PEPTONVAND: BEGRUNDELSE, KLARGØRING OG ANVENDELSE - BIOLOGI - 2025

Den peptonvand er en flydende berigelse medium, ikke-selektive, hovedsagelig som fortyndingsmiddel fødevareprøver eller andre materialer. Dette medium fra et kemisk synspunkt er meget enkelt, det indeholder kødpepton, natriumchlorid og vand.

Det har en bestemt ernæringsværdi, hvilket gør det muligt at berige prøven. Hvis der er misbrugte bakterier, har dette medium magt til at reparere levedygtighed. Det er især nyttigt til nyttiggørelse af bakterier, der tilhører Enterobacteriaceae-familien.

Peptonvand i flasker. Kilde: MSc. Marielsa gil

I tilfælde af nyttiggørelse af Salmonellas anbefales brugen af ​​den buffeterede peptonvandvariant; Dette tjener som et præberikelsesmedium for prøven, i dette tilfælde indeholder det andre elementer, såsom dinatriumphosphat og dipotassiumphosphat.

Normalt fremstilles peptonvand ved neutral pH, men der er andre varianter, hvor det er nødvendigt, at pH er 8,5 ± 0,2 (alkalisk), fordi bakterierne, der skal isoleres, er alkalifile, såsom Vibrio cholerae.

Desuden kan dette medium anvendes som et basemedium til kulhydratfermenteringstest.

Basis

Peptoner tilvejebringer de næringsstoffer, der kræves til bakterievækst, især nitrogen og kortkædede aminosyrer, mens natriumchlorid opretholder osmotisk balance.

Desuden gør mediet det muligt at sprede, homogenisere og reparere bakterieceller, der er blevet beskadiget af industrielle processer.

Som fortyndingsmiddel er det ideelt, effektivt at erstatte fysiologisk opløsning (SSF) eller phosphatbufferopløsning (PBS).

Bakterievækst ses tydeligt ved at observere dens uklarhed.

Forberedelse

Hjemmelavet tilberedning (ikke kommercielt)

Afvej 1 g pepton og 8,5 g natriumchlorid, opløst i 1 liter destilleret vand. PH skal justeres til 7,0. Til dette kan 1N natriumchlorid anvendes.

Fremstilling under anvendelse af kommercielt medium

Vej 15 g af det dehydrerede medium og opløst i en liter destilleret vand. Homogeniser blandingen. Om nødvendigt koges blandingen i 1 minut for at hjælpe den totale opløsning. Serveres i 100 ml flasker eller 10 ml rør efter behov. Autoklave ved 121 ° C i 15 minutter.

Afkøles, og brug eller opbevar i køleskab. Mediets endelige pH er 7,2 ± 0,2.

Farven på det dehydratiserede medium er lys beige, og det tilberedte medium er lys gul.

Forberedelse til gæringstest

Til det foregående præparat - inden sterilisering - skal kulhydratet sættes til en slutkoncentration på 1% plus Andrade-indikatoren (sur fuchsin) eller phenolrød (0,018 g / L). Rørene skal være udstyret med en Durham-klokke for at observere gasdannelse.

Andre varianter af peptonvand

Bufret eller bufret peptonvand

Det indeholder enzymatisk hydrolysat af casein, natriumchlorid, dihydrogenkaliumphosphat og natriumhydrogenphosphatdodecahydrat. Den endelige pH er 7,0 ± 0,2.

Til dets fremstilling vejes 20 g af det dehydrerede medium og opløses i 1 liter destilleret vand. Lad det hvile i cirka 5 minutter. Opvarm i 1 minut, indtil den er helt opløst.

Hæld i egnede krukker efter behov. Steriliser ved hjælp af autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

-Alkalisk peptonvand

Vej 25 g af det dehydratiserede medium og opløst i 1 liter vand. Fortsæt som beskrevet ovenfor. PH varierer fra 8,3 til 8,7.

