VOGEL-JOHNSON AGAR: BEGRUNDELSE, FORBEREDELSE OG ANVENDELSER - BIOLOGI - 2025

Den agar Vogel-Johnson er et fast medium selektiv og differentieret kultur, specielt formuleret til isoleringen af Staphylococcus aureus. Dette medium blev skabt af Vogel og Johnson i 1960 fra modificeringen af ​​tellurit glycinagar formuleret i 1955 af Zebovitz, Evans og Niven.

Modifikationen bestod i at øge koncentrationen af ​​mannitol, der var til stede i mediet, og i inkorporeringen af ​​en pH-indikator. Den aktuelle formel er sammensat af triptein, gærekstrakt, mannitol, dipotassiumphosphat, lithiumchlorid, glycin, phenolrød, agar, 1% kalium Tellurit-opløsning og vand.

Kilde: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Det skal bemærkes, at der er andre medier, der er selektive til isolering af S. aureus som Vogel-Johnson-agar, såsom salt mannitol-agar og Baird Parker-agar. I denne forstand kunne det siges, at grundlaget for Vogel-Johnson-agar er en blanding mellem salt mannitol-agar og Baird Parker-agar.

I den første adskilles S. aureus-kolonierne ved at fermentere mannitolen og omdanne pH-indikatoren til gul. På den anden side er S. aureus på den anden side karakteriseret ved at reducere tellurit til tellur og danne grå til sorte kolonier. Begge egenskaber observeres i Vogel-Johnson agar.

Dette medium er, ligesom dets modparter, nyttigt til påvisning af Staphylococcus aureus i fødevareprøver, sanitære kontroller af industriprodukter og i kliniske prøver.

Basis

Næringsforsyning

Vogel-Johnson-medium indeholder triptein og gærekstrakt; Begge stoffer tilvejebringer langkædede aminosyrer, der tjener som kilder til kulstof og nitrogen, der er nødvendige for bakterievækst. Bakterier, der er i stand til at vokse i dette medium, vil tage næringsstofferne fra disse stoffer.

Selektiv kraft

Vogel-Johnson-agar er i stand til at hæmme væksten af ​​Gram-negative bakterier og endda nogle Gram-positive bakterier, hvilket favoriserer udviklingen af ​​koagulasepositive stafylokokker. De hæmmende stoffer er kalium Tellurit, lithiumchlorid og glycin.

Differentialkraft

De stoffer, der fremstiller dette differentielle medium, er mannitol og kalium-tellurit. Mannitol er et kulhydrat, og når det fermenteres produceres syrer, der får mediet til at blive fra rød til gul, hvilket sker takket være tilstedeværelsen af ​​den røde fenol pH-indikator.

Mens den farveløse tellurit når den reduceres til frit metallisk tellur, tager en mørkegrå til sort farve.

Staphylococcus aureus fermenterer mannitol og reducerer tellurit til tellur. Af denne grund er de typiske S. aureus-kolonier i dette medium grå eller sort omgivet af et gult medium.

Bakterier, der vokser i dette medium og ikke reducerer tellurit eller gæring mannitol, vil danne gennemsigtige kolonier omgivet af et rødfarvet medium, endnu mere intens end den originale farve på grund af alkaliseringen af ​​mediet ved hjælp af peptoner.

På den anden side vil bakterier, der reducerer tellurit, men ikke fermenterer mannitol, vokse som grå eller sorte kolonier omgivet af et dybt rødt medium.

Hvis mediet blev fremstillet uden tilsætning af kalium Tellurit, ville S. aureus-kolonier udvikle sig som gule kolonier, omgivet af gult medium, som i salt mannitol-agar.

Osmotisk balance og størkningsmiddel

Dipotassiumphosphat opretholder mediets osmotiske balance og justerer pH til neutralitet 7.2. Mens agaren giver den faste konsistens til kulturmediet.

Forberedelse

Kalium Tellurit-opløsning 1% vægt / volumen

Denne opløsning er ikke inkluderet i det dehydrerede medium, da den ikke kan steriliseres i en autoklav. Af denne grund fremstilles den separat og tilsættes til det allerede steriliserede medium.

Nogle kommercielle huse sælger den brugsklare 1% kalium-tellurit-løsning. Hvis du vil forberede dig på laboratoriet, skal du fortsætte som følger:

Vej 1,0 g kalium Tellurit, og mål 100 ml destilleret vand. Opløs kalium-tellurit i en del af vandet, og udfyld derefter mængden af ​​vand, indtil den når 100 ml. Steriliser opløsningen ved filtreringsmetode.

Vogel-Johnson Agar Base Medium

Vej 60 g af det dehydrerede medium, og opløs i 1 liter destilleret vand. Blandingen opvarmes til koges for at hjælpe med til fuldstændig opløsning. Under opløsningsprocessen omrøres mediet ofte.

Steriliser i autoklave ved et tryk på 15 pund og 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven, og lad den hvile, indtil mediet når en temperatur på ca. 45 til 50 ° C. Tilsæt 20 ml af den tidligere tilberedte 1% kalium Tellurit-opløsning.

Bland og hæld i sterile petriskåle. Lad størkne og ordre omvendt på pladeholdere for senere at opbevare i køleskabet, indtil brug.

Det færdige medias endelige pH-værdi skal være 7,2 ± 0,2.

Inden du så en prøve, skal du vente til pladen når stuetemperatur.

Farven på det forberedte medium er rød.

Brug

Selvom det kan bruges til isolering af S. aureus i enhver type prøver, bruges det hovedsageligt til mikrobiologisk analyse af farmaceutiske produkter, kosmetik og mad.

Det anbefales, at inokulatet er tæt. Såning kan udføres ved at score med et platinahåndtag eller med overflade med en Drigalski-spatel.

Plader inkuberes ved 35-37 ° C i 24 til 48 timers aerobiose.

QA

Følgende kontrolstammer kan bruges til at udføre kvalitetskontrol på Vogel-Johnson medium:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071.

Det forventede resultat er som følger: for S. aureus stammer væksten tilfredsstillende med sorte kolonier omgivet af gult medium. For S. epidermidis regelmæssig vækst med gennemskinnelige eller sorte kolonier omgivet af rødt medium.

Ligeledes forventes total hæmning for E. coli og delvis eller total hæmning for Proteus mirabilis; hvis den vokser, vil den gøre det sparsomt, og kolonierne vil være sorte omgivet af en rød farve.

Referencer

1. BD Laboratories. VJ (Vogel og Johnson Agar). 2006. Tilgængelig på: bd.com
2. Britannia Laboratories. Vogel-Johnson Agar. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
3. Britannia Laboratories. Kalium-tellurit. 2015. Tilgængelig på: britania.com
4. Himedia Laboratory. Vogel- Johnson Agar Medium. 2018. Tilgængelig på: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Vogel- Johnson Agar Base. Merck Microbiology Manual. 12. udgave, s. 502-503. Tilgængelig på: Brugere / Team / Downloads
6. Wikipedia-bidragydere, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipedia gratis en encyklopædi, tilgængelig på: wikipedia.org.
7. Venezuelansk Standard Covenin 1292-89. (1989). Foods. Isolering og tælling af Staphylococcus aureus. Fås på: sencamer.gob.ve