XLD AGAR: BEGRUNDELSE, FORBEREDELSE OG ANVENDELSER - BIOLOGI - 2025

Den XLD agar eller Xylose Lysin desoxycholat agarmedium er en selektiv og differentieret fast kultur til isolation af enteropatogener. Taylor designet XL agar (Xylose, Lysine) formlen for at forbedre isoleringen af ​​Shigella slægten.

Han observerede, at denne slægt blev hæmmet i de fleste medier beregnet til isolering af enteropatogener. Derefter blev natriumdeoxycholat, natriumthiosulfat og ferriammoniumcitrat tilsat for at øge dets selektivitet. Denne formel har vist sig at være nyttig til både isolering af Shigella og Salmonella.

Forskelle i kolonierne Shigella, Salmonella og coliforms på XLD-agar. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Kilder: A. Af: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, ph.d. Audra Marsh, høflighed: Public Health Image Library B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Af: CDC / Dr. JJ landmand, høflighed: Public Health Image Library

XLD-agar er sammensat af gærekstrakt, natriumdeoxycholat, xylose, lysin, lactose, sucrose, natriumthiosulfat, jern-ammoniumcitrat, natriumchlorid, phenolrød og agar. XLD agar og SS agar duo bruges i de fleste bakteriologilaboratorier til undersøgelse af fækale prøver for Shigella og Salmonella.

Andre laboratorier foretrækker kombinationen af ​​CHROMagar Salmonella og XLD-agar, blandt andre tilgængelige muligheder. Disse duoer kan tilberedes i dobbelt petriskåle. På den ene side placerer de XLD-agar og på den modsatte side det andet valgte medium.

Basis

-Næringskraft

XLD-agar har gærekstrakt, der fungerer som en kilde til næringsstoffer til mikroorganismerne, der vokser på denne agar. Derudover giver tilstedeværelsen af ​​kulhydrater (xylose, saccharose og lactose) energi til de bakterier, der kan fermentere dem.

-Selektivitet af mediet

Som et hæmmende stof præsenterer det natriumdeoxycholat; Dette forhindrer vækst af Gram-positive bakterier, hvilket giver mediet en selektiv karakter.

-Differentiel magt

Typiske Shigella-kolonier

Som allerede nævnt indeholder XLD-agar xylose; Dette kulhydrat fermenteres af alle bakterier, der vokser i dette medium med undtagelse af Shigella-slægten.

Dette er et af de kendetegn, der giver det dens forskellige karakter, da Shigella-kolonierne adskilles fra resten ved at udvikle røde kolonier, mens de andre bakterier producerer gule kolonier.

Typiske kolonier af Salmonella

Slægten Salmonella fermenterer også xylose, hvilket oprindeligt genererer gule kolonier. Efter udtømning af kulhydrat-xylosen angriber den imidlertid lysin for dens enzymlysin-decarboxylase. Dekarboxyleringen af ​​lysin genererer alkalier, der gør farven på kolonien og det omgivende medium til det originale røde.

Denne opførsel udføres kun af Salmonella, da coliformerne, der dekarboxylerer lysin, ikke kan alkalisere mediet. Dette skyldes, at coliforme også fermenterer den tilstedeværende lactose og saccharose; derfor er produktionen af ​​syrer meget høj, hvilket efterlader den gule koloni i disse bakterier.

Det skal bemærkes, at slægten Salmonella ikke fermenterer saccharose eller lactose.

Produktion af H

XLD tillader agar også påvisning af H ₂ S- producerende Salmonella-arter; Til dette er det afhængig af kilden til svovl, der er repræsenteret af natriumthiosulfat og en reaktionsudvikler, der er jern (ammoniumcitrat).

Sidstnævnte reagerer med H ₂ S (farveløs gas) og danner et synligt uopløseligt sort præcipitat af jernsulfat. I denne forstand er egenskaberne ved salmonella-kolonierne røde med et sort centrum.

Det skal bemærkes, at for H ₂ S dannelsesreaktionen at forekomme, er der behov alkalisk pH. Det er derfor, andre Enterobacteriaceae denne form H ₂ S ikke kan gøre så dårligt i dette miljø, da den høje surhed fremstillet ved fermentering af kulhydrater inhiberer eller hindrer reaktionen.

-Natriumchlorid, agar og phenolrødt

Endelig opretholder natriumchlorid den osmotiske balance; agar er størkningsmidlet, og fenolrød detekterer pH-ændringer, der vender farven på kolonierne og mediet.