Brug

Inokulatet udføres ved at placere prøven direkte.

Det bruges til at fortynde prøver, især når det mistænkes for, at der kan være beskadigede bakterier. Normalt er fortyndingerne 1:10 og 1: 100.

Inkuber i 24 timer i aerobiose ved 35-37 ° C.

Afføringsprøver

Til afføringsprøver til Salmonella anbefales brug af bufret eller bufret vand som et præberikningsmedium.

Gør følgende for at gøre dette:

Hvis afføringen dannes, tag 1 g prøve. Hvis de er flydende, tag 1 ml fæces og suspenderes i et rør med 10 ml buffeteret peptonvand. I tilfælde af rektal pinde, tøm det materiale, der er indeholdt i vatpinden, i røret med bufret peptonvand.

I alle tilfælde skal prøven blandes og homogeniseres meget godt.

Inkuber ved 37 ° C i 18 til 24 timer. Efterfølgende subkultur i en berigelsesbuljong, såsom selenitcystinbuljong eller tetrathionat-bouillon ved 37 ° C i 18-24 timer mere. Endelig kultiveres i selektive medier til Salmonella, såsom SS-agar, XLD-agar, Hektoen-agar, blandt andre.

Madprøver

Peptonvand anvendes som et berigelsesmedium eller som et simpelt fortyndingsmiddel, men hvis man søger Salmonella-arter, bruges det som et præberikelsesmedium som allerede beskrevet.

I mad fortsættes som følger:

For faste fødevarer vejes 25 g af prøven, og for flydende fødevarer måles 25 ml af den. Placer nævnte portion i kolber indeholdende 225 ml peptonvand. Bland og prøven homogeniseres.

Hvis den mikrobielle belastning mistænkes for at være høj, kan serie- eller decimalfortyndinger udføres for at lette tællingen af ​​kolonidannende enheder (CFU).

Antallet af fortyndinger afhænger af typen af ​​prøven og analytikernes oplevelse.

Hvis der tværtimod er mistanke om, at den mikrobielle belastning er meget lav, er det ikke nødvendigt at udføre fortyndinger. Derefter subkultur på selektive medier.

I tilfælde af mad fra havet, såsom skaldyr, fisk blandt andre på jagt efter Vibrio cholerae eller andre arter af Vibrio, bør peptonvand justeret til pH 8,5 (alkalisk peptonvand) anvendes.

QA

Fra hver forberedt batch skal et til to rør inkuberes uden inokulering i 24 timer i aerobiose ved 37 ° C. Ved afslutningen af ​​tiden skal der ikke observeres nogen uklarhed eller farveændring.

Kendte kontrolstammer kan også bruges til at evaluere deres effektivitet:

Til dette kan følgende bakteriestammer anvendes: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

I alle tilfælde forventes en tilfredsstillende mikrobiel udvikling, som observeres af mediet uklarhed.

Begrænsninger

-Dehydratiseret medium er meget hygroskopisk, så det skal holdes væk fra fugt.

-Mediet bør ikke bruges, hvis der observeres nogen form for forringelse.

-Dehydratiseret kulturmedium skal opbevares mellem 10 - 35 ° C

-Det forberedte medium skal opbevares i køling (2-8 ° C).

Referencer

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B og Velázquez O. Teknikker til mikrobiologisk analyse af fødevarer. 2009, 2. udg. Fakultet for kemi, UNAM. Mexico. Version til manualer og dokumentadministrator (AMyD) fra Fakultet for kemi, UNAM 1. Tilgængelig på:
2. Britannia Laboratories. Buffeteret peptonvand. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Peptonvand. Fås på: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Peptonvand. 2015. Tilgængelig på: britanialab.com
5. Merck Laboratories. Bufret peptonvand. Fås på: merckmillipore.com
6. Conda Pronadisa Laboratories. Alkalisk peptonvand. Fås på: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 udg. Redaktionel Panamericana SA Argentina.