LYSGRØN AGAR: BEGRUNDELSE, KLARGØRING OG ANVENDELSER - BIOLOGI - 2025

Den strålende grønne agar er et solidt kulturmedium med høj grad af selektivitet. Det bruges udelukkende til isolering af stammer af slægten Salmonella, men der er nogle undtagelser, såsom typhi- og paratyphi-arter, der ikke vokser på dette medium.

Søgningen efter slægten Salmonella forekommer hyppigt i afførings-, vand- eller fødevareprøver. I denne forstand kan dette medium være meget nyttigt. Denne agar blev oprettet i 1925 af Kristensen, Lester og Jurgens, senere blev den ændret af Kauffmann.

Lysegrøn agar. Fermentering og ikke-fermenterende kolonier. Kilde: MJ Richardson / Invisible Worlds-udstilling - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Creative Commons License.

Det er sammensat af pluripeptoner fra peptisk fordøjelse af dyrevæv og pancreas fordøjelse af kasein, det indeholder også gærekstrakt, natriumchlorid, lactose, saccharose, fenolrød, lysegrøn og agar-agar.

Det er kendetegnet ved at være et temmelig uvurderligt miljø for de fleste bakterier, hvilket favoriserer væksten af ​​Salmonella, men nogle coliformer er i stand til at eksistere i den og udvikle sig svagt.

Det er vigtigt at bemærke, at slægten Shigella og hverken Salmonella typhimurium eller Salmonella paratyphi vokser på dette medium. Derfor, hvis du ønsker at isolere disse mikroorganismer, bør andre medier bruges, f.eks. XLD-agar.

Basis

Lysegrøn agar

Hver af komponenterne, der udgør mediet, udfylder en bestemt funktion, der bestemmer agarens egenskaber og egenskaber.

Pluripeptoner og gærekstrakt er kilden til næringsstoffer, hvorfra mikroorganismer tager nitrogen og mineraler, der er nødvendige for deres udvikling. Laktose og saccharose er energikilder for mikroorganismer, der er i stand til at fermentere dem.

Lysegrønt er det hæmmende stof, der forhindrer vækst af Gram-positive bakterier og et stort antal Gram-negative mikroorganismer.

Natriumchlorid tilvejebringer osmotisk stabilitet til mediet. Mens fenolrødt er pH-indikatoren, bliver det farve, når der påvises syreproduktion fra kulhydratfermentering.

Ikke-fermenterende kolonier af lactose og saccharose vokser på dette medium i en lyserød eller gennemsigtig hvid farve, på en rød baggrund. For eksempel bakterier af slægten Salmonella.

Mens lactose- eller saccharosegærende bakterier, der er i stand til at vokse på dette medium, udvikler gulgrønne eller gulgrønne kolonier på en grøngrøn baggrund. F.eks. Escherichia coli og Klebsiella pneumoniae.

Bright Green agar (BGA) varianter

Der er andre varianter af lysegrøn agar; Novobiocin Brilliant Green Glucose Agar og Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose (NBGL) Agar.

Novobiocin Bright Green Glucose Agar

Indeholder Trypticase Soygargar, ferrisk ammoniumcitrat, natriumthiosulfat Pentahydrat, fenolrødt, glukose, lysegrønt, Novobiocin og destilleret vand.

Det bruges til isolering af Salmonella-kolonier fra afføringsprøver.

I dette tilfælde er lysegrøn og novobiocin de hæmmende stoffer, der forhindrer vækst af Gram-positive bakterier og nogle Gram-negative mikroorganismer.

Natriumthiosulfat er kilden til sulfid, og ferrecitrat er kilden til jern, begge er nødvendige for at afsløre hydrogensulfidproduktion gennem dannelsen af ​​et sort ferrinsulfidpræcipitat.

Glukose er det gærende kulhydrat, og phenolrødt er pH-indikatoren.

På dette medium udvikler Salmonella-kolonier sig store med et sort centrum omgivet af en rødlig glorie og efterfulgt af et klart synligt område. Nogle stammer af Citrobacter freundii producerer kolonier, der er identiske med Salmonella.

Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose Agar (NBGL)

Dette medium indeholder trypticase soja-agar, ferri-ammoniumcitrat, natriumthiosulfat, lactose, glycerol, lysegrøn, novobiocin og destilleret vand.

Forskellen mellem dette medium og det foregående er, at glukose er substitueret med lactose, og glycerol og phenolrød anvendes ikke.

Mediet bruges også til at isolere Salmonella-arter, kolonierne udvikler sort på grund af produktionen af ​​hydrogensulfid.

Kun kolonier, der ikke producerer syre fra glycerol eller lactose opnå tilstrækkelig H ₂ S produktion, fordi lave pH interfererer med H ₂ S dannelse. Dette resulterer i farveløse kolonier for de fleste arter Proteus og citrobacter.

Forberedelse

-Vægt 58 gram af det kommercielt opnåede dehydratiserede medium. Tilsæt den til en liter omdestilleret vand. Bland, lad stå et par minutter, og anbring blandingen på en varmekilde, indtil den er helt opløst.

-Autoklave ved 121 ° C i 15 minutter, må ikke overskride steriliseringstiden.

- Lad det hvile og serveres, mens det er varmt i sterile petriskåle. Den endelige pH-værdi skal være 6,9 ​​± 0,2.

-Lad størkne og opbevares i køleskabet indtil brug. Før podning skal pladerne tage stuetemperatur.

-Pulvermediet er grøn i farve, og tilberedt tager en orange-brun eller rødgrøn farve, afhængigt af pH og det kommercielle selskab. En meget brun farve er tegn på, at agaren var overophedet.

-Når agaren er størknet anbefales det ikke at omarbejde, da mediet forringes.

Anvendelser / applikationer

Dette medium bruges til at søge efter stammer af slægten Salmonella fra afføringsprøver og mejerimad.

Da det er et temmelig ugjestmildt miljø, tilrådes det at så et rigeligt inokulum, hvis den direkte prøve bruges. Ellers bør en forberigelse og berigelse af prøverne udføres inden sådning i dette medium.

Da nogle stammer af Salmonella hæmmes eller vokser med vanskeligheder, anbefales det at ledsage dette medium med andre selektive agarer til Salmonella.

Hver koloni med en typisk Salmonella-karakteristik skal underkastes biokemiske test for at kunne identificere den definitivt.

QA

For at teste det gode præstation af det lysegrønne agarmedium kan ATCC-stammer bruges til at observere deres udvikling på det.

De hyppigste stammer, der anvendes til kvalitetskontrol, er: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus 65

De første 3 skal give lyserøde eller gennemsigtige hvide kolonier på en rød baggrund. Salmonella med god udvikling og Proteus med ringe eller regelmæssig vækst.

For Klebsiella og Escherichia forventes gulgrønne kolonier med gul baggrund, og i tilfælde af Shigella og Staphylococcus bør de hæmmes.

Det dehydrerede medium skal opbevares ved stuetemperatur på et tørt sted, fordi mediet er meget hygroskopisk.

Referencer

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Brilliant Green Agar. 2009
2. Britannia Laboratory. Bright Green Agar. 2015.
3. BD-laboratorium. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, Redaktion Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Argentina. Redaktionel Panamericana SA