Forberedelse

Afvej 55 g dehydreret XLD-medium og opløst i 1 liter vand. Varm op og omrør blandingen, indtil den når kogepunktet. Må ikke overophedes, da varme skader mediet og skaber et bundfald, der ændrer morfologien i typiske kolonier.

Dette medium må ikke autoklaveres. Ved opløsning skal det ledes til et vandbad ved 50 ° C. Ved afkøling skal det serveres direkte på sterile petriskåle. De kan hældes i enkeltplader eller dobbeltplader. De lader stivne og opbevares i køleskabet indtil brug.

Temperatør inden brug. Da det er et ikke-sterilt medium, anbefales det at forberede det tæt på brugsdato.

Mediets endelige pH skal være 7,4 ± 0,2. Farven på det fremstillede medium er orange-rød, gennemskinnelig uden bundfald.

Hvis du har Xylose Lysine (XL) base agar, kan du tilføje natriumdeoxycholat, natriumthiosulfat og jernammoniumcitrat. På denne måde opnås XLD-agarformlen.

Applikationer

XLD-agar bruges til genopretning af enteropatogener, hovedsageligt af slægten Shigella og sekundært af slægten Salmonella. Det er nyttigt til vurdering af afførings-, vand- og fødevareprøver.

Typer af prøver

Afføring

Afføringsprøver kan sås direkte på XLD-agar, hvilket giver en god fordeling af materialet for at opnå isolerede kolonier.

For at forbedre nyttiggørelse af Salmonella kan XLD-agar strimles fra Salmonella berigelsesmedier.

Mad

I tilfælde af mad kan berigelsesbuljong til Salmonella og Shigella anvendes. Til Salmonella kan du bruge selenit cystin bouillon, lysegrøn tetrathionat bouillon, blandt andre.

I tilfælde af Shigella kan den beriges med Shigella bouillon med 0,5 u / ml novobiocin, inkuberes ved 42 ° ± 1 ° C i 16-20 timer.

Vand

I vandanalyse anbefales blandt andet membranfiltreringsteknikken og brugen af ​​XLD-agar.

Plantnings- og identifikationsbetingelser

Det podede medium inkuberes aerobt ved 35 ° C i 24 til 48 timer.

De typiske kolonier af hver slægt observeres, de mistænkelige kolonier skal gennemgå biokemiske test for at identificere dem.

QA

For at evaluere kvalitetskontrollen af ​​mediet kan følgende bakteriestammer anvendes: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, ProteC mir7130, Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Slægten Salmonella er kendetegnet ved at præsentere røde kolonier med en sort center eller helt sorte kolonier på dette medium. Mens Shigella-slægten kolonierne skal være røde, det vil sige mediets farve.

I tilfælde af Escherichia coli forventes det at være fuldstændigt eller delvis inhiberet; hvis det vokser er kolonierne gule. For Proteus mirabilis forventes dårlig vækst med lyserøde kolonier med eller uden et sort centrum. Til sidst vokser Klebsiella slægten som gule kolonier.

Endelige tanker

XLD-agar er meget udbredt i bakteriologilaboratorier for sin høje effektivitet til nyttiggørelse af Shigella og har også en god nyttiggørelse af slægten Salmonella.

Rall et al. (2005) i deres arbejde med titlen "Evaluering af tre berigelsesmedier og fem faste medier til påvisning af Salmonella i fjerkræ" demonstrerede, at af de 3 testede klassiske medier (lysegrøn agar, SS-agar og XLD-agar), XLD-agar havde den bedste gendannelsesgrad.

Genvindingsprocenten var som følger: 13,8% for lysegrøn agar, 27,6% for SS og 34,5% for XLD. Rambach-agar med 48% genvinding og CHROMagar med 79,3% blev kun overgået af kromogene medier.

Referencer

1. Madbårne sygdomme. Shigellose. Fås på: anmat.gov.ar
2. "XLD-agar." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 9. feb. 2019, 11:46 UTC. 10. april 2019, 19:25 wikipedia.org
3. BBL Laboratories. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (biplat). 2013 Tilgængelig på: bd.com
4. Lab. Neogen. XLD-agar. Fås på: foodsafety.neogen
5. Francisco Soria Melguizo Laboratory. XLD Agar. Tilgængelig på:
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Evaluering af tre berigelsesmedier og fem pletteringsmedier til påvisning af Salmonella hos fjerkræ. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147-150. Fås fra: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.