ml af berigelsestilskuddet (isobitalex eller britalex) og 2 ml af hæmningstilskuddet. Bland og server i sterile petriskåle.

Lad stivne og opbevares i køleskabet, indtil brug.

Farven på det forberedte medium er kirsebærrødt. Mediets endelige pH er 7,2 ± 0,2

Ændret Thayer Martin-agar

Afvej 8,2 g dehydreret GC-medium og suspenderes i 100 ml. Tilsæt 1 g agar-agar, og tilsæt 0,3 g glucose. Bland og kog i 1 minut under hyppig omrøring for at opløses helt. Steriliser blandingen i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Forbered hæmoglobin- og berigelsestilskuddet som tidligere beskrevet.

Det anvendte suppressionstilskud er VCNT (vancomycin, colistin, nystatin, trimethoprim).

-Forberedt

Fortsæt som beskrevet for den originale Thayer Martin-agar.

Brug

Thayer Martin Agar bør få lov til at varme, før prøver strækkes. Almindeligt anvendte prøver er svælgpinde, næsepinde, vaginal, urethral og / eller rektal udflod og CSF.

Brug friske prøver og lav stærke inokuler på agaren. Prøverne podes direkte ved materialeudladning og strækkes derefter udmattelse på overfladen.

Pladerne inkuberes ved 35-37 ° C i 24 til 48 timer i en mikroaerofil krukke (5% CO ₂). Ved afslutningen af ​​inkubationstiden undersøges pladerne for små, grå og undertiden mucoid-udseende kolonier.

Udfør gram og bekræftende biokemiske test på mistænkelige kolonier.

QA

Følgende mikrobielle stammer kan bruges til kvalitetskontrol af Thayer Martin Agar.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 og Neisseria meningitidis ATCC 13090; der forventes en tilfredsstillende udvikling i begge stammer.

Følgende stammer bør også inkluderes: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 og Candida albicans ATCC 10231. I alle disse forventes en total eller delvis hæmning i dette medium.

Begrænsninger

-Vi skal huske, at bakterier, der er resistente over for de anvendte hæmmere, kan vokse i mediet.

-Der er stammer af Neisseria gonorrhoeae, der kan være følsomme over for koncentrationen af ​​vancomycin, der anvendes. Af denne grund anbefales det at bruge chokolade-agar suppleret med isovitalex, men uden hæmmere.

-Der er stammer af gær, der er resistente over for nystatin, der kan vokse i dette medium og forstyrre isoleringen af ​​patogene Neisserias, især gonococci.

Referencer

1. Valtek Diagnostic Laboratories. Thayer-Martin Agar. 2016. Fås på: com
2. Britannia Laboratories. Thayer Martin Medium Ændret. 2010. Tilgængelig på: britanialab.com
3. Wikipedia-bidragydere. Thayer-Martin agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 26. oktober 2017, 16:33 UTC. Fås på: wikipedia.org 4. Åbnede 28. februar 2019.
4. Britannia Laboratories. GC-agar. 2010. Tilgængelig på: britanialab.com.
5. Laboratorier BBL ™ Medium berigelse til hurtige mikroorganismer. 1999. Fås på: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